單側睪丸扭轉復位后對側睪丸組織CGRP和LDH的測定

包小周，秦樂，陳肖鳴

(溫州醫學院附屬育英兒童醫院 小兒外科，浙江 溫州 325035)

單側睪丸扭轉好發于青春前期男性，除引起同側睪丸受損外，也可累及對側睪丸[1]。降鈣基因相關肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）是目前已知的生物體內最強大的舒血管活性肽[2]，近幾年來，被廣泛應用于腦、心、肝、腎等組織器官的缺血再灌注損傷研究；但其在睪丸組織中的作用罕見報道。本研究擬通過動物實驗觀察單側睪丸扭轉復位后CGRP及乳酸脫氫酶（lactate dehydrojgenase，LDH）在對側睪丸組織中濃度變化，了解CGRP在對側睪丸中的作用。

1 材料和方法

1.1 動物分組 選取處于青春發育前期28～30 d的健康雄性SD大鼠30只，體重150～200 g，隨機分為假手術組、扭轉復位組和扭轉切除組，每組10只。

1.2 動物模型建立 所有大鼠均在術前以25%烏拉坦行腹腔注射全麻。假手術組將左側陰囊打開，分離暴露左側睪丸后即予固定縫合。扭轉復位組和扭轉切除組先依Turner法[3]建立左側睪丸扭轉模型：左下腹小切口，游離左側睪丸，切斷睪丸引帶，分離周圍組織至附睪頭，睪丸順時針扭轉720 °，固定扭轉側睪丸防止自然復位，維持4 h后原切口打開，扭轉復位組復位扭轉睪丸并固定后關閉切口；扭轉切除組不予復位，直接切除扭轉的睪丸及附睪，結扎精索末端后縫合切口。

1.3 標本制備 各組大鼠分別于術后4 h和24 h時以快速脫頸法處死5只，采集未扭轉側睪丸標本用于制備組織勻漿。

1.4 檢測方法 按試劑盒要求制備組織勻漿；以ELISA法測定CGPP、LDH濃度。均嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.5 統計學處理方法 多組比較用單因素方差分析，組間兩兩比較方差齊性用LSD檢驗，方差不齊性用Dunnett T3檢驗。

2 結果

2.1 相對于假手術組與扭轉切除組，扭轉復位組的對側睪丸CGRP、LDH濃度（見表1）均在術后4 h起有明顯升高（P<0.05），而假手術組與扭轉切除組的同類指標比較差異無顯著性。

表1 大鼠CGRP及LDH濃度值

2.2 Tuner法是較為成熟的睪丸扭轉模型制作方法，經不斷改良，現有操作有創口小、出血較少的優點，故本實驗中無大鼠死亡；扭轉復位組大鼠煩躁不安明顯，其余2組未見此現象。麻醉蘇醒后各組大鼠飲食情況良好，按統一條件飼養，未使用其他藥物，但扭轉復位組大鼠煩躁不安感明顯，其余2組未見此現象。

2.3 術后4 h及24 h時取材時見扭轉側睪丸呈黑紫色，淤血腫脹明顯（見圖1）；各組對側睪丸肉眼可見改變不甚明顯（見圖2）；既往曾行類似實驗并行病理檢查，示扭轉側睪丸出現大面積凝固性壞死，而對側睪丸亦有不同程度受損[4]。

圖1 扭轉側睪丸

圖2 對側睪丸

3 討論

組織低氧時可導致乳酸堆積，從而引起LDH濃度上升，因此LDH水平可以反映組織的低氧程度。本實驗中，相比于扭轉切除組與假手術組，扭轉復位組LDH的濃度4 h時即見明顯升高，示對側睪丸組織存在低氧情況。我們此前的類似實驗也已證實對側睪丸存在一定程度的缺血再灌注損傷[4，6]，與本實驗結果相符。

而CGRP作為目前已知的生物體內最強大的舒血管活性肽，在周圍神經系統中廣泛分布，具有傳遞傷害性感覺信息、參與痛覺信息傳入的調制、擴張組織血管等作用[2]。本實驗中，相比于扭轉切除組與假手術組，對側睪丸組織中的CGRP 4 h時即開始升高，間接說明對側睪丸存在明顯的血管擴張現象。國內陳林等[5]應用B超觀察單側睪丸扭轉復位后對側睪丸血流情況，發現直至復位后72 h，對側睪丸的血供仍遠高于對照的假手術組，與本實驗結果相符。

據本實驗中對側睪丸CGRP、LDH的濃度增高，以及既往實驗中發現的對側睪丸存在缺血再灌注損傷的情況，我們推測由于單側睪丸扭轉復位后對側睪丸存在一定程度的缺血、低氧，引起局部包括自由基、一氧化氮、乳酸等在內的大量有毒物質積聚[6]，進而通過刺激廣泛分布于對側睪丸的周圍神經而導致局部CGRP大量釋放，引起對側睪丸血管擴張，血供增加；就血管擴張本身而言，我們推測可能為一種拮抗組織缺血低氧的反應性保護機制，具體尚待進一步實驗證實。

值得指出的是，CGRP與LDH兩項指標在假手術組與扭轉切除組對側睪丸的比較中差異均無顯著性，提示扭轉切除組中大鼠的對側睪丸未受明顯影響。我們在既往的類似研究中也已證實扭轉切除組的對側睪丸無明顯受損[6]。因此，我們認為在證實單側睪丸扭轉并出現嚴重壞死的情況下，不予復位而行睪丸切除可能對另側睪丸組織有保護作用。

[1] 林濤,李旭良. 單側睪丸扭轉后對另側睪丸影響的研究進展[J].臨床小兒外科雜志,2003,2(6):442-443.

[2] 謝樂斯,鄭林豐,曾志成,等. 大鼠脊神經后根切斷后脊髓和背根神經節CGRP的表達變化 [J].神經解剖學雜志,2007,23(2):209-213.

[3] Turner TT, Bang HJ, Lysiak JL, et al.The molecular pathology of experimental testicular torsion suggests adjunct therapy to surgical repair [J].J Urol,2004,172(6):2574-2578.

[4] 王浩,秦樂,陳肖鳴,等. 大鼠一側睪丸扭轉后切除對另側睪丸組織的保護作用 [J].溫州醫學院學報,2009,39(3):209-211.

[5] 陳林,詹維偉,呂琛,等. 單側睪丸扭轉后對側睪丸損傷的超聲造影實驗研究 [J].中華超聲影像學雜志,2008,17(11):998-1001.

[6] 秦樂,林孝坤,陳肖鳴,等. 一氧化氮在大鼠單側睪丸扭轉復位后對側睪丸早期損傷中的作用 [J].溫州醫學院學報,2008,38(3):197-199.