女貞子超臨界CO2萃取物急性毒性及30 d飼養試驗的研究

董 茜，單安山，劉化偉，呂文龍

（東北農業大學動物營養研究所，哈爾濱 150030）

近年來中藥飼料添加劑的研發速度越來越快，由于飼料產業的規模越來越大，加工飼料的產量越來越大，所以引發大面積飼養中毒的潛在性也在增大。由于食物鏈的蓄積作用，飼料添加劑對人群健康的影響也是一個不可回避的問題。由于女貞子食用毒理學安全性未見有全面評價的報道，因此，本文結合女貞子的產品開發,按國家有關飼料添加劑規范，對其做了安全毒理學評價。為女貞子作為綠色飼料添加劑在畜牧生產中的合理使用提供理論依據，同時也為中草藥飼料添加劑的標準化、產業化推廣應用，以及利用營養手段調控畜產品的質量和安全提供理論依據。

馬德瑩等研究表明[1]，日糧中添加1%的女貞子可顯著提高蛋雛雞血清新城疫抗體水平與脾淋巴細胞轉化率。李群道等研究表明，日糧中添加1%的女貞子能提高肉仔雞的抗體效價，顯著提高了雞脾臟淋巴細胞在ConA誘導下的增殖反應[2]。郭曉秋等研究表明，女貞子水提物可提高肉仔雞抗氧化功能[3]。楊銀平等研究發現，在日糧中添加女貞子萃取物可以極顯著提高蛋雞的產蛋率[4]。石莉莎等研究表明，日糧中添加1%的女貞子可明顯提高血清中腫瘤壞死因子[5]。陳鵬等研究表明，飼料中添加女貞子原粉可以提高肉仔雞的生長性能[6]。通過以上研究可知，女貞子具有增強機體生長性能，畜禽免疫機能以及提高機體抗氧化能力等作用。

為了進一步研究女貞子超臨界CO2萃取物的性質及其作用，使其能夠安全有效的用于臨床，按照國家衛生部頒布《食品安全性毒理學評價程序和方法》GB15193進行[7]，對其進行了急性毒性試驗，30 d飼養試驗。

1 材料與方法

1.1 受試藥物

女貞子購于哈爾濱藥材批發市場，過60目篩加工粉碎為細末，將女貞子置于65℃烘箱中烘干，置于東北林業大學進行超臨界CO2萃取。

1.2 受試動物

昆明系小鼠40只，體重為18～22 g，雌雄各半，由哈爾濱市漢方試驗鼠類養殖所提供。Wistar大鼠：體重為70～100 g，雄雌各半，由哈爾濱獸醫研究所提供。試驗前均在實驗條件下飼養觀察1周。

1.3 急性毒性試驗

取健康小鼠40只，隨機分為4個組，每組10只，雄雌各半。試驗前禁食16 h，但不限制飲水。試驗時，按每千克體重11、13、15 g劑量，一次灌胃。給藥后立即觀察并記錄動物的外觀、行為活動、精神狀態、食欲、排便、體重和死亡情況，即使剖檢死亡動物，觀察病理變化，取病例器官做病理組織學檢查，存活動物繼續飼養1周，觀察中毒情況。試驗結束時，處死所有試驗動物，解剖檢查，比較各組試驗結果。

1.4 30 d飼養試驗

將大鼠隨機分為4組，每組12只，雌雄各半，分籠飼養。給藥前飼養1周。受試物分高、中、低劑量組，分別按每千克體重3.75、2.25、0.75 g劑量摻入正?；A日糧飼喂，對照組飼喂正?；A日糧。連續給予30 d[8]。

2 結果與分析

2.1 小鼠急性毒性試驗

結果見表1。

表1 女貞子超臨界CO2萃取物對小鼠急性毒性試驗結果Table 1 Acute toxicity of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum in mice

試驗期間，動物的精神狀態良好，采食量正常，飲水正常，毛色正常，體重正常，未見動物有任何中毒表現，無一動物死亡。表明受試物對雌雄小鼠經口LD50均大于15 g·kg－1·BW－1，按急性毒性分級標準屬于無毒級物質。

2.2 30 d飼養試驗

2.2.1 動物一般表現

試驗過程中動物無死亡，精神狀態良好，毛色正常，采食正常，飲水正常，無異常行為表現。

2.2.2 各劑量組對動物生長活動的影響

結果見表2。由表2可知，各組動物生長活動正常。受試物劑量組雌、雄動物體重相比較無明顯差異，最高劑量組與對照組差異無顯著性（P＞0.05）。由此表明，女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠的體重無影響。

由表3和4可知，女貞子超臨界CO2萃取物摻入飼料中飼喂給大鼠30 d，動物未出現異?，F象，各受試物劑量組動物體重增長、采食量、總的食物利用率均無明顯差異，并且高劑量組動物體重增長、采食量、總的食物利用率與對照組比較無顯著差異（P＞0.05），說明女貞子超臨界CO2萃取物對動物進食及生長狀況無不良影響。

表2 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠體重的影響（±S）Table 2 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on body weight changes in rats（±S）

表2 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠體重的影響（±S）Table 2 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on body weight changes in rats（±S）

性別Sex劑量（g）Dose動物數（只）Number體重（g）Weight 0雌Female第2周Week 2 150.8±13.20 154.5±10.34 149.8±2.50 154.8±10.59 151.5±13.33 156.8±6.18 150.0±15.34 156.3±6.95 0.75 2.25 3.75 0 0.75 2.25 3.75 6 6 666 6 6 6第0周Week 0 85.0±14.72 86.3±13.77 81.3±6.29 83.8±11.09 86.3±13.77 88.8±13.15 87.5±17.08 85.0±12.91第1周Week 1 116.3±15.06 116.8±14.31 114.8±5.19 117.8±11.73 117.0±14.07 119.0±13.44 118.8±15.11 118.8±9.00雄Male第3周Week 3 201.5±7.85 204.3±11.30 201.0±4.32 202.8±10.21 202.0±5.34 206.3±2.50 202.8±5.32 203.3±5.44第4周Week 4 238.5±10.85 247.5±13.30 242.8±5.56 245.8±8.02 239.3±3.86 248.5±2.08 244.3±3.86 248.0±7.07

表3 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠每周采食量的影響Table 3 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on food intake in rats

表4 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠增重及總食物利用率的影響Table 4 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on food utilization in rats

2.2.3 對大鼠血常規的影響

結果見表5。

從血液常規指標統計結果可知，各受試物劑量組的血紅蛋白、紅細胞、白細胞、血小板之間差異不顯著，并且最高劑量組與對照組比較差異無顯著性（P＞0.05），亦無劑量－效應關系，而且波動數值都在大鼠血液學正常值范圍之內[9－10]，表明女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠的紅細胞數、白細胞數、血紅蛋白含量和血小板均無不良影響，無毒理學意義。

表5 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠血常規檢查結果的影響Table 5 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on hemogram in rats

2.2.4 對大鼠血清生化檢查的影響

大 鼠 血 清的ALT、 AST、 BUN、 Cr、 Glu、Alb、TP、TCH、TG測定，各受試物劑量組之間對比無顯著差異（見表6），并且最高劑量組和對照組之間差異不顯著（P＞0.05）。表明女貞子超臨界CO2萃取物對肝、腎功能、脂代謝、糖代謝均無不良影響。所測定的數值均在正常值范圍內[11]，無毒理學意義。

2.2.5 對大鼠臟器絕對重量及臟/體比的影響

結果見表7、8。

表6 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠血液生化指標的影響Table 6 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on blood components in rats

表7 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠臟器絕對重量的影響Table 7 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on absolute organ weight in rats

表8 女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠臟/體比的影響Table 8 Effects of supercritical CO2 extract of Ligustrum lucidum on the ratio of spleen to body weight in rats

由表7和8可知，各受試物劑量組之間無顯著性差異，并且最高劑量組與對照組比較差異不顯著（P＞0.05），而且均在大鼠臟器重量正常值范圍內[12]。表明女貞子超臨界CO2萃取物對實驗動物各臟器的發育以及生長無明顯影響。

2.2.6 病理組織學檢查

大體解剖肉眼所見：各試驗劑量組雌雄大鼠的心、肝、脾、腎、胃腸、睪丸和卵巢與正常對照組比較其外觀顏色和臟器大小正常，均未見明顯滲出物、增生、水腫、萎縮等病理變化。各劑量組受檢臟器均未見有統計學意義的病理變化。

3 討 論

我國是最早使用中草藥作為飼料添加劑的國家[13]，為保障使用的安全，并對女貞子超臨界CO2萃取物的進一步開發利用提供可靠的毒理學依據，我們進行了毒理試驗。結果表明小鼠經口LD50在15 g·kg－1·BW－1范圍內，屬于無毒級。女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠30 d飼養試驗結果表明，女貞子超臨界CO2萃取物對在實驗期間各劑量組的大鼠均未見異常癥狀和體征，也無死亡情況；女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠體重增長未見明顯影響；女貞子超臨界CO2萃取物各劑量組雌、雄大鼠的增重、進食量及食物利用率與對照組相比較均無顯著性差異；女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠的生長發育未見明顯影響；女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠紅細胞計數、白細胞計數、血紅蛋白和血小板未見明顯影響；女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠血液生化指標未見明顯影響。實驗結果還表明，女貞子超臨界CO2萃取物各試驗組與對照組的大鼠的血清葡萄糖、白蛋白、膽固醇、甘油三酯、尿素氮、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、總蛋白、肌酐等生化檢查結果均在正常范圍內；從女貞子超臨界CO2萃取物對大鼠組織檢查結果的影響可知，大鼠大體解剖觀察和病理組織學觀察結果均未發現異常病變。通過鏡檢可知，心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃、腸、睪丸、卵巢均未見一場病變，未見明顯不良影響。

4 結論

通過以上研究結果表明，作為飼料添加劑，從毒理學角度來看，女貞子超臨界CO2萃取物在此劑量條件下對動物是安全的，可以放心的食用。

[1]馬德瑩,單安山,李群道,等.中草藥對蛋雛雞生長性能和免疫功能的影響[J].中國獸醫學報,2005,25(1):67－70.

[2]李群道,單安山,馬德瑩,等.女貞子、五味子與寡糖配伍對肉雞生產性能和免疫功能的影響[J].畜牧獸醫學報,2005,36(4):343－347.

[3]郭曉秋,單安山,趙云,等.女貞子水提物對AA肉仔雞抗氧化指標的影響[J].動物營養學報,2007,19(1):81－85.

[4]楊銀平,單安山,張緯,等.女貞子萃取物對蛋雞生產性能、蛋品質和免疫功能的影響[C].中國畜牧獸醫學會動物營養學分會第十次學術研討會論文集,2008.

[5]石莉莎,單安山,張緯,等.女貞子對蛋雞育成期生長發育和免疫功能的影響[J].東北農業大學學報,2009,40(10):79－84.

[6]陳鵬,單安山.女貞子對肉仔雞生長性能和胴體品質的影響[J].中國飼料,2009(4):15－17.

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[9]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].2版.北京:人民衛生出版社,1991:1517－1520.

[10]崔中林.獸醫臨床診療參數值[M].北京:農業出版社,1990.

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[13]于文會,徐靜,馮國峰.促進大鼠消化功能的中藥組方篩選研究[J].東北農業大學學報,2009,40(3):75－78.