方正銀鯽的人工繁殖技術

王衛義1 王紅衛2 王世恒3*

（1.哈爾濱水產良種場 哈爾濱150076；2.中國水產科學研究院淡水漁業研究中心農業部水生動物遺傳育種和養殖生物學重點開放實驗室 江蘇無錫214081；3.哈爾濱市魚苗繁育試驗場 哈爾濱150059）

1、研究的目的與意義

方正銀鯽（Founder auratus gibelio Bloch）原種產于黑龍江省的方正縣雙鳳水庫，是我國特有的三倍體鯽魚之一。為了保護好這一寶貴的名優鯽魚，我國已將方正縣雙鳳水庫確定為國家級方正銀鯽的原種生產基地。方正銀鯽體側扁而比普通鯽高，體型短。頭小，吻鈍?？诙宋?，下唇厚，唇后溝僅限于口角，無須。眼小，位于頭側上方。背鰭具硬刺，外緣平直，后緣鋸齒粗，排列稀。胸鰭不達腹鰭。尾鰭分叉淺，上下葉末端尖。體色背部黑灰色，背鰭和臀鰭與背部色同，體側深銀白色，體側的每個鱗片邊緣或多或少顯示出飾邊。背鰭硬刺3（4）；背鰭分枝鰭條數：16～19，多數為17。第一鰓弓外側鰓耙數：44～54，多數為49。側線鱗29～32，多數為30～31。脊椎骨總數為顱后椎數、腹椎數、尾椎數之和，即：30～31＝4＋（12～13）＋14。肝臟肥大、柔軟、褐紅色，幾乎覆蓋整個腸臟，其重量占體重的6.5%～7.4%。其食性為雜食性。

方正銀鯽屬鯉形目、鯉科、鯽屬。方正銀鯽的性成熟年齡，不管在自然水體或池塘人工養殖條件下，一般都在1齡，但繁殖都要到第2年。方正銀鯽在自然水體中雄魚所占比例約為4.1%。在池塘養殖條件下，當年自交子代雄魚所占比例平均為14.1%。方正銀鯽雌魚與鯉、鯽等雄魚交配子代的雄魚所占比例，與所選交配雄魚的親緣關系遠近有一定關系。方正銀鯽的絕對懷卵量，隨著體長、體重的增長而增加。如體重16g個體的絕對懷卵量僅為3360粒，而體重達到400g的絕對懷卵量可達到8萬～9萬粒。方正銀鯽在雙風水庫的產卵期，約在5月中旬到6月初。

水溫達到14℃以上時就可產卵，在池塘條件下其產卵期一般在5月中旬前后，在長江以南地區產卵期可提前到3月底到4月初。自然水體條件下方正銀鯽分批產卵，產卵期較長，可能要1個月左右。方正銀鯽在人工催產條件下，需要1～2d將卵巢中的卵產出，而在人工擠卵情況下可以像鯉魚、鳊魚和鰱魚那樣一次將卵全部排出，即使這樣，擠出的卵也僅占卵巢的1/3～1/2。方正銀鯽有著自身的繁殖特性，是兩性型的雌核發育種群，當銀鯽卵子與同種或異種（鯉、鯽）精子受精，精子進入卵細胞內刺激卵細胞的發育，但精子的頭部并不進一步形成有功能性的雄性原核，結果只在一個雌性原核的參與下卵子進一步發育形成后代。但進入卵內的精子是卵細胞發育的必要條件。在天然水體，方正銀鯽依靠同種雄魚繁殖后代，在人工條件下，方正銀鯽可與鯉、鯽等異種雄魚繁殖后代，且后代大都為雌魚。

2、實驗材料與方法

2.1 實驗材料

2.1.1 實驗地點

黑龍江省方正縣雙鳳水庫孵化車間1號2號孵化池。

2.1.2 親魚來源

親魚取自雙鳳水庫5號親魚池。

2.1.3 實驗設備

產卵池、孵化池、親魚夾、注射器（1mL、5mL、10mL）、注射針頭（6、7、8號）、馬來酸地歐酮（DOM）和促黃體素釋放激素A2（LRH-A2）、消毒鍋、鑷子、研缽、量筒（10mL、50mL）、溫度計、秤、托盤天平、解剖盤、面盆、毛巾、紗布、藥棉、人工魚巢（鋼筋框架，0.5m×2m）、氧氣泵、pH計、篩絹網等設備和器具。

2.1.4 水源

水源來自方正縣雙鳳水庫自然水體。

2.2 實驗方法

2.2.1 成熟度鑒定

成熟雌魚頭稍大而體較狹長，個體比同齡雌魚小，腹部膨大柔軟。腹部朝上，可見卵巢流動狀。胸鰭光滑無追星，泄殖孔突出有紅點。雄魚頭稍大而體較狹長，個體比同齡雌魚小，狹窄，輕壓腹部有精液流出，胸、腹鰭和鰓蓋粗糙，有追星，內凹，無紅點。方正銀鯽親魚的鑒別見表1。

表1 方正銀鯽親魚雌、雄鑒別標準

2.2.2 扎制魚巢并消毒

方正銀鯽產粘性卵，需要有附著物（魚巢），以便受精卵粘附在上面發育。扎制魚巢的天然材料，只要質地柔軟，纖細須多，在水中易散開不易腐爛的均可應用，多用棕櫚皮。棕櫚皮必須經過水煮0.5h以上，除去單寧酸等有毒物質，使用前再用0.01%的亞甲基藍消毒1h以上，然后用清水反復沖洗將藥物洗去后晾干備用。魚巢為鋼筋框架，每片1m2（0.5m×2m），2片為一組，將消毒過的棕櫚皮縫在60目的篩絹上。

魚巢設置的方式，將帶棕櫚皮的篩絹網片鋪在孵化池的底部以全部覆蓋池底為標準，四周用網片豎立，并用帶棕櫚皮竹竿漂浮在孵化池水面，使親魚在跳躍授精時能使受精卵產在魚巢上。

2.2.3 親魚的催產

在自然條件下，當水溫上升到16℃時，方正銀鯽就可以產卵，但由于其產卵為分批性，所以很難依靠自產形成規模生產。因此，必須集中催產。集中催產的好處是可形成生產規模，出苗齊，魚苗體質健壯。

2.2.3.1 選擇的藥物及劑量

催產劑選用鯉、鯽魚的腦下垂體，每kg親魚用腦下垂體5～6mg，使用時用研缽將腦下垂體研成粉末，加入0.7%生理鹽水，配制成注射液；或用鯉、鯽魚腦下垂體1mg和LRH-A230～35ug的合劑或促黃體素釋放激素A2（LRH-A2）4ug和馬來酸地歐酮（DOM）2mg的合劑。

2.2.3.2 催產方法

雌魚采用的是在親魚胸鰭基部一次性注射到胸腔的方法。注射魚胸鰭基部的無鱗凹陷處，注射高度以針頭朝魚體前方與體軸呈45～60°角刺入，注意針不要扎得太深，約1.2cm～1.5cm，以免傷及心臟。雄魚采用的是肌肉注射的方法。注射時用親魚夾夾住親魚并使其側臥在水中，將魚的背部露出水面，在側線與背鰭間的背部肌肉進行注射。注射時，把針頭向頭部方向稍挑起鱗片刺入2cm左右，然后把注射液徐徐注入。注射完畢后迅速拔出針頭。

催產的效應時間為8～12h。注射催產劑的時間一般選在17：00～18：00，這樣，第二天清晨即可產卵，有利于接卵、換巢和人工授精?？紤]到方正銀鯽的產卵特點和實際生產需要，方正銀鯽早期的催產成功率高，到后期（6月初）由于水溫過高，卵巢過熟等種種原因，催產率明顯降低。因此，應根據苗種的需要量，集中催產3～4批，每批間隔時間不超過3～4d，在15～20d內爭取催產全部結束。

2.2.4 親魚的自然受精

將人工催產完成的親魚按雌雄1∶1的比例放入產卵池內，產卵池事先布置好魚巢，控制好水溫（23℃左右）、pH（7～8）和溶氧（6～8mg/L），并用小型水泵配合施以流水刺激，等待親魚自然產卵排精。產后捕撈親魚檢查產卵情況并計算催產率。

催產率%=（產卵雌魚數/催產雌魚數）×100。

2.2.5 受精卵的孵化過程及管理

2.2.5.1 受精卵的孵化過程

孵化是指受精卵經胚胎發育至孵出魚苗為止的全過程，這一時期叫胚胎前期。此時的胚體結構與成體相比，差異較大，體內和體表都有一些器官，如鰾、鰭等沒有形成，必須在脫膜以后繼續形成。以后的發育生長屬于胚后期。這個時期，胚體進一步增長，胸鰭長出，鰾管由中腸背壁細胞分化形成鰾，體表色素細胞逐漸增多，卵黃囊體積縮小最終消失，口張開主動攝食，并自由游動。方正銀鯽卵的孵化過程（胚胎發育）的長短與水溫有密切關系。在水溫15℃時，孵化需140h左右；水溫20℃時，需91h；水溫25℃時，需49h；水溫30℃時，需43h。水溫超過30℃以上，對胚胎發育極為不利，畸形怪胎較多。當水溫過低，則孵化時間延長，也會引起胚胎發育不正常。

根據觀察，在水溫17～19℃時，方正銀鯽胚胎發育過程為：卵受精后吸水膨脹，約1h25min形成胚盤，胚盤形成后5min開始細胞分裂。受精后4～5h發育到囊胚前期，從囊胚前期到囊胚末期需較長的時間，約需10h左右，從囊胚期到原腸期則需6h。胚軸形成后，眼及背部肌節出現，繼之耳囊形成，胚胎的各部器官漸趨完善。受精后4晝夜，胚胎活動加強，尾部擺動頻繁，不久破卵膜孵出。

2.2.5.2 受精卵的孵化期間管理

方正銀鯽孵化與四大家魚和鯉魚等相似，也要求在良好的環境條件下孵化，這些條件有水溫、溶解氧、水質、生物等。

（1）水溫

前已提到，溫度是魚類胚胎發育的重要因素，它直接影響孵化進程的長短。方正銀鯽的孵化時間要比四大家魚長，適宜孵化水溫在18～25℃之間，最適水溫為22℃左右。水溫低于18℃或高于25℃以上，都會引起胚胎發育的停滯或胚胎不健全。

（2）溶氧量

試驗證明，方正銀鯽在胚胎期尾芽出現后，耗氧量明顯增加，為早期的2倍多，到孵化期，其耗氧量達到最高峰，為早期的8倍左右。這說明水中溶解氧對胚胎發育極為重要。它們不能忍受較低的溶解氧（1.6mg／L以下），當水中溶解氧不足，局部地區魚卵過密，都能引起局部缺氧死卵，而死卵腐爛到卵膜消失，耗氧要比胚胎發育耗氧較高時呼吸的氧量大9倍以上。因此，應嚴格掌握魚卵放置密度。孵化的溶解氧，一般要求不要低于4～5mg／L。

（3）水質

要使用未被污染的水源?，F在不少的江河水被工業廢水污染，使用前要進行水質分析。因此，目前以應用地下水較好，但用前也要進行水質分析。使用時要先經曝氣、增氧和升溫。孵化用水應過濾，防止敵害生物及污物進入。

（4）清除敵害生物

小魚、蝌蚪、橈足類等對魚卵和魚苗都有嚴重的危害。防治辦法為：用水時嚴格過濾，如敵害生物混入后則用網撈除，或用90%的晶體敵百蟲使孵化用水呈0.2mg／L濃度，或使水源水成1mg／L，以殺滅蝦類和橈足類。

（5）日常管理

①測氧：每天早、晚堅持測氧，魚苗孵出前后、午夜要加測一次。測氧水應取自表層、底層和兩魚巢之間的水樣，掌握其晝夜耗氧規律，了解溶解氧最少時間，做好預測。

②調節水深和水質：魚苗池孵化，每天魚巢要調換地方，以防局部缺氧。孵化池孵化要根據測氧情況，適時排掉老水，注入新水。孵出前后，早、晚要各換水一次，最好有一個空池，倒池徹底換水最好。因為銀鯽受精卵孵化一般要4～5晝夜，這時池底積有大量污泥、死卵，耗氧極大，因此要徹底換水，以后出苗也較干凈。一些地方，先將魚巢放在一個較大的魚池（0.5畝左右），待到要孵出時，再移入孵化池。為提高池水溫度，可利用晴天氣溫高，上午將池水排掉，留下30cm水浸過魚巢，這樣可較快的提高水溫，促進胚胎發育，晚上再加水到一定深度以保持水溫。遇到寒潮，可將池水加到最深。同時每天上午要輕輕搖動魚巢，洗去附在卵上的污泥。

3、試驗結果

本次實驗歷經21d，共孵化3批魚苗。第一批出苗150萬尾，第二批出苗120萬尾。第三批出苗80萬尾。

根據親魚的發情行為的開始時間判斷催產的效應時間為16h，催產注射時間是在17：00進行的，到22：00有追逐行為。翌日早晨9：00產卵。催產率是90%，受精率是75.0%，孵化率是70.8%（表2至表7）。

表2 孵化用水的理化指標

表3 催產劑的效應時間

表4 催產率

表5 受精率

表6 孵化率的計算

表7 出膜魚苗數／40h（萬尾）

4 討論

效應時間：所謂效應時間是指注射催情劑之后到開始發情產卵所需要的時間，經注射催產劑后，親魚受到激素的作用，產生生理反應，當逐漸出現雄親魚追逐雌親魚并且越來越興奮的現象時，此時叫“發情”，也是效應時間的開始。

發情達到高峰時，發現雄親魚頂雌魚的腹部，使雌魚側臥水面，腹部和尾部激烈收縮運動，有的親魚只在水下追逐，在同一時間雌雄親魚跳躍的現象。水面時常出現波紋和泡沫，隨之逐漸激烈，魚的游速加快，浮躁不安，此時為受精的高峰期。

4.1 影響效應時間的因素

在相同的鯽魚種類，相同的注射次數，相同的水質條件下，可以看出效應時間的長短與水溫呈負相關。水溫高會縮短效應時間，相反水溫的降低會延長效應時間。這主要是由三方面因素決定的：①水溫直接作用于性腺，影響酶和激素的活性和作用。水溫高酶的活性就高，反之，活性就低。②影響性腺對腦垂體分泌的促性腺激素的敏感性。水溫高，敏感性高，反之則低。③影響垂體促性腺激素的合成和分泌。水溫高合成和分泌加快，反之緩慢。

4.2 影響人工繁殖效果的因素

選擇好親魚。選擇體質健壯、體形肥滿、無病無傷、性腺發育成熟程度好的親魚。本試驗所用的是經過篩選的親魚,從而保證了人工繁殖的順利進行。

合理布置魚巢。魚巢要鋪在產卵池的底部并全部覆蓋池底，四周也要圍好，以使魚卵能盡量多地排在魚巢上。本試驗魚巢在擺放時有空隙，致使部分魚卵排在了產卵池壁上，從而影響了實驗結果。

親魚成熟度的判斷要準確，以確定合適的藥物劑量。雄親魚從頭向尾方向輕擠腹部即有精液流出，若精液濃稠，呈乳白色，入水后能很快散開，為性成熟的優質親魚；若精液量少，入水后呈線狀不散開，則表明尚未完全成熟，若精液呈淡黃色近似膏狀，表明性腺已過熟。雌親魚腹部明顯膨大，后腹部生殖孔附近飽滿、松軟且有彈性，生殖孔紅潤則表明成熟較好；若親魚后腹部小而硬，卵巢輪廓不明顯，生殖孔不紅潤，則表明性腺成熟度不夠；若親魚腹部過于松軟，無彈性，則表明親魚性腺已退化。對成熟較好的催產親魚用藥劑量不能太大，否則易導致早產。人工催產的方法要科學合理，成熟較好的親魚用一次注射的方法，成熟不好的要分兩次注射的方法，注射的部位及深度要準確，太深會傷害魚體，太淺則會導致藥物流失而催產失敗。催產的時間掌握要準確，過早會使親魚早產而精卵成熟度不好，過晚則會使精卵過熟，在最佳的時間給親魚注射催產藥物才能使親魚能夠產出優質的精卵。催產藥物要求即配即用不能放置太久，防止變質。

加強孵化期間的管理。及時清排池中的污物保證其良好的孵化環境；清除池面的死卵防止因死卵或卵皮包裹而引起的受精卵缺氧死亡；殺滅敵害生物，使敵害能夠得到有效的預防和控制。

4.3 藥物種類的選擇

首先是對多巴胺的選擇。多巴胺的抑制作用在某些魚類是很強的，如金魚，鯉魚等，如果不注射多巴胺拮抗劑PIM和DOM，LHRH-A或其它的促性腺激素釋放激素GnRH類似物，對促使促性腺激素釋放的劑量依存反應就不能表現出來。其次是對HCG的選擇，HCG的選擇與性腺發育程度密切相關，對于性腺發育成熟度高的個體可以少用或不用，而對性腺發育較差的個體，可適當增加用量，但是因為HCG有較強的副作用，過高的劑量會導致親魚的死亡。