肝癥消膠囊中人參皂苷的含量測定

李淑賢，梁生旺

（1.廣東醫學院，廣東 東莞523808；2.廣東藥學院 中藥學院，廣東 廣州510006）

肝癥消膠囊是由人參、黃芪、醋鱉甲、土鱉蟲等中藥組成，本方具有益氣活血、護肝解毒、軟堅消癥的作用，用于防治慢性肝炎向肝纖維化發展，以及肝纖維化、肝硬化的臨床治療。人參為方中君藥，近年來，有關人參文獻報道多采用HPLC法測定其中有效成分的含量［1－5］，為了控制本品的質量，我們選擇高效液相色譜法（HPLC）測定人參中主要化學成分人參皂苷Rg1、人參皂苷Re及人參皂苷Rb1的含量，以建立合理的含量測定指標和限度標準。

1 材料與試劑

Shimadzu CLASS－VP型高效液相色譜儀（日本島津）；SPD－10Atvp紫外檢測器（日本島津）；ODS C18柱（大連依利特公司）；KQ3200DE型醫用數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；對照品：人參皂苷Rg1（批號110703－200425）、人參皂苷 Re（批號：110704－200420）、人參皂苷 Rb1（批號：110704－200420）。對照品均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇（天津四友色譜純）；乙腈（迪馬色譜純）；屈臣氏蒸餾水。肝癥消膠囊（自制，批號為080806、080810、080815）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm）；流動相為：以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1中的規定進行梯度洗脫；流速：1.0mL·min－1；柱溫：25℃；檢測波長為203nm。

表1 梯度洗脫程序

2.2 對照品溶液制備

取對照品人參皂苷Rg1，人參皂苷Re和人參皂苷Rb1置五氧化二磷干燥器中，減壓干燥48h，取出，精密稱取適量，用甲醇溶解制成每1mL含人參皂苷Rg10.142mg，人參皂苷Re 0.147mg，人參皂苷Rb10.140mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取三批樣品適量，傾出內容物，研細，取約5.0g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，加入甲醇50mL超聲提取30min，濾過，濾液蒸干，殘渣用30mL蒸餾水使溶解，轉移至分液漏斗中，加乙醚提取2次，每次15mL，棄去乙醚液，水溶液用水飽和的正丁醇提取5次（20mL，20mL，15mL，15mL，15mL），合并正丁醇液，用1%NaOH 洗滌2次（30mL，20mL），棄去堿液，正丁醇液再用正丁醇飽和水洗滌2次，每次20mL，收集正丁醇液，置蒸發皿中蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性溶液制備

按處方比例依法配制除人參以外的陰性樣品，按“2.3”項制備供試品溶液方法制備人參陰性溶液。取以上樣品進行測定，結果顯示陰性對照色譜中，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1峰附近無其他峰影響。結果見圖1。

圖1 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1的HPLC色譜

2.5 線性關系的考察

分別精密吸取人參皂苷Rg1對照品溶液、人參皂苷Re對照品溶液和人參皂苷 Rb1對照品溶液2μL、4μL、8μL、16μL、20μL，按上述的HPLC條件分析，以峰面積A對進樣量X（μg）進行線性回歸，得回歸方程分別為：人參皂苷Rg1線性方程為：Y＝24 687.6＋336 161.59X，Y＝0.999 2，線性范圍為：0.284～2.840μg／mL；人參皂苷 Re方程為：Y＝42 006.3＋326 214.661 2X，γ＝0.999 5，線性范圍為：0.294～2.940μg／mL；人參皂苷 Rb1線性方程為：Y＝234 008X－12 141，γ＝0.999 8，線性范圍為：0.280～2.800μg／mL。

2.6 精密度試驗

分別精密吸取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1對照品溶液，于測定條件下進樣10μL，分別重復進樣5次。以3種組分峰面積分別計算，結果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re及人參皂苷Rb1的RSD分別為：1.30%、0.82%和1.03%，結果表明儀器精密度良好。

2.7 重現性試驗

精密稱取肝癥消膠囊內容物（批號080806）共5份，按“2.3”項制備供試品溶液，取供試品溶液20μL，按“2.1”項色譜條件測定，按外標法以峰面積計算樣品含量。結果樣品中測得人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的平均含量分別為0.186mg／粒、0.093mg／粒和0.179mg／粒，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的RSD分別為2.64%、1.63%和1.47%。測定結果表明，本方法重現性符合要求。

2.8 穩定性試驗

精密稱取肝癥消膠囊內容物（批號080806），分別按“2.3”項制備供試品溶液，分別在0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h進樣，結果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1的RSD分別為1.43%、2.71%和1.19%。

2.9 回收率試驗

精密稱取已知含量的肝癥消膠囊樣品6份（批號080806），分別精密加入人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1對照品適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液并在上述色譜條件下測定，計算回收率，結果見表2、表3。

表2 人參皂苷Rg1和人參皂苷Re加樣回收率試驗

表3 人參皂苷Rb1加樣回收率試驗

2.10 樣品測定

取三批肝癥消膠囊內容物，分別按“2.3”項下方法進行樣品處理及測定，結果見表4、表5。

表4 樣品中人參皂苷Rg1＋人參皂苷Re的含量測定結果

表5 樣品中人參皂苷Rb1的含量測定結果

3 討論

肝纖維化是慢性肝病的一種組織病理學診斷，是肝硬化的重要病理基礎，是各種慢性肝病向肝硬化發展的必經途徑。方中人參、黃芪等中藥具有益氣補血、活血散淤作用，能起到軟堅消癥的功效。人參系方中君藥，主要含皂苷類活性成分，因此采用高效液相色譜法進行測定，參照中國藥典2005版，選定人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1為定量指標。本品人參皂苷Rg1和Re總體轉移率為50.92%，人參皂苷Rg1轉移率為52.94%；故規定本品每粒含人參以人參皂苷Rg1（C42H72O14）和人參皂苷Re（C48H82O18）的總量計不得少于0.26mg，人參皂苷 Rb1（C54H92O23）的量計不得少于0.18mg。通過三批驗證實驗，測得本品每粒含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re兩者之和平均含量為0.27mg，人參皂苷Rb1平均含量為0.20mg，可用于肝癥消膠囊的質量控制。

［1］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.北京：化學工業出版社，2005.

［2］林曉輝，張雪原.HPLC法測定心靈丸中人參皂苷Rg1、Re和Rb1的含量［J］.中國藥師，2009，12（1）：61－63.

［3］杜佳新，顧玉紅，李萌.HPLC測定益心舒膠囊中人參皂苷Rg1，Re，Rb1的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16（11）：88－90.

［4］苑雅萍，李云濤，郭佳超.HPLC測定參芪顆粒中人參皂苷Rg1，Re，Rb1的 含 量 ［J］.中 國 實 驗 方 劑 學 雜 志，2010，16（16）：74－75.

［5］李宜玲，金光洙.HPLC測定龜參口服液中人參皂苷 Rg1、Re、Rb1的含量［J］.中藥材，2010，33（5）：881－883.