高效液相色譜法測定復方磺胺甲惡唑片中SMZ、TMP的含量

呂 璐，石向群，鄭由敏，周凱鳳，孫利利

（九江學院基礎醫學院，江西 九江 332000）

高效液相色譜法測定復方磺胺甲惡唑片中SMZ、TMP的含量

呂 璐，石向群，鄭由敏，周凱鳳，孫利利

（九江學院基礎醫學院，江西 九江 332000）

目的 建立測定復方磺胺甲惡唑片中磺胺甲惡唑（SMZ）和甲氧芐啶（TMP）含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱C18（5 μm，4.6 mm ×150 mm），以0.03 mol/L磷酸（含0.2%三乙胺）-甲醇為流動相進行梯度洗脫，流速1.0 ml/min，檢測波長為 240 nm，柱溫 40℃，峰面積外標法。結果 SMZ 在 20～100 μg/ml有良好的線性，r=0.993 1；TMP 在 4～20 μg/ml有良好的線性，r=0.996 6。結論 此法簡單、專屬性強、重現性好、結果準確，可作為該片劑質量控制的參考方法。

高效液相色譜法；復方磺胺甲惡唑片；SMZ含量；TMP含量

復方磺胺甲惡唑片是臨床常用的磺胺類抗菌消炎藥，其主要成分為磺胺甲惡唑（SMZ）和甲氧芐啶（TMP）?！吨袊幍洹罚?000年版）采用等吸收雙波長分光光度法對2組份分別進行測定。另有文獻報道采用倍率減差雙波長法、三波長法、吸收度線性線合法、雙波長比值光譜法等方法測定其含量，但均存在操作或計算較為繁瑣的缺點?，F采用高效液相色譜法，對2組份SMZ、TMP同時進行測定。

1 實驗部分

1.1 儀器

高效液相色譜儀（瓦里安Varian Prostar 230 SDM/325 UV）；液相工作站（Varian Star 6.4）；電子分析天平（賽多利斯Sartorius CP324S）；高速離心機（中佳HC-2518）；超聲波清洗機（寧波新芝生物）；無油隔膜真空泵（天津奧特賽恩斯）。

1.2 試藥

對照品：磺胺甲惡唑、甲氧芐啶（中國藥品生物鑒定所提供）；復方磺胺甲惡唑片（SMZ 0.4 g、TMP 0.08 g，湖北華中藥業有限公司生產）；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

1.3 步驟與條件

1.3.1 色譜條件 色譜柱是Varian C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動相為甲醇：0.03 mol/L磷酸（含0.2%三乙胺）；以甲醇比例20%～60%梯度洗脫；檢測波長240 nm；流速1.0 ml/min；進樣量 100 μl，定量環 20μl；柱溫 40℃；樣品分析時間 10 min。

1.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取經105℃干燥至恒重的對照品SMZ 12.5 mg、TMP 2.5 mg置于25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取對照品溶液0.4 ml、0.8 ml、1.2 ml、1.6 ml、2.0 ml分別置10 ml量瓶中，加甲醇使各容量瓶中溶液的體積為3 ml，加含20%甲醇的流動相定容至刻度，搖勻，配成標1、標2、標3、標4、標5混標溶液，以 15 000 r/min 離心 10 min，取上清液進樣。

1.3.3 樣品溶液的制備 取復方磺胺甲惡唑10片，精密稱定，研細。精密稱適量(約相當于SMZ 12.5 mg、TMP 2.5 mg)置25 ml量瓶中，加甲醇適量，經超聲處理15 min后，加甲醇稀釋至刻度。搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液1.6 ml，置10 ml量瓶中，參照2.2方法定容、離心、進樣。

2 結果與討論

2.1 保留時間試驗

取標2和樣品各一份，分別按100μl進樣，按2.1色譜條件進行分析，結果標2的保留時間為SMZ 6.848 6 min、TMP 5.408 6min，樣品的保留時間為SMZ6.8453min、TMP5.4089min，其HPLC色譜圖見圖1。

圖1 對照品及樣品HPLC色譜圖

2.2 線性關系考察

分別取系列標準溶液100 μl，依次進樣，按2.1色譜條件進行分析，分別測其峰面積，采用外標法，分別以SMZ和TMP峰面積Y為縱坐標，各組份的濃度X（mg/ml）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程，相關系數及線性范圍分別為SMZ：Y=+1.650 0 e+008 x+6.636 0 e+005，r=0.993 1，線性范圍為 20～100 mg/ml；TMP：Y=+5.890 2 e+008 x+2.168 5 e+006，r=0.996 6，線性范圍為4～20 mg/ml。對照品溶液標準曲線見圖2。

圖2 對照品標準曲線

2.3 精密度試驗

取標3對照品溶液100 μl，重復進樣3次，按照2.1色譜條件進行分析，計算含量，結果見表1。

表1 精密度試驗結果

2.4 樣品含量測定

分別取3份樣品溶液進樣，按照2.1色譜條件進行分析，計算含量，結果見表2。

表2 樣品試驗結果

測得的SMZ和TMP含量分別是復方磺胺甲惡唑片標示量的94.81%和92.75%。

2.5 加標回收試驗

在樣品中加入一定量的對照品母液，配置成3份加標溶液，分別進樣，按2.1色譜條件進行分析，做加標回收試驗，計算回收率。結果見表3。

表3 加標回收試驗結果（%）

2.6 討論

2.6.1 檢測波長的選擇 復方磺胺甲惡唑片中SMZ、TMP的規格分別為4 mg/片、0.8 mg/片，含量相差較大，故本試驗選擇TMP紫外吸收度較大的波長（240 nm）為檢測波長，以提高TMP測定的靈敏度和準確性。

2.6.2 洗脫方式的選擇 本試驗以甲醇：0.03 mol/L磷酸（含0.2%三乙胺）=80：20作為流動相系統進行等度洗脫，只出現一個峰，且前沿峰明顯，產生的原因可能是柱溫低、樣品溶劑使用不當、柱過載等。采用梯度洗脫甲醇20%～50%2峰仍未分開，最后采用20%～60%甲醇梯度洗脫終使2峰完全分開。

2.6.3 流動相的組成及選擇 2005年版藥典中以水：乙腈：三乙胺=799：200：1（用氫氧化鈉試液或冰醋酸調節pH值至5.9）為流動相，等度洗脫。為提高方法環境適用性，本試驗考察了甲醇：水：冰醋酸：三乙胺 =225：345：0.5：0.2，作為流動相體系，雖然SMZ和TMP可以得到分離，但保留時間不一致；而采用甲醇：0.03 mol/L磷酸（含0.2%三乙胺）=80：20作為流動相等度洗脫，只出現溶劑峰，樣品未分離；最后采用甲醇20%～60%梯度洗脫，能使2峰達到基線分離、保留時間一致、分離度好、重現性好、結果準確，可作為該片劑質量控制的參考方法。

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1671-1246（2011）08-0110-02