飼料維生素C添加量對半滑舌鰨幼魚存活、生長、及組織中抗壞血酸含量的影響＊

李 華，王小潔，麥康森，張文兵，徐 瑋，劉付志國

（中國海洋大學海水養殖教育部重點實驗室，山東青島266003）

飼料維生素C添加量對半滑舌鰨幼魚存活、生長、及組織中抗壞血酸含量的影響＊

李 華，王小潔＊＊，麥康森，張文兵，徐 瑋，劉付志國

（中國海洋大學海水養殖教育部重點實驗室，山東青島266003）

在半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）基礎飼料中添加0、10、50、150、450和1 500mg／kg的維生素C（維生素C多聚磷酸酯形式），制成6種實驗飼料，分別對初始體質量為（4.21±0.02）g（實驗Ⅰ）、（116.93±0.91）g（實驗Ⅱ）2個規格各6組半滑舌鰨進行10周的攝食生長試驗。每組設3個重復，每個重復分別60尾（實驗Ⅰ）、18尾（實驗Ⅱ），研究飼料中維生素C對半滑舌鰨幼魚存活、生長和組織中抗壞血酸含量的影響。結果表明，實驗Ⅰ中，半滑舌鰨的存活率、增重率、特定增長率和飼料轉化率隨著飼料中維生素C添加量增加，有上升趨勢，但差異不顯著（P＞0.05）。肝臟、腎臟、肌肉中抗壞血酸含量均隨飼料中維生素C添加量增加而顯著上升（P＜0.05）；實驗Ⅱ中，半滑舌鰨的存活率、飼料轉化率隨飼料中維生素C添加量增加有上升趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），增重率和特定生長率不受飼料中維生素C顯著影響（P＞0.05）。當飼料中維生素C添加量超過50mg／kg時，隨添加量增加肝臟、腎臟、肌肉中抗壞血酸含量均顯著上升并高于對照組（P＜0.05）。以上結果表明在本實驗條件下，半滑舌鰨幼魚基礎飼料中無需添加額外的維生素C即可滿足幼魚正常生長發育的需要。

半滑舌鰨；維生素C；存活；生長；組織抗壞血酸

維生素C，或稱L－抗壞血酸，在魚類的生長過程中發揮重要作用［1－2］，可促進鐵的吸收，是魚類組織膠原蛋白合成過程中脯氨酸羥基化必需的物質，具有廣泛的生理和免疫作用，能夠促進養殖動物快速生長，緩解養殖魚類的應激狀態，增強機體抵抗病原微生物感染能力及免疫功能［3－6］。多脊椎動物具有合成維生素C的能力，但大多數魚類由于體內缺乏L－古洛內酯氧化酶，不能合成維生素C，因而必須從食物中獲?。?］。關于養殖魚類飼料中維生素C需要量已有不少報道，這些研究結果因魚的品種、維生素C劑型及評價指標不同而不盡一致。

半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）是我國第1種進行人工養殖的舌鰨科魚類，俗稱牛舌頭、鰨目、鰨米、龍利，屬鰈形目Pleuronectiformes、舌鰨科Cynoglossidae，自然分布于我國沿海海區，以渤海、黃海為多，是名貴的底棲大型魚類［8－10］。目前，由于具有良好的市場經濟價值，有“富貴魚”、“海洋中的黃金”之稱［11］。半滑舌鰨生長快，適應范圍廣，營養價值高，是我國北方沿海極具養殖潛力的海水養殖魚類之一。但是，其營養需求研究才剛剛開始起步，目前僅見蛋白質需求、飼料中適宜的脂肪及碳水化合物水平［12］，而關于半滑舌鰨維生素、礦物質等微量元素營養需要量的研究還未見報道。魚類對維生素C的需求量受不同生長發育階段的影響。在魚類生長初始階段，其生長迅速，代謝旺盛，因此需要更多的維生素C來維持其正常的生理功能［13］，較大的魚體，由于其體內貯存維生素C較多，生長慢，消耗率低，從而導致了較低的維生素C需求量［14］。本實驗研究飼料中維生素C添加水平對半滑舌鰨2個規格幼魚存活、生長及組織中抗壞血酸積累量的影響，以期為半滑舌鰨顆粒飼料配制提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗飼料

以魚粉、大豆濃縮蛋白為蛋白源，魚油、豆油、大豆卵磷脂為脂肪源，面粉作為糖源配制基礎飼料（見表1）。在基礎飼料中分別添加相當于抗壞血酸含量為0、10、50、150、450和1 500mg／kg的維生素C多聚磷酸酯（LAPP），從而配制出6種實驗飼料，其中基礎飼料中含有維生素C 3.59mg／kg。所有原料經粉碎后過60目篩。將所有原料和魚油、豆油、大豆卵磷脂混勻，然后加水制成團狀，制成直徑3mm的顆粒后鼓風烘干12h，于－20℃冷庫保存備用。

表1 基礎飼料配方及其營養成分Table 1 Ingredient and proximate composition of the basal diet

1.2 實驗魚及飼養管理

生長實驗Ⅰ、Ⅱ分別選用當年同一批孵化的規格一致的半滑舌鰨幼魚，飼養實驗于煙臺海陽黃海水產有限公司進行。試驗采用流水養殖系統，流速保持在10L／min左右。實驗開始前先用基礎飼料進行馴化，為期2周。實驗開始前，將實驗魚禁食24h。實驗Ⅰ挑選均體質量為（4.21±0.2）g的實驗魚隨機分成6組，每組設置3個重復，每個重復60尾。每天飽食投喂3次（06：00、14：00和22：00），實驗為期10周。實驗期間水溫變化范圍20～10℃，鹽度變化范圍24～26，溶氧含量≥6mg／L，pH＝7.9～8.0。實驗Ⅱ挑選均體質量為（116.93±0.93）g的實驗魚隨機分成6組，每組設置3個重復，每個重復18尾。每天飽食投喂2次（06：30和18：30），實驗為期10周。實驗期間水溫變化范圍24.1～18.8℃，鹽度變化范圍24～26，溶氧含量≥6mg／L，pH＝7.9～8.0。

1.3 樣品收集

實驗結束時，將魚禁食24h，然后確認每個桶中魚的數量并稱魚體總質量。實驗Ⅰ、Ⅱ每個桶分別隨機取10、5條魚保存于－20℃中，用于魚體成分測定。然后再從每個桶中分別隨機取10、5條魚，保存于－20℃中至組織抗壞血酸分析時。組織抗壞血酸分析時冰浴中解剖取其肝臟、腎臟和背部相同部位的肌肉分別測定抗壞血酸含量。

1.4 樣品分析測定方法

半滑舌鰨魚體成分測定參照AOAC［15］的方法：魚體粗蛋白含量采用凱氏自動定氮儀測定，魚體粗脂肪含量采用索氏抽提儀測定，魚體灰分含量采用馬福爐灼燒24h后測定，魚體水分含量采用鼓風烘箱105℃烘干24h后測定。

組織中維生素C的測定參照Ai等的方法進行［16］。稱取肝臟或肌肉約2g，腎臟約1g，分別放到50、5mL離心管中，分別加入9、4倍體積預冷的5%偏磷酸溶液，在冰浴狀態下勻漿2min，然后離心6min（2 739r／min）。上清液用0.22μm的濾膜過濾后進行高效液相色譜分析。儀器為Agilent 1100型HPLC儀，Zobar C18反相色譜柱，4.6nm×250nm。流動相為0.05mol／L KH2PO4（用磷酸將pH值調至3.0），流速為0.6mL／min，檢測波長為254nm，柱溫30℃，進樣量為20μL。適量的抗壞血酸（Sigma Chemicals Co.）溶解在超純水中作為標準樣品。

1.5 數據計算和統計方法

存活率SR（%）＝終末尾數／初始尾數×100；

增重率WGR（%）＝（末體質量－初體質量）／初體質量×100；

特定生長率SGR＝（ln末體質量－ln初體質量）／養殖天數×100；

飼料轉化率FER＝魚體增重／飼料攝入量［17］。

采用SPSS 16.0for Windows對所得數據進行單因子方差分析（ANOVA），若差異達到顯著，則進行Tukey多重比較（Tukey HSD test），顯著水平為0.05。實驗所得數據表示為平均值±標準誤（mean±S.E.，n＝3）。

2 結果

2.1 半滑舌鰨存活和生長

實驗結束時，實驗Ⅰ、Ⅱ未添加維生素C的飼料組均未發現活力下降、厭食、脊柱彎曲或鰭下出血等維生素C缺乏癥，但是未添加維生素C的飼料組死亡率升高，隨著飼料中維生素C添加量增加，存活率有上升趨勢但各處理組沒有顯著差異（P＞0.05）（見表2）。實驗Ⅰ中，魚體增重率、特定增長率和飼料轉化率隨著飼料中維生素C添加量增加，有上升趨勢，但差異不顯著（P＞0.05）。實驗Ⅱ中，飼料轉化率隨飼料中維生素C添加量增加有上升趨勢，但差異不顯著（P＞0.05），增重率和特定生長率無顯著差異（P＞0.05）。

表2 飼料中添加維生素C對半滑舌鰨存活率、增重率、特定增長率及飼料轉化率的影響（平均值±標準誤，n＝3）Table 2 SR，WGR，SGR and FER of juvenile tonguefish fed the experimental diet for 10weeks（mean±S.E.，n＝3）

2.2 半滑舌鰨水分、粗蛋白、粗脂肪及灰分含量

由表3可以看出，經過10周的生長實驗，飼料中不同的維生素C水平對魚體的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量沒有顯著影響（P＞0.05）（見表3）。實驗Ⅰ、Ⅱ水分含量分別為80.31%～80.87%、76.75%～77.18%，粗蛋白12.97%～13.52%、15.93%～16.91%；粗脂肪在3.94%～4.14%、4.16%～4.49%，灰分1.95%～2.02%、2.18%～2.32%。

表3 飼料維生素C對半滑舌鰨魚體成分的影響（平均值±標準誤，n＝3）Table 3 Whole－body composition of tonguefish fed the experimental diet for 10weeks（%fresh weight）（mean±S.E.，n＝3）

2.3 半滑舌鰨組織中抗壞血酸含量

由表4可見，肝臟抗壞血酸含量隨飼料中維生素C添加量增加而顯著上升（P＜0.05），超過50mg／kg添加組的腎臟和肌肉中抗壞血酸含量隨添加量增加顯著上升且顯著高于對照組和10mg／kg添加組（P＜0.05）；當飼料中維生素C添加量超過50mg／kg時，隨添加量增加肝臟、腎臟、肌肉中抗壞血酸含量均顯著上升并高于對照組（P＜0.05）。

表4 飼料維生素C對半滑舌鰨肝臟、腎臟和肌肉中抗壞血酸含量的影響（平均值±標準誤，n＝3）Table 4 Liver，kidney and muscle ascorbic acid concentrations of tonguefish fed the experimental diet（mean±S.E.，n＝3）

3 討論

對點帶石斑魚（Epinephelus coioides）［18］、大黃魚（Pseudosciaena crocea）［19］、金頭鯛（Sparus aurata）［20］等的研究表明，飼料中添加維生素C能提高魚體存活率。經過10周的生長實驗，實驗Ⅰ、Ⅱ中，飼料中維生素C添加量的增加提高了半滑舌鰨幼魚的存活率，但影響不顯著（P＞0.05）。對照組半滑舌鰨幼魚并未出現之前在其它魚類維生素C需要量的研究如斑點叉尾鮰（Ictalurus punctatus）［21］、印度鯉（Cirrhina mrigala）［22］、日本鸚鵡魚（Oplegnathus fasciatus）幼魚［23］和雜交羅非魚（Orechromis niloticus×O.aureus）［24］中報道的生長不良、攝食下降、脊柱側凸和脊柱前彎等缺乏癥。本研究中，飼料中添加維生素C對半滑舌鰨幼魚的生長無顯著影響，這與之前的大西洋鮭（Salmo salar L.）［25］、金頭鯛［20］及大黃魚［19］研究中的結果相似。Henrique等對金頭鯛的研究中認為，由于對照組肝臟和脾臟中抗壞血酸含量已經消耗到極低水平（脾臟0.5μg／g，肝臟3.5μg／g），故認為可能是由于組織中初始儲存量較高，使得在抗壞血酸消耗期仍能保持正常的生理功能，而非因為原料中含有維生素C。Ai等認為維生素C對大黃魚生長影響不顯著的原因有兩點：其一研究中大黃魚SGR相對較低，代謝率相應較低，因此對維生素C的需求量也相應較低；其二研究用大黃魚規格較大，可能儲存較多的維生素C，因此需要更長的時間來消耗。本研究對照組組織中抗壞血酸含量均很低，故生長差異不顯著很可能由于半滑舌鰨幼魚初始組織中抗壞血酸積累量比較大，在10周的實驗周期內足以維持半滑舌鰨的正常生理功能，亦不出現維生素C缺乏癥，而不是基礎飼料中含有的少量維生素C（3.59mg／kg）。因此，建議進行更長周期的生長實驗來研究維生素C對半滑舌鰨的生長的影響。

實驗Ⅰ、Ⅱ中，對半滑舌鰨魚體組成的分析表明，2個規格魚體中水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量都不受飼料中維生素C添加水平的影響。這與對羅非魚（Oreochro misspilurus）［1］、翹嘴紅鲌（Culter alburnus）［26］及軍曹魚（Rachycenlron canadumL.）［27］的研究結果一致。但對點帶石斑魚［18］的研究顯示，飼料中維生素C缺乏或過高的均可導致體脂含量下降，這可能是維生素C參與體脂肪代謝的結果，其作用機理有待進一步研究。

肝臟、肌肉及腎臟中的維生素C含量經常被用作評價魚類維生素C營養狀態的指標［16，19，28－30］。Dabrowski等［32］認為維持組織中維生素C穩定狀態所需要的維生素C即為維生素C最適需要量。在本研究中，兩個實驗半滑舌鰨肝臟、腎臟及肌肉中的維生素C含量均隨著飼料維生素C水平升高而顯著升高，但沒有出現在對鱸魚（Lateolabrax japonicas）、大西洋鮭、大黃魚等研究中報道的隨著飼料維生素C添加量增加肝臟維生素C含量增加并最終達到穩定的情況［16，19，21，24－25，31－34］，而Shiau和Hsu也認為飼料中維生素C的增加不會使羅非魚肝臟中維生素C含量達到比較穩定的狀態［24］。這些差異可能主要是因為實驗魚種類、實驗飼料和不同的維生素C添加量所致。這也說明要達到組織中維生素C穩態，可能需要更高的飼料維生素C添加量。建議今后研究中進一步提高維生素C最高添加量，來進一步研究飼料中添加維生素C對組織中抗壞血酸含量的影響。

本實驗條件下，在飼料中添加維生素C對半滑舌鰨2個規格幼魚的存活、生長均沒有產生顯著影響，只顯著提高了組織中抗壞血酸的含量。因此，就存活、生長而言，在本實驗條件下，本基礎飼料配方足以滿足半滑舌鰨2個規格幼魚生長發育的營養需要，無需額外補充維生素C。

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Effects of the Different Levels of Dietary Vitamin C on Survival，Growth and Tissue Ascorbic Acid Concentration in Tonguefish Cynoglossus semilaevis

LI Hua，WANG Xiao－Jie，MAI Kang－Sen，ZHANG Wen－Bing，XU Wei，LIUFU Zhi－Guo
（The Key Laboratory of Mariculture，Ministry of Education，Ocean University of China，Qingdao 266003，China）

This study was conducted to investigate the effect of dietary vitamin C on survival，growth and tissue ascorbic acid concentration in tonguefish（Cynoglossus semilaevis）.0，10，50，150，450and 1500mg／kg vitamin C（L－ascorbyl－2－polyphosphate）were supplemented respectively in basal diet to formulate six practical diets.Two 10－week feeding experiments were carried out using different size of fish（initial body weight：（4.21±0.02）g in ExperimentⅠand（116.93±0.91）g in ExperimentⅡ）.Each diet of the two experiments was randomly fed to triplicate groups of fish which showed apparent satiation in floating water system.Each group was stocked with 60and 18fish respectively in experimentⅠandⅡ.The results showed that：In experimentⅠ：Survival rate，weight gain rate，specific growth rate and feed efficiency ratio showed an increasing tendency with the increase of dietary vitamin C，but without significant difference（P＞0.05）.The ascorbic acid concentrations in liver，kidney and muscle increased significantly with increasing dietary vitamin C（P＜0.05）intake.In experimentⅡ：Survival rate，weight gain rate，specific growth rate and feed efficiency ratio were not influenced significantly by dietary vitamin C.When supplemented with more than 50mg／kg vitamin C，the ascorbic acid concentrations in liver，kidney，and muscle increased significantly with the increase of dietary vitamin C，which significantly higher than the unsupplemented group（P＜0.05）.The results above suggest that，though dietary vitamin C has benificial effect on survival to some extent，it is not necessary to supply extra vitamin C in the basic diet of tonguefish under the present experimental conditions.

Cynoglossus semilaevis；vitamin C；survival；growth；tissue ascorbic acid concentration

S963.73；S965.399

A

1672－5174（2012）1－2－075－06

國家鲆鰈類產業技術體系項目（nycytx－50－G07）資助

2011－03－03；

2011－04－27

李 華（1984－），女，碩士生。E－mail：lihua2011666＠163.com

＊＊通訊作者：E－mail：xjwang＠ouc.edu.cn

責任編輯 王 莉