液相色譜法測定檳榔飲片中檳榔堿含量的不確定度評定*

趙振東，周雪晴，劉艷鳳，馮玉紅

(海南大學材料與化工學院，?？?570228)

液相色譜法測定檳榔飲片中檳榔堿含量的不確定度評定*

趙振東，周雪晴，劉艷鳳，馮玉紅

(海南大學材料與化工學院，?？?570228)

根據《測量不確定度評定與表示》對液相色譜法測定檳榔飲片中檳榔堿含量的不確定度進行評定。通過分析得出，體積類不確定度是主要影響因素。分析結果表明，當檳榔飲片中檳榔堿含量為0.58%時，其擴展不確定度為0.02%（k=2）。

液相色譜法；檳榔；檳榔堿；不確定度

檳榔是棕櫚科植物檳榔(Areca Catechu L.)的成熟種子，其性味溫辛、無毒，有殺蟲、破積、下氣、行水等多種功效，對蟲積、食滯、瀉痢嚴重、水腫及腳氣等癥均有較好的治療效果。檳榔中含生物堿0.3%～0.6%，其中檳榔堿為主要有效成分［1］。

筆者根據國家質量技術監督局發布的JJF1059–1999計量技術規范《測量不確定度評定與表示》，并參照其它文獻，首次對液相色譜法測定檳榔中檳榔堿含量的測量不確定度進行了分析，考察了其不確定度的主要來源，為實驗過程的控制和檢測報告的評估提供了科學的依據［2］。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜儀：Waters 2695型，美國waters公司，經華南國家計量測試中心檢定為合格計量器具；

電子天平：AUW220D（0.1/0.01 mg），日本島津公司，經海南省計量測試所檢定為①級合格；

單標線容量瓶：10 mL，經海南省計量測試所檢定為A級；

可調移液器：100μL，經海南省計量測試所檢定；

超純水制備系統：PURELAB ULTRA ANALYTIC型，美國ELGA公司；

氫溴酸檳榔堿：純度100%，美國Sigma公司；

乙二胺、磷酸：分析純；

甲醇、乙醇：色譜純，美國Fisher公司；

超純水：電阻率為18.2 MΩ·cm。

1.2 實驗方法

（1）對照品溶液的制備

精密稱取氫溴酸檳榔堿對照品10.01 mg(mR)于10 mL(VR1)量瓶中，加水溶解并定容至刻度，作為對照品儲備液。用可調移液器量取對照品儲備液0.1 mL(VR2)于10 mL(VR3)量瓶中，加水定容至刻度，此溶液作為檳榔堿對照品溶液。

（2）供試品溶液的制備

精密稱取檳榔粗粉50.000 4 g（m）于1 L三角瓶中，加氨水8 mL，加乙醚800 mL超聲15 min，傾出乙醚提取液至預置8 mL磷酸液的蒸發皿中，再分別加乙醚640，320 mL，超聲2次，每次15 min，合并乙醚提取液，揮去乙醚，殘渣加50%甲醇溶解，轉移至10 mL(VS)容量瓶，并以同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，離心（10 000 r/min）10 min，上清液經液相色譜測定［3］。

1.3 色譜條件

色譜柱：C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；紫外檢測波長：215 nm；流動相：0.3%乙二胺溶液(磷酸調pH 7.5)–甲醇–乙腈（體積比為1∶3∶1），流速為1.0 mL/min［4］。

1.4 測定和計算

將對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并計算檳榔堿含量。對照品溶液分別進樣3次，平均峰面積AR為334 976；供試品溶液分別進樣3次，平均峰面積AS為390 301；按照建立的數學模型計算，檳榔飲片中檳榔堿含量為0.58%。

1.5 數學模型和不確定度計算公式

樣品中檳榔堿含量測定采用外標法，檳榔飲片中檳榔堿含量按式（1）計算：

式中：w——檳榔飲片中檳榔堿含量，%；

mR——氫溴酸檳榔堿對照品質量，mg；

VS——供試品溶液的定容體積，mL；

VR2——稀釋時可調移液器量取的對照品儲備液的體積，mL；

AS——供試品溶液中檳榔堿的峰面積，μV·s；

P——對照品的純度，為100%；

m——檳榔粗粉質量，mg；

VR1——對照品儲備液的定容體積，mL；

VR3——對照品溶液的定容體積，mL；

AR——對照品溶液中檳榔堿的峰面積，μV·s。

則檳榔飲片中檳榔堿含量的相對標準不確定度按式（2）計算：

1.6 不確定度來源

根據以上數學模型和不確定度計算公式，可以得出含量測定結果(w)的不確定度分量分別來源于mR，m，VS，VR1，VR2，VR3，AS，AR和P。對這9個不確定度來源，按其性質可以分為質量類不確定度(mR，m)、體積類不確定度(VS，VR1，VR2，VR3)、峰面積類不確定度(AS，AR)以及對照品純度類不確定度。

2 不確定度評定［5，6］

2.1 對照品純度引入的不確定度

氫溴酸檳榔堿購自美國Sigma公司，純度100%，分散區間半峰寬a =0.05%(P=100 %)，按矩形分布計算，對照品純度引入的不確定度為：

相對標準不確定度為：

2.2 體積類不確定度（VS，VR1，VR2，VR3）

2.2.1 供試品溶液的定容體積(VS)引入的不確定度

（1）10 mL單標線容量瓶體積校準引入的不確定度

單標線容量瓶體積的校準不確定度來源于校準時有限的準確度。單標線容量瓶(10 mL)A級品的法定允差為±0.02 mL，考慮到中心區的分布幾率大于極值附近，按照三角形分布進行計算，不確定度為0.02 mL/60.5=0.008 2 mL。

（2）溫度引入的不確定度

該項不確定度來源于校準溫度不同時引入的體積差別。實驗室的溫度在19～25℃之間，最大溫差為6℃，水溶液的體積膨脹系數約為2.1×10–4/℃，玻璃的體積膨脹系數約為1.5×10–5/℃，忽略玻璃的體積膨脹系數，按照矩形分布計算，10 mL單標線容量瓶的不確定度為：

（3）單標線容量瓶體積重復性引入的不確定度

該不確定度來源于連續核查排出的滿刻度體積液體的標準偏差，為A類不確定度，通常用稱量法確定。對一單標線容量瓶（10 mL）A級品的重復性進行評估，稱得液體質量分別為9.901，9.905，9.902，9.903，9.905，9.902，9.897，9.901，9.912，9.909 g，按照Bessel公式，計算得到體積重復性不確定度為0.001 4 mL。

則供試品溶液的定容體積(VS1)引入的不確定度為：

相對標準不確定度為：

2.2.2 對照品儲備液的定容體積(VR1)引入的不確定度

由于用單標線容量瓶(10 mL)A級品定容，因此計算原理及結果同“2.2.1”部分，即：

2.2.3 稀釋時可調移液器量取對照品儲備液的體積(VR2)引入的不確定度

計算原理同“2.2.1”部分。

(1)可調移液器量取體積校準引入的不確定度

移液器(0.1 mL)法定允差為±0.002 mL，按照三角形分布進行計算，不確定度為:

(2)溫度引入的不確定度

按照矩形分布計算，移液器(0.1 mL)的不確定度為：

(3)可調移液器體積重復性引入的不確定度

對移液器(1 mL)的重復性進行評估，稱得液體重量（g）分別為0.100 4，0.100 7，0.101 1，0.100 5，0.100 7，0.100 5，0.100 3，0.101 4，0.100 6，0.1050 7，按照Bessel公式，計算得到體積重復性不確定度為0.000 007 mL。

合成以上不確定度，對照品儲備液的體積(VR2)引入的不確定度為：

則相對標準不確定度為：

2.2.4 對照品溶液的定容體積(VR3)不確定度

由于用單標線容量瓶(10 mL)A級品定容，計算原理及結果同“2.2.1”部分，即:

2.3 質量類不確定度（mR，m）

2.3.1 氫溴酸檳榔堿對照品質量（mR）引入的不確定度

（1）天平校準引入的不確定度

使用的電子天平(d=0.01 mg)為一級工作天平，檢定證書給出最大允差為±0.15 mg，按照三角形分布進行計算，不確定度為：

（2）稱量重復性引入的不確定度

該項不確定度來源于同一物體稱量時讀數的標準偏差，為A類不確定度。對氫溴酸檳榔堿重復稱量10次，讀數分別為10.05，10.06，10.10，10.08，10.05，10.10 ，10.11，10.07，10.04，10.07 mg，根據Bessel公式計算得到質量重復性引入的不確定度為0.007 6 mg。

2.3.2 檳榔粗粉質量（m）引入的不確定度

（1）天平校準引入的不確定度

使用天平同“2.3.1”部分，不確定度為：

(2)稱量重復性引入的不確定度

來源于同一物體稱量時讀數的標準偏差，為A類不確定度。對檳榔粗粉重復稱量10次，讀數分別為50.001 5，50.001 7，50.001 2，50.001 7，50.001 1，50.001 1，50.001 6，50.001 1，50.001 3，50.001 1 g，根據Bessel公式計算得到重量重復性不確定度為0.082 mg。

2.4 峰面積類不確定度（AS，AR）

2.4.1 峰而積(AS)重復性引入的不確定度

該不確定度來源于重復進樣時峰面積的標準偏差,為A類不確定度。在本實驗中，重復進樣3次，峰面積為390 322，390 260，390 321，平均峰面積為390 301。按照Bessel公式，則相對標準不確定度為：

2.4.2 峰而積(AR)重復性引入的不確定度

來源于重復進樣時峰面積的標準偏差為A類不確定度。在本實驗中，重復進樣3次，峰面積為334 983，334 965，334 979。平均峰面積為334 976。按照Bessel公式，則相對標準不確定度為：

3 合成不確定度

將以上數據代入式（2），得到檳榔飲片中檳榔堿含量的相對標準不確定度為：

則標準不確定度為：

4 擴展不確定度與測定結果表示

檳榔含量測定結果的擴展不確定度U=ku(w)，取k=2，則U=2×0.007%≈0.02%。檳榔飲片中檳榔堿含量可表示為0.58%±0.02%，k=2。

5 結語

對檳榔飲片中檳榔堿的液相色譜法測定結果的不確定度進行了評定。評定結果表明，體積類不確定度是主要的不確定來源；質量類不確定度和對照品純度類不確定度對實驗結果影響不大；而峰面積類不確定度則幾乎可以忽略不計。因此，涉及溶液配制過程是本實驗中影響測定結果的主要因素，需重點加以控制。

［1］ 趙振東，謝艷麗，牛成，等.毛細管電泳法分析檳榔中檳榔堿和檳榔次堿［J］.海南師范學院學報,2009，22(2): 170–172.

［2］ 中國實驗室國家認可委.化學分析中不確定度的評估指南［M］.北京，中國計量出版社，2002.

［3］ 史載鋒，吳亞弟，林小明，等.檳榔堿提取分離工藝的研究［J］.海南師范學院學報，2006，19 (3): 246–247.

［4］ 馮玉紅，陳國良，于文輝，等.現代儀器分析實用教程［M］.北京：北京大學出版社，2008: 89–112.

［5］ 金鵬飛，鄒定，姜文清.格列吡嗪片高效液相法含量測定結果的不確定度評定［J］.藥物分析雜志，2008，28(7): 1 136–1 140.

［6］ 張霞，許永，劉巍，等.離子色譜法測定卷煙主流煙氣中氨含量的不確定度評定［J］.化學分析計量，2011，20(4): 16–19.

Uncertainty Evaluation for Determining Content of Arecoline in Areca by HPLC

Zhao Zhendong， Zhou Xueqing， Liu Yanfeng， Feng Yuhong
(College of Materials and Chemical Engineering， Hainan University， Haikou 570228， China)

The measurement uncertainty of Arecoline in Areca by HPLC was evaluated according to Evaluation and Presentation of Uncertainty in Measurement. Volume uncertainty was main factor. The Expanded uncertainty was 0.02%(k=2)，as the content of Arecoline in Areca was 0.58%.

HPLC; Areca; Arecoline; uncertainty

O657.7+2

A

1008–6145(2012)03–0007–04

10.3969/j.issn.1008–6145.2012.03.002

* 海南大學材料與化工學院青年基金項目(南藥檳榔的開發與利用)

聯系人：馮玉紅；Email: zhaozhd@gmail.com

2012–02–08