北豆根的化學成分研究

李珊珊 ，宋 瀟，柴 欣* ，王躍飛

1天津中醫藥大學中醫藥研究院天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地，天津 300193;2天津國際生物醫藥聯合研究院中藥新藥研發中心，天津 300457

北豆根為防己科蝙蝠葛屬植物蝙蝠葛(Menispermum dauricum DC.)的干燥根莖，具有清熱解毒、祛風止痛的功效，臨床常用于咽喉腫痛、熱毒瀉痢、風濕痹痛?，F代藥理研究表明其具有抗炎、抗菌、抗心律失常、抗血小板聚集、抗腫瘤細胞增殖等活性，主要有效成分為生物堿類［1］。為了更深入的研究北豆根的質量控制方法及藥效物質基礎，本項目對北豆根的化學成分進行系統研究，共分離得到13個化合物，其中化合物9～11為首次從蝙蝠葛屬中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker AVⅢ核磁共振譜儀(瑞士Bruker公司);Waters Quattro Premier XE質譜儀(美國Waters公司);A1204萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);RE-52A型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠);TH-Ⅱ型薄層加熱器(上?？普苌萍加邢薰?;ZF-20D暗箱式紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);Aglient 1260制備液相(美國Agilent公司);薄層層析硅膠GF254、柱層析硅膠(青島海洋化工廠);反相C18柱層析硅膠ODS-A-HG(日本YMC公司);Sephadex LH-20葡聚糖凝膠(瑞士GE Healthcare公司);D101大孔吸附樹脂(天津海光化工有限公司);所用試劑均為分析純。

蝙蝠葛的干燥根莖購于安徽亳州，產地內蒙古，由天津中醫藥大學李天祥副教授鑒定，標本存于天津國際生物醫藥聯合研究院化學與分析實驗室。

2 提取與分離

蝙蝠葛的干燥根莖約16 kg，用95%、50%乙醇各加熱回流兩次，減壓回收乙醇至無醇味，合并濃縮液并加入適量水混懸，依次用石油醚(沸程60～90℃)、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑，得石油醚萃取物145 g、二氯甲烷萃取物150 g、乙酸乙酯萃取物23 g、正丁醇萃取物526 g。正丁醇萃取物經D101大孔樹脂柱分離，不同濃度乙醇梯度洗脫，得水洗脫部位257 g、30%乙醇洗脫部位144 g、50%乙醇洗脫部位61 g、70%乙醇洗脫部位47 g、95%乙醇洗脫部位18 g。

石油醚萃取物經硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(95∶5 ～ 4∶6)得到化合物1(300 mg)和12(200 mg);二氯甲烷萃取物經多次硅膠柱色譜、凝膠柱色譜及制備液相分離，得到化合物2(100 mg)、3(5 mg)、4(20 mg)、7(150 mg)、9(20 mg)、11(350 mg)、13(170 mg);乙酸乙酯萃取物經硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫(10∶0 ～8∶2)得到化合物8(70 mg);正丁醇30%乙醇洗脫部位經反復硅膠柱色譜、凝膠柱色譜及制備液相分離，得到化合物5(25 mg)、6(30 mg)、10(8 mg)。

3 結構鑒定

化合物1 黃色羽毛狀晶體(氯仿)，C20H17NO5，易溶于氯仿，5%硫酸乙醇溶液顯黃色，5%磷鉬酸乙醇溶液顯橘黃色。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:8.79(1H，d，J=8.8 Hz，H-11)，8.67(1H，d，J=5.6 Hz，H-2)，7.93(1H，d，J=5.6 Hz，H-3)，7.87(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，7.31(1H，dd，J=2.8，8.8 Hz，H-10)，4.26，4.17，4.05，3.98(3H ×4，each s，OCH3×4)。以上理化性質及數據與文獻［2］報道相符，可以確定化合物1為蝙蝠葛寧堿(dauriporphine)。

化合物2 橘黃色針狀晶體(氯仿)，C19H15NO4，易溶于氯仿，5%硫酸乙醇溶液顯黃色，5%磷鉬酸乙醇溶液顯橘黃色。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:8.81(1H，d，J=8.8 Hz，H-11)，8.67(1H，d，J=5.2 Hz，H-2)，7.88(1H，d，J=2.8 Hz，H-8)，7.58(1H，d，J=5.6 Hz，H-3)，7.42(1H，s，H-4)，7.35(1H，dd，J=2.8，8.8 Hz，H-10)，4.17，4.10，4.00(3H × 3，each s，OCH3× 3)。以上理化性質及數據與文獻［2］報道相符，可以確定化合物2為蝙蝠葛波酚堿(menisporphine)。

化合物3 黃色顆粒狀固體(氯仿)，C18H13NO4，可溶于氯仿及甲醇，5%硫酸乙醇溶液顯黃色，5%磷鉬酸乙醇溶液顯橘黃色。1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ:15.99(1H，s，OH)，8.99(1H，d，J=9.0 Hz，H-11)，8.78(1H，d，J=4.2 Hz，H-2)，7.96(1H，brs，H-8)，7.62(1H，d，J=4.2 Hz，H-3)，7.49(1H，brd，J=7.2 Hz，H-10)，7.33(1H，s，H-4)，4.13，4.04(3H ×2，each s，OCH3×2)。以上理化性質及數據與文獻［3］報道相符，可以確定化合物3為6-O-去甲蝙蝠葛波酚堿(6-O-demethylmenisporphine)。

化合物4 黃色針狀晶體(氯仿)，C19H15NO5，易溶于氯仿，5%硫酸乙醇溶液顯黃色，5%磷鉬酸乙醇溶液顯橘黃色。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:16.36(1H，s，OH)，8.99(1H，d，J=8.8 Hz，H-11)，8.80(1H，d，J=5.2 Hz，H-2)，7.99(1H，d，J=5.6 Hz，H-3)，7.94(1H，d，J=2.8 Hz，H-8)，7.45(1H，dd，J=2.8，9.2 Hz，H-10)，4.38，4.12，4.04(3H ×3，each s，OCH3×3)。以上理化性質及數據與文獻［4］報道相符，可以確定化合物4為蝙蝠葛啡諾林堿(dauriporphinoline)。

化合物 5 無色塊狀晶體(甲醇)，C21H26。1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.04(1H，s，H-3)，7.01(1H，J=8.0 Hz，H-9)，6.99(1H，d，J=8.0 Hz，H-8)，4.43(1H，dd，J=13.6，2.8 Hz，H-6a)，3.97(3H，s，OCH3-2)，3.90(3H，s，OCH3-10)，3.83(1H，dd，J=12.8，5.6 Hz，H-5)，3.76(3H，s，OCH3-1)，3.74(1H，m，H-5)，3.44(3H，s，N-CH3)，3.43(1H，m，H-4)，3.35(1H，m，H-7)，3.14(1H，m，H-4)，3.05(3H，s，N-CH3)，2.88(1H，t，J=13.2 Hz，H-7);13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ:144.1(C-1)，153.4(C-2)，110.9(C-3)，120.9(C-3a)，23.5(C-4)，60.8(C-5)，69.3(C-6a)，30.3(C-7)，125.6(C-7a)，119.2(C-8)，111.8(C-9)，149.6(C-10)，143.8(C-11)，118.6(C-11a)，125.8(C-11b)，125.3(C-11c)，61.1(OCH3-1)，55.2(OCH3-2)，55.3(OCH3-10)，52.8(N-CH3)，42.4(N-CH3)。以上理化性質及數據與文獻［5］報道相符，可以確定化合物5為蝙蝠葛任堿(menisperine)。

化合物 6 無色片狀晶體(甲醇)，C20H24。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ:6.62(1H，d，J=7.8 Hz，H-9)，6.53(1H，s，H-3)，6.40(1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，4.38(1H，br d，J=12.6 Hz，H-6a)，3.71(3H，s，OCH3-10)，3.68(3H，s，OCH3-2)，3.63(2H，m，H-5)，3.32(3H，s，N-CH3)，3.17(1H，m，H-4)，3.14(1H，m，H-7)，2.92(3H，s，NCH3)，2.84(1H，dd，J=17.4，3.6 Hz，H-4)，2.62(1H，t，J=8.8 Hz，H-7);13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ:151.7(C-1)，152.5(C-2)，109.2(C-3)，112.6(C-3a)，23.7(C-4)，60.9(C-5)，69.6(C-6a)，30.9(C-7)，125.6(C-7a)，113.3(C-8)，110.3(C-9)，152.1(C-10)，150.8(C-11)，123.5(C-11a)，123.0(C-11b)，120.5(C-11c)，55.7(OCH3-2)，56.1(OCH3-10)，53.2(N-CH3)，43.0(N-CH3)。數據與文獻［6］報道相符，可以確定化合物6為木蘭堿(magnoflorine)。

化合物7 白色粉末(氯仿)，C19H24O6NCl，可溶于氯仿，5%硫酸乙醇溶液、5%磷鉬酸乙醇溶液均不顯色。1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ:5.59(1H，s，H-3)，5.18(1H，dd，J=6.8，12.0 Hz，H-10)，5.02(1H，d，J=5.6 Hz，H-1)，4.03(3H，s，H-19)，3.79(3H，s，H-18)，3.71(3H，s，H-17)，3.14(1H，dd，J=12.4，12.4 Hz，H-9a)，3.05(1H，d，J=15.2 Hz，H-5a)，2.67(1H，m，H-9b)，2.66(1H，m，H-14a)，2.66(1H，m，H-15a)，2.52(1H，d，J=15.6 Hz，H-5b)，2.44(1H，m，H-15b)，2.38(3H，s，H-16)，1.62(1H，m，H-14b);13C NMR(100 MHz，C5D5N)δ:70.7(C-1)，188.9(C-2)，105.5(C-3)，201.4(C-4)，47.2(C-5)，192.9(C-6)，139.0(C-7)，159.7(C-8)，41.4(C-9)，57.8(C-10)，68.3(C-11)，53.2(C-12)，72.9(C-13)，38.5(C-14)，51.7(C-15)，36.3(C-16)，58.8(C-17)，60.1(C-18)，60.4(C-19)。以上理化性質及數據與文獻［7］報道相符，可以確定化合物7為尖防己堿(acutumine)。

化合物8 白色粉末(氯仿)，C18H22O6NCl，可溶于氯仿，5%硫酸乙醇溶液、5%磷鉬酸乙醇溶液均不顯色。1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ:8.36(1H，brs，OH)，5.49(1H，s，H-3)，5.23(1H，dd，J=7.2，12.4 Hz，H-10)，5.00(1H，brs，H-1)，4.05(3H，s，H-19)，3.88(3H，s，H-18)，3.64(3H，s，H-17)，3.17(1H，dd，J=12.4，12.4 Hz，H-9a)，2.92(1H，dd，J=6.0，9.2 Hz，H-15a)，2.82(1H，m，H-15b)，2.79(1H，m，H-9b)，2.74(1H，d，J=17.6 Hz，H-5a)，2.59(1H，m，H-14a)，2.43(1H，d，J=17.6 Hz，H-5b)，1.60(1H，dd，J=4.0，12.0 Hz，H-14b)。以上理化性質及數據與文獻［8］報道相符，可以確定化合物8為N-去甲尖防己堿(acutumidine)。

化合物9 無色塊狀晶體(氯仿)，C19H17O3N，易溶于氯仿，5%硫酸乙醇溶液顯深棕色，5%磷鉬酸乙醇溶液顯棕色。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:9.63(1H，m，H-11)，8.94(1H，s，H-12)，7.82(1H，m，H-8)，7.62(2H，m，H-9，10)，7.30(1H，s，H-7)，7.17(1H，s，H-3)，4.19(2H，t，J=6.0 Hz，H-5)，4.07(3H，s，H-13)，3.96(3H，s，H-14)，3.28(2H，t，J=6.0 Hz，H-4);13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:146.0(C-1)，151.8(C-2)，112.9(C-3)，128.2 or 128.4(C-3a)，30.5(C-4)，38.5(C-5)，128.2 or 128.4(C-6a)，112.2(C-7)，132.4(C-7a)，127.8(C-8)，127.3(C-9)，126.2(C-10)，127.9(C-11)，133.0(C-11a)，125.7(C-11b)，118.9(C-11c)，160.8(C-12)，56.5(C-13)，59.9(C-14)。以上理化性質及數據與文獻［9］報道相符，可以確定化合物9為N-去甲-N-甲?；浜扇~堿(N-demethyl-N-formyldehydronuciferine)。

化合物10 橘黃色針狀晶體(甲醇)，C20H18，5%硫酸乙醇溶液、5%磷鉬酸乙醇溶液均顯黃色。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:9.95(1H，s，H-8)，9.02(1H，s，H-13)，8.05(1H，d，J=8.4 Hz，H-11)，7.86(1H，d，J=8.4 Hz，H-12)，7.70(1H，s，H-1)，7.10(1H，s，H-4)，6.54(2H，s，OCH2O)，4.87(2H，t，J=6.4 Hz，H-6)，3.94(3H，s，OCH3)，3.88(3H，s，OCH3)，3.23(2H，t，J=6.4 Hz，H-5);13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:109.2(C-1)，112.1(C-1a)，151.9(C-2)，149.2(C-3)，111.8(C-4)，129.0(C-4a)，26.4(C-5)，55.8(C-6)，144.3(C-8)，119.4(C-8a)，147.4(C-9)，145.0(C-10)，121.2(C-11)，132.9(C-12a)，122.1(C-13)，137.5(C-13a)，104.9(OCH2O)，56.6(OCH3)，56.3(OCH3)。以上理化性質及數據與文獻［10］報道相符，可以確定化合物10為表小檗堿(epiberberine)。

化合物11 黃色針狀晶體(甲醇)，C18H18O5，易溶于甲醇，5%硫酸乙醇溶液顯暗黃色，5%磷鉬酸乙醇溶液顯藍色。1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.45(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，7.13(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.07(2H，d，J=8.4 Hz，H-2'，6')，7.04(1H，dd，J=8.2，1.9 Hz，H-6)，6.81(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.74(2H，d，J=8.4 Hz，H-3'，5')，6.42(1H，d，J=15.6 Hz，H-8)，3.90(3H，s，OCH3)，3.48(2H，t，J=7.6 Hz，H-1'')，2.77(2H，t，J=7.2 Hz，H-2'');13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ:126.9(C-1)，110.2(C-2)，147.9(C-3)，148.4(C-4)，115.1(C-5)，121.8(C-6)，140.6(C-7)，117.4(C-8)，167.8(C-9)，129.9(C-1')，129.4(C-2'，6')，114.9(C-3'，5')，155.5(C-4')，41.2(C-1'')，34.4(C-2'')，55.0(OCH3)。以上理化性質及數據與文獻［11］報道相符，可以確定化合物11為對羥基苯乙基反式阿魏酸酯(p-hydroxyphenethyl trans-ferulate)。

化合物12 白色針狀晶體(氯仿)，C29H50O，易溶于氯仿，5%硫酸乙醇溶液顯紫紅色，5%磷鉬酸乙醇溶液顯藍色。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ:5.37(1H，brd，J=5.2 Hz，H-6)，3.59 ～3.54(1H，m，H-3)，1.03(3H，s，H-19)，0.95(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.87(3H，t，J=7.6 Hz，H-29)，0.86(3H，d，J=7.6 Hz，H-26)，0.84(3H，d，J=7.2 Hz，H-27)，0.71(3H，s，H-18)。以上理化性質及數據與文獻［12］基本相符，最終確定化合物12為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物13 白色粉末，C35H60O6，易溶于吡啶，5%硫酸乙醇溶液顯紫紅色，5%磷鉬酸乙醇溶液顯藍色。1H NMR(400 MHz，C5D5N)δ:5.34(1H，t，J=3.2 Hz，H-6)，5.05(1H，d，J=7.6 Hz，H-1')，4.56(1H，dd，J=2.0，12.0 Hz，H-6'a)，4.41(1H，dd，J=5.2，11.6 Hz，H-6'b)，4.29(2H，m，H-3'，4')，4.06(1H，t，J=8.0 Hz，H-2')，3.97(1H，m，H-3)，3.93(1H，m，H-5')，0.97(3H，d，J=6.4 Hz，H-21)，0.92(3H，s，H-19)，0.87(3H，t，J=7.6 Hz，H-29)，0.86(3H，d，J=7.2 Hz，H-26)，0.84(3H，d，J=7.0 Hz，H-27)，0.64(3H，s，H-18)。以上理化性質及數據與文獻［13］報道相符，可以確定化合物13為胡蘿卜苷(daucosterol)。

1 Zheng YC(鄭艷春)，Qin T(秦婷)，Cui YH(崔雅慧)，et al.Advances in study on chemical constituents of traditional Chinese medicine Asiatic moonseed and pharmacological action.China Med Her(中國醫藥導報)，2011，8:9-10.

2 Kunitomo J，Kaede S，Satoh M.The structure of 2，3-dihydromenisporphine and the synthesis of dauriporphine，oxoisoaporphine alkaloids from Menispermum Dauricum DC..Chem Pharm Bull，1985，33:2778-2782.

3 Tan NH(譚寧華)，Zhao SX(趙守訓)，Ding LS(丁林生)，et al.Oxoisoaporphines.J China Pharm Univ(中國藥科大學學報)，1990，21:377-379.

4 Zhao SX，Ye WC，Tan NH，et al.A novel oxoisoaporphine alkaloid from the rhizome of Menispermum dauricum.J China Pharm Univ，1989，20:312.

5 Iwasa K，Takahashi T，Nishiyama Y，et al.Online structural elucidation of alkaloids and other constituents in crude extracts and cultured cells of Nandina domestica by combination of LC-MS/MS，LC NMR，and LC-CD analyses.J Nat Prod，2008，71:1376-1385.

6 Barbosa-Filho JM，Da-Cunha EVL，Cornelio ML，et al.Cissaglaberrimine，an aporphine alkaloid from Cissampelos glaberrima.Phytochemistry，1997，44:959-961.

7 Sugimoto Y，Inanaga S，Kato M，et al.Dechloroacutumine from cultured roots of Menispermum dauricum.Phytochemistry，1998，49:1293-1297.

8 Sugimoto Y，Babiker HAA，Saisho T，et al.Chlorinated alkaloids in Menispermum dauricum DC.root culture.J Org Chem，2001，66:3299-3302.

9 Nozaka T，Morimoto I，Ishino M，et al.Mutagenic principles in Sinomeni Caulis et Rhizoma.I.The structure of a mutagenic alkaloid，N-demethyl-N-formyldehydronuciferine，in the neutral fraction of the methanol extract.Chem Pharm Bull，1987，35:2844-2848.

10 Song SH(宋少輝)，Zhang YH(張援虎)，Huang ZY(黃筑艷).Study on the alkaloids of Sinomenium acutum.Lishizhen Med Mater Med Res(時珍國醫國藥)，2011，22:327-328.

11 Darwish FMM，Reinecke MG.Ecdysteroids and other constituents from Sida spinosa L..Phytochemistry，2003，62:1179-1184.

12 Zhang X，Geoffroy P，Miesch M，et al.Gram-scale chromatographic purification of β-sitosterol:synthesis and characterization of β-sitosterol oxides.Steroids，2005，70:886-895.

13 Faizi S，Ali M，Saleem R，et al.Complete1H and13C NMR assignments of stigma-5-en-3-O-β-glucoside and its acetyl derivative.Magn Reson Chem，2001，39:399-405.