新城疫抗體測定的規范操作

向雙云，周珍輝

（北京農業職業學院，北京 房山 102442）

1 測定的器材及使用方法

1.1 托盤天平

托盤天平測量開始前，必須先將游碼移到標尺左端的零刻度處，然后才開始調節平衡螺母，使天平平衡。若將平衡螺母左右移至盡頭天平仍不得平衡，則應檢查原因，不能移動游碼來達到平衡。

1.2 離心機

離心機使用時離心管液體不能裝得太滿，對稱放置的試樣必須配平。

1.3 移液槍

移液槍吸頭裝配時需將移液器垂直插入吸頭，左右微微轉動，上緊即可，切勿用移液器反復撞擊吸頭來上緊。

1.4 移液器

移液器吸液時應垂直吸液，吸頭尖端侵入液面3mm以下，吸液時槍頭應預潤濕，然后再正式移液。吸液可將按鈕按到第一檔吸液，釋放按鈕。放液時先按下第一檔，打出大部分液體，再按下第二檔，將余液排出。吸取的過程應該做到“慢吸快打”，在吸液時要慢、準，放液時對準后速度要快，可以避免打完后吸頭下存留液體，保證加入的液體體積一致。

2 規范的采血方法

采血前采血者先將注射器內吸入3.8%的枸櫞酸鈉。采血時，一人將雞側臥保定，一人固定雞的頭部和腳；從側翅膀采血，一手固定采血部分，一手采血；采血完畢后采血者一手將抗凝劑和血液輕輕搖勻，一手用干棉球按壓采血部位止血。采血部位最好從翅靜脈叢刺入，比較容易采血成功且不容易淤血。

3 紅細胞懸液的配制

血液采集完畢需取下針頭，把血液沿離心管的管壁緩慢注入離心管中，防止紅細胞的破壞。然后輕輕來回晃動離心管，使血液與抗凝劑充分混合，配平后置于離心機中開始離心。離心完畢，應先選用5mL的移液器吸取上面的液體，然后再選用1 mL或200μL的移液器吸取，最好以畫圈的方式吸取，比較容易把白細胞和血小板吸干凈。最后一次離心完畢，按照計算量用移液器從離心管底部吸取紅細胞放入加好生理鹽水的燒杯中，再反復回用生理鹽水將移液器吸頭里的紅細胞洗下來，保證配制紅細胞濃度的準確性。

4 血凝試驗

血凝試驗操作過程中需要注意的是使用微量移液器吸取液體時，吸頭需碰壁以除去多余的液體；加樣時應將所加物在V型板的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出；倍比稀釋時，要注意避免產生過多的氣泡，影響結果的準確性；加紅細胞時最好懸滴或由后往前加，因為孔內已有稀釋的抗原，如果吸頭接觸到孔內混合液，會造成各個孔間液體相互污染，導致試驗結果出現誤差?？乖瓚乙涸谑褂们耙欢ㄒ獡u勻，紅細胞懸液要邊搖邊加，以保證每一孔中加入濃度的準確一致，但注意不要用力過大，防止紅細胞被破壞，造成溶血。結果判斷應按照操作規程規定的時間，在對照孔成立的前提下及時觀察讀數，讀數過早，血凝價易判高，血凝抑制價易判低，讀數過晚，紅細胞發生裂解，結果不再有意義。

5 四單位病毒的配制

四單位病毒的配制應根據計算結果用大移液器先吸取生理鹽水，然后用小移液器吸取抗原，抗原吸取前要搖勻，再反復用生理鹽水將移液器吸頭里的抗原洗下來，保證配制四單位病毒濃度的準確性。配制好的四單位病毒最好能進行回歸試驗檢測，回歸試驗的操作方法是：在微量反應板的1～4孔均加入0.025mL生理鹽水，取四單位病毒液0.025mL加入第1孔內，混勻后吸取0.025mL加入第2孔，依次倍比稀釋至第4孔，從第4孔吸取0.025mL棄去。然后每孔再加入0.025mL1%雞紅細胞懸液，輕輕混勻，室溫（20℃～25℃）下靜置40min后觀察結果。若第1孔，2孔凝集，則視為抗原配制正確；若第1孔凝集，第2孔、3孔、4孔均沉淀，則抗原濃度配制偏低；若前3孔均凝集第4孔沉淀，則抗原濃度配制偏高。

6 血凝抑制試驗

血凝抑制試驗操作過程中加樣的注意事項與血凝試驗基本相同，主要注意四單位病毒和紅細胞懸液加樣時要滴或由前往后滴加，避免移液器吸頭與孔內的液體接觸，保證結果的準確性。血清要搖勻后加樣，四單位病毒和紅細胞懸液要邊搖勻邊加樣，保證每孔所加的樣品量和濃度的準確性。判定結果的時間要嚴格控制，一般來說，以陽性和陰性對照成立，紅細胞對照孔完全沉淀的前后5min內判定試驗結果較好。試驗結果判讀時，微量反應板傾斜45°，孔底沉淀的紅細胞流動性好，呈淚珠樣流淌，邊緣無凝集顆粒的為凝集完全抑制，以能完全抑制四單位病毒的血清最高稀釋度作為血凝抑制滴度。

綜上所述，在新城疫抗體測定中，影響試驗結果的因素很多，只有嚴格按規定操作，細致、耐心地做好每一個環節，發現問題找出原因，及時糾正處理，才能保證試驗結果的準確。