槲皮素對小鼠術后腫瘤轉移的影響

劉偉杰，王瑩瑩，李佳桓，杜鋼軍

（河南大學藥學院 藥物研究所，河南 開封 475004）

腫瘤是一種基因病，已經成為威脅人類健康的第一大疾病，嚴重影響患者的生存質量。手術、放療、化療是臨床上治療腫瘤的三大有效手段?；煂颊唧w內的癌細胞有很強的殺傷作用，可以提高療效，改善預后，但是，也有很強的不良反應。其中最常見的是骨髓抑制，往往使化療的療程和劑量受到限制，導致化療的失敗。

中藥在緩解藥物的不良反應和增加藥物的療效方面都有明顯的作用，并且在誘導腫瘤細胞凋亡和逆轉腫瘤細胞的多藥耐藥方面有明顯的作用。槲皮素（quercetin，簡稱QU，為3，4，5＇，3＇，4＇－五羥基黃酮）及其衍生物是植物界分布最廣的黃酮類化合物，具有多種生物活性和很高的藥用價值，也是人類飲食中最主要的生物類黃酮。近幾年，槲皮素的性能引起國內外學者的廣泛關注，并對其生物活性、藥理作用都進行了大量的研究。槲皮素具有擴張冠狀動脈、降低毛細血管通透性和脆性、抗病毒、抗炎、抗腫瘤、抗纖維化、抗血小板聚集、抗過敏、鎮痛、抗氧化、清除自由基等多種藥理作用［1］。我們用小鼠Lewis肺癌以及乳腺癌實驗，研究了槲皮素對腫瘤轉移的抑制作用以及對機體免疫功能的影響。

1 實驗材料

1.1 主要試劑

無水乙醇（分析純，天津市德思化學試劑有限公司，20061027）；Tween80（分析純，天津市紅巖化學試劑廠，20060824）；二甲基亞砜（DMSO，分析純，天津市大茂化學試劑廠，20060702）；丙酮（分析純，天津市科密歐化學試劑開發中心，2004111）1；槲皮素（純度98%，陜西薈科天然產物有限公司提供，臨用前制成注射用溶液）。

1.2 實驗動物及瘤株

C57BL／6、BALB／c小鼠，雌性，6～8 周，18～22g，北京維通利華實驗動物有限公司提供；C57BL／6小鼠Lewis肺癌瘤株、BALB／c小鼠4T1乳腺癌瘤株均購于上海細胞所；本實驗室C57BL／6、BABL／c小鼠自身傳代保存的實體瘤。

1.3 實驗儀器

潔凈工作臺（100級潔凈等級，上海博迅實業有限公司醫療設備廠）；快速混勻器（SK－1，常州國華電器有限公司）；不銹鋼手提式滅菌器（DSX－280A，上海市申安醫療器械廠）；臺式離心機（TDL－50B，上海安亭科學儀器廠）；電子天平（FA1004N，上海精密科學儀器有限公司）；移液器20～200 μL、100～1000μL（法國吉爾森公司）。

2 方法

2.1 對小鼠Lewis肺癌術后肺轉移的影響

將在體小鼠Lewis肺癌實體瘤組織用組織勻漿器制備單細胞懸液，調細胞數1×106個／mL。0.2mL／只接種于20只C57BL／6小鼠右足趾皮下，接種次日開始腹腔注射給藥。對照組給予空白溶劑（10 mL／kg）；槲皮素實驗治療組用槲皮素（10mg／kg）注射，每組10只小鼠。待腫瘤長至直徑約5mm 時截去荷瘤全足，繼續治療3周，處死小鼠，切除肺臟，稱重，觀察腫瘤肺轉移結節和免疫器官臟器指數。肺轉移結節計數方法：將稱重后的肺臟按其原始5 葉切開，以體積分數10%的甲醛溶液固定24h，再用生理鹽水沖洗，計數各組肉眼可見肺癌轉移結節總數。

2.2 對小鼠4T1乳腺癌術后肺轉移的影響［2－3］

將在體小鼠4T1乳腺癌實體瘤組織用組織勻漿器制備單細胞懸液，調細胞數1×106個／mL。0.2mL／只接種于20 只BALB／c小鼠右足趾皮下，接種次日開始腹腔注射給藥。對照組給予空白溶劑（10mL／kg）；槲皮素實驗治療組用槲皮素（10mg／kg）注射，每組10只小鼠。待腫瘤長至直徑約5mm 時截去荷瘤全足，繼續治療3周，處死小鼠，切除肺臟，稱重，觀察腫瘤肺轉移結節和免疫器官臟器指數。肺轉移結節計數方法：將稱重后的肺臟按其原始5 葉切開，以體積分數10%的甲醛溶液固定24h，再用生理鹽水沖洗，計數各組肉眼可見肺癌轉移結節總數。

2.3 對荷瘤小鼠免疫功能的影響［4－5］

按前述方法制備4T1 乳腺癌腫瘤細胞，將腫瘤細胞接種于小鼠后肢皮下，次日開始給藥，劑量同前，連續3周。腫瘤長出后，用排水容積法每周測量腫瘤體積2次。治療結束次日，將小鼠處死，切除腫瘤、脾臟、淋巴結，稱重。脾臟指數＝脾臟質量（mg）／體質量（g）。

2.4 統計學方法

3 結果

3.1 對小鼠Lewis肺癌及4T1乳腺癌術后肺轉移的影響

槲皮素對小鼠lewis肺癌及4T1乳腺癌術后肺轉移有抑制作用，能明顯減少腫瘤結節數，對轉移后的腫瘤生長也有明顯的抑制作用（見表1、圖1、圖2）。

表1 槲皮素對小鼠Lewis肺癌及4T1乳腺癌術后肺轉移的影響（，n＝10）

3.2 槲皮素對荷瘤小鼠免疫功能的影響

槲皮素對4T1乳腺癌荷瘤小鼠脾臟指數有明顯降低作用，可以使淋巴結縮小，使皮下腫瘤生長減緩，分別見表2、圖3、圖4。

表2 槲皮素對4T1乳腺癌荷瘤小鼠脾臟指數和腫瘤大小的影響（，n＝10）

圖1 槲皮素對Lewis肺癌術后肺轉移的影響

圖2 槲皮素對4T1乳腺癌術后肺轉移的影響

圖3 槲皮素對4T1乳腺癌荷瘤小鼠淋巴結大小的影響

圖4 槲皮素對4T1皮下腫瘤生長的影響

4 討論

化療藥物毒性大、對腫瘤細胞選擇性差，尤其是對機體免疫系統的破壞，容易導致腫瘤的復發。如果藥物既能直接殺傷腫瘤細胞，又能增強機體自身免疫，對治療腫瘤無疑非常有利。一些小分子天然產物，因獨特的作用機制及對機體無毒情況下的抗腫瘤作用，備受人們關注。

近年來研究［6－10］表明，槲皮素在抗腫瘤轉移方面顯示出明顯功效。其作用機制可能為：①對細胞周期的作用。槲皮素在肺癌細胞中可下調變異的p53 蛋白，使它的表達達到一個幾乎不可檢測的水平，且濃度越低，下調作用越弱。p53表達的抑制使得細胞停滯于G2－M 期。槲皮素抑制了HL260 細胞的增殖，可逆地增加了G2／M 期的細胞數，減少了G0／G1 期的細胞數，并具有劑量依賴性。槲皮素可減少DNA的復制，導致細胞分裂的延遲。②促進細胞凋亡。槲皮素顯著抑制抗凋亡蛋白Bcl－2的表達，槲皮素封閉表皮生長因子受體酪氨酸蛋白激酶活性，抑制胰腺癌細胞系MiaPaCa－2的生長，導致其凋亡。槲皮素抗增殖作用至少部分是由于調節了EGF 介導的信號通路，PTK 抑制劑阻止了EGFR 信號通過，從而誘導了細胞凋亡。

在試驗中，槲皮素能阻止Lewis肺癌和乳腺癌的轉移，證實了其在機體整體系統中的抗腫瘤轉移作用，作用機制可能主要與上述的促進細胞凋亡和阻止細胞周期相關。

我們的研究表明，槲皮素不僅對腫瘤有良好的轉移抑制作用，并且可以促進免疫系統發生反應，分化更多免疫細胞以對抗癌細胞。槲皮素較之常規化療藥物有其優勢，將其用于不能耐受常規腫瘤化療的患者或者經結構改造后使其抗腫瘤及免疫調節作用均增強，這不失為一種可行的研制抗腫瘤藥物的新途徑。槲皮素在我國資源十分豐富，藥理作用廣泛，抗腫瘤作用也頗有希望，加強槲皮素的基礎和臨床研究，進一步開發這個植物中普遍存在的有效成分，使之成為防治癌腫的制劑。

［1］王艷芳，王新華，朱宇同.槲皮素藥理作用研究進展［J］.天然產物研究與開發，2003，15（2）：171－173.

［2］于麗娟，林海紅，杜鋼軍，等.燈盞花素對小鼠乳腺癌術后轉移和復發的預防作用［J］.河南大學學報：醫學版，2009，28（3）：182－184.

［3］杜鋼軍，林海紅，楊義明，等.托盤根乙醇提取物的抗腫瘤抗轉移作用研究［J］.中國現代應用藥學雜志，2002，19（5）：368－369.

［4］李佳桓，林海紅，杜鋼軍.巴豆不同給藥方式對荷瘤小鼠的影響［J］.河南大學學報：醫學版，2012，31（1）：8－11.

［5］葉會呈，文慧玲.槲皮素對小鼠免疫功能影響研究［J］.中國醫藥導刊，2008，10（4）：611－613.

［6］朱蕾，何麗婭.槲皮素抗癌作用的分子機制［J］.武漢科技大學學報：自然科學版，2004，27（2）：194－196.

［7］孟德勝，汪仕良.槲皮素的抗癌作用［J］.中草藥，2001，32（2）：187－188.

［8］Yoshida M，Yamamoto M，Nikaido T.Quercetin arrests human leukemic T－cells in late G1phase of the cell Cy cle［J］.Cancer Res，1992，52（23）：6676－6681.

［9］Lee L T，Huang Y T，Hwang J J，et al.Blockade of the epidermal growth factor receptor tyrosine kinase activi2ty by quercetin and luteolin leads to growth inhibition and apoptosis of pancreatic tumor cells［J］.Anticancer Res，2002，22（3）：1615－1627.

［10］Zhang X，Xu Q，Saiki I.Quercetin inhibits the invasion and mobility of murine melanoma B162BL6cells through inducing apoptosis via decreasing Bcl22expression［J］.Clin Exp Metastasis，2000，18（5）：415－421.