三種非液態眼用制劑對豚鼠眼瞼及淚囊周圍組織的不良反應觀察

高建偉，楊旭東，王西良，景善雨，張阿芳

(焦作市五官醫院，河南焦作 454000)

近年來，眼膏和凝膠制劑在眼科疾病的治療方面出現一些新用法，如淚道手術后在淚道內注入各種眼膏和凝膠制劑，以期在淚道保留較長時間，防止再次粘連［1～5］。但臨床上可見到淚道術后和眼科術后眼膏進入眼周圍軟組織引起嚴重不良反應的患者，治療比較棘手。2012年6月～2013年1月，本研究將三種眼用非液態制劑分別注射于豚鼠下眼瞼和淚囊周圍皮下輪匝肌組織中，觀察該三種眼用非液態制劑對豚鼠眼瞼和淚囊周圍組織的不良反應?，F報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物分組與模型制作 清潔級豚鼠72只，2～4周齡，體質量120～150 g。隨機分為A、B、C組，每組各24只。豚鼠以速眠新0.1 mL/kg進行腹腔麻醉。剪去下眼瞼及周圍毛發，暴露皮膚。眼周吉爾碘消毒。顯微鏡下用1 mL注射器加5 mL注射器針頭，在下瞼緣下3 mm平行于下瞼緣進針2 mm。A、B、C組分別于眼瞼輪匝肌及淚囊周圍注射以凡士林、液體石蠟和羊毛脂為基質的紅霉素眼膏，以玻璃酸鈉為基質的左氧氟沙星眼用凝膠，以及甲基纖維素各0.5 mL，在下瞼和淚囊周圍形成直徑15 mm的皮丘。

1.2 觀察指標 分別于第1、3、7天測量三組眼瞼充血腫脹的直徑，于第 1、3、7、14、21、28 天測量各組豚鼠注射眼下瞼注射點為中心結節形成的直徑。上述6個時間點各組分別處死4只豚鼠，平行于下瞼緣切開皮膚，從皮下向周圍分離，完全掀起注射區皮膚，在手術顯微鏡下觀察皮下組織內藥物的擴散情況，并測量組織內擴散的直徑的大小。取組織標本切片做HE染色，觀察組織病理學改變。

1.3 統計學方法 采用SPSS10.0統計軟件包。計量資料比較采用單因素方差分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 眼瞼充血腫脹情況 A組注射后第1天眼瞼充血腫脹最重，直徑超過20 mm，甚至表面壞死形成潰瘍，第14天才完全消退。B組第1天全部充血腫脹，第3天有14只眼充血腫脹消退，第7天僅有2只眼還有紅腫;C組第1天眼瞼輕度充血腫脹，第3天完全消退。A組第1、3、7天眼瞼腫脹直徑均高于B、C 組(P 均 ＜0.05)。見表1。

表1 三組注射后第1、3、7天眼瞼腫脹直徑比較()

表1 三組注射后第1、3、7天眼瞼腫脹直徑比較()

注:與 A組比較，*P ＜0.05

組別 腫脹直徑第1天 第3天 第7天A組21.20 ±1.26 15.93 ±1.02 5.74 ±0.52 B 組 12.40 ±1.02* 4.50 ±1.29* 0.74 ±1.32*C 組 6.67 ±2.44* 2.50 ±0.93* 0.09 ±0.38*

2.2 結節形成情況 A組注射第1天注射點周圍均有結節形成，觸診結節略小于紅腫邊界，第3天結節與腫脹直徑相似，第14天后充血水腫消退，結節直徑仍有10 mm，第21、28天結節直徑減少不明顯;B組注射后第1天結節直徑(6.38±0.48)mm，消退較快，第21、28天各有2只眼結節未消退;C組第1天有3只眼有較小結節形成，余眼瞼均正常，第3天僅有1只眼可觸到結節，一直持續到第28天，一直未消退。A組各時間點注射點周圍結節直徑均高于B、C組(P均 ＜0.05)，B、C 組比較差異無統計學意義。見表2。

表2 三組各時點注射點周圍結節直徑比較()

注:與 C 組比較，*P ＜0.05

組別 n結節直徑(mm)第1天 第3天 第7天 第14天 第21天 第28天A 組 24 16.90 ±0.79* 13.90 ±0.90* 14.00 ±1.02* 10.60 ±0.74* 10.60 ±0.74* 8.85 ±0.26*B 組 24 6.38 ±0.48* 1.73 ±1.78* 0.83 ±0.89* 0.52 ±0.77 0.33 ±0.63 0.25 ±0.5 C 組 24 0.15 ±0.41 0.12 ±0.37 0.14 ±0.38 0.18 ±0.41 0.13 ±0.35 0.25 ±0.5

2.3 眼用制劑擴散程度 A組第1天藥物擴散直徑明顯大于注射時的15 mm，周圍組織間隙可見眼膏浸潤，第3天直徑縮小，第7天被纖維組織所包裹，第14天后伴隨纖維組織收縮，直徑為(13.42±0.74)mm;B組第1天4只眼中，有3只有少量藥物存在于組織間隙，直徑明顯小于注射時的15 mm，第3天4只眼有3只完全吸收，第28天藥物完全吸收;C組第1天4只眼中，有2只殘存未吸收的甲基纖維素，第3天藥物完全吸收。A組各時點藥物擴散直徑均高于B、C組，B組第1、3、7天藥物擴散直徑高于C組(P均＜0.05)。見表3。

2.4 組織病理學觀察結果 A組注射后第1天可見眼膏滲入組織間隙，周圍血管擴張，可見紅細胞、炎癥細胞浸潤和壞死組織;第3天周圍壞死更明顯，中性粒細胞減少，嗜酸性粒細胞和淋巴細胞逐漸增多，可見單核巨噬細胞，周圍可見少量纖維組織增生;第7天炎癥細胞減少，壞死組織吸收，周圍成纖維細胞增生明顯，將病灶包裹;第14天增生的纖維組織將病灶包繞，炎癥細胞基本消失，成纖維細胞增生活躍;第21、28天纖維組織炎癥細胞消失，注射區可見瘢痕組織。B組注射后第1天未見明顯腔隙，注射區少量炎癥細胞浸潤，主要為中性粒細胞和嗜酸性粒細胞，周圍血管擴張，壞死不明顯;第3天炎癥細胞基本消退，少量纖維組織增生;第7天少量瘢痕組織形成，結構基本恢復正常。C組注射后第1天僅有少量炎癥細胞浸潤，以中性粒細胞為主，可見少量嗜酸性粒細胞，未見明顯壞死;第3天炎癥細胞消失，未見纖維組織增生，眼瞼結構恢復正常。

表3 三組各時點藥物擴散直徑比較()

表3 三組各時點藥物擴散直徑比較()

注:與 C 組比較，*P ＜0.05

組別 n藥物擴散直徑(mm)第1天 第3天 第7天 第14天 第21天 第28天A 組 24 18.00 ±0.71* 15.20 ±0.81 15.20 ±0.81 10.10 ±0.94* 9.34 ±0.50* 8.85 ±0.26*B 組 24 6.03 ±0.62 4.83 ±0.33* 3.42 ±0.79* 0.75 ±1.50 0.50 ±1.00 －C組24 3.65 ±0.48 － － － － －

3 討論

研究表明，以凡士林、羊毛脂和液體石蠟為基質的紅霉素眼膏［6，7］。注入眼瞼后，可在輪匝肌層之間形成藥物腔隙，在表面形成一直徑15 mm的皮丘。A組注射后第1天眼瞼周圍血管擴張，局部充血腫脹，壓力增高，炎癥細胞浸潤破裂，釋放溶酶體和炎癥介質，局部缺血甚至壞死形成潰瘍。眼膏在體溫下，溶解形成稀薄的液狀，進入周圍組織間隙，引起炎癥細胞浸潤、血管擴張，眼瞼充血腫脹直徑明顯大于注射時的范圍。而隨著局部炎癥消退，充血腫脹逐漸減退，纖維母細胞增生，產生大量纖維組織包裹眼膏，在局部形成結節，眼膏的擴散受到局限。A組充血腫脹、結節形成直徑均高于B、C組，說明紅霉素眼膏進入組織間引起的炎癥反應明顯，纖維組織增生，將眼膏機化包裹，難以被組織降解吸收。

玻璃酸鈉是眼科手術常用的黏彈劑，注入組織后，在局部的代謝量很少，主要擴散至血中，在肝臟降解成小分子產物而排泄［8］。玻璃酸鈉可保護組織免受蛋白溶解酶的降解，減輕炎癥介質對痛覺受體的刺激作用，減輕多形核白細胞、中性粒細胞及淋巴細胞的趨化作用，抑制巨噬細胞吞噬，清除自由基等。由于玻璃酸鈉是一種高分子物質，經過血管壁吸收困難，在局部停留時間較長，本研究發現，B組應用以玻璃酸鈉為基質的左氧氟沙星眼用凝膠后3 d左右藥物吸收，且藥物在局部引起的炎癥反應甚微，組織結構能夠恢復正常。另外，玻璃酸鈉還能促進組織損傷修復，在損傷初期，依靠本身的氨基葡聚糖成分停留于創面，與血纖維蛋白結合，構成細胞間基質的支架，由此來調節成纖維細胞增生和肉芽組織形成。所以玻璃酸鈉注入組織后雖然局部停留時間較長，但不會引起嚴重不良反應。

甲基纖維素與玻璃酸鈉一樣，是眼科手術所使用的黏彈劑，具有無毒、無菌、無致免疫反應，不含致熱源和蛋白質。其無生物活性，組織相容性好，不易引起炎癥反應和組織增生、粘連，容易在組織內代謝［9～11］。本研究發現，C組應用甲基纖維素注入眼瞼組織后被迅速吸收，幾乎不引起炎癥反應。與玻璃酸鈉相比，甲基纖維素黏稠度更低，分子量更小，具有親水性，易被稀釋，能迅速進入血液循環而被降解。故C組第1、3、7天藥物擴散直徑小于B組。

本研究結果表明，以凡士林、羊毛脂和液體石蠟為基質的紅霉素眼膏進入豚鼠眼瞼組織難以被吸收降解，注射第1天即可引起嚴重的炎癥反應，引起多種炎癥細胞浸潤和組織壞死。故不建議注入到組織內，以免引起嚴重不良反應。玻璃酸鈉和甲基纖維素對眼瞼組織相對無害，能夠被較快吸收，致免疫反應作用較輕，可在淚道手術后注入，起到軟性支撐的作用。

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