CD146 在子宮內膜異位癥患者在位及異位內膜中的表達及意義

郭蕊萌，尹利榮，王宇全，馬洪達

（天津醫科大學第二醫院婦科，天津 300211）

子宮內膜異位癥（endometriosis,EMs）是指具有生長功能的子宮內膜組織出現在子宮腔被覆黏膜以外的其他部位，并生長、發育，引起癥狀。其為良性疾病，但具有惡性腫瘤的生物學特性，嚴重困擾著罹患婦女。EMs 發病機制尚不明確，但血管形成是異位內膜能夠成功種植、生長的關鍵步驟。CD146是近年來發現的一種具有跨膜結構的黏附分子，在腫瘤細胞的生長、轉移和血管生成中發揮了重要作用，已被認為是抗腫瘤血管新生的靶目標，而其在EMs 中的表達及意義卻缺乏研究。本研究檢測了EMs 患者在位、異位內膜中CD146 的表達情況，并結合微血管密度（MVD）的檢測探討其在EMs 發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 EMs組：選擇2010年1月-2012年2月在我院因子宮內膜異位癥行手術治療的病人50例，平均年齡（34.74±3.132）歲。異位內膜標本取材于卵巢子宮內膜異位囊腫壁；在位內膜標本取材于患者術前的診刮內膜或術中切除的子宮標本內膜，其中增殖期內膜26例，分泌期內膜24例。對照組：選擇同期在我院因子宮肌瘤行手術治療的患者50例，平均年齡（37.06±2.632）歲。術前留取診刮內膜或術中對切除的子宮標本內膜進行取材，其中增殖期內膜22例，分泌期子宮內膜28例。EMs組及對照組病人均月經規律，術前3個月無激素治療病史,排除子宮腺肌病，無合并內外科疾病。EMs組與對照組患者年齡差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 主要試劑 鼠抗人多克隆CD146 抗體，購自北京博奧森生物技術有限公司，鼠抗人單克隆CD34 抗體及DAB 顯色試劑盒，購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 染色方法 將內膜組織制成4 mm 左右病理切片。CD146、CD34 濃度為1∶100，免疫組化染色采用生物素-酶標鏈霉親和素（SP）法，具體操作步驟按試劑盒內說明書進行，以PBS 緩沖液代替一抗（濃度為1∶100）作為陰性對照。

1.4 結果判斷

1.4.1 CD146 陽性率計算方法 CD146 陽性表現為細胞膜或細胞漿上顯示棕黃色顆粒。按其染色強度評分分為：0 分，細胞不著色；1 分，細胞著色強度弱于陽性對照細胞；2 分，細胞著色強度與陽性對照細胞著色強度相同；3 分，細胞著色強度強于陽性對照細胞。將染色強度評分≥1 分的細胞列入陽性細胞計數范圍。陽性細胞率=陽性細胞數/觀察細胞數×100%。

1.4.2 MVD 計數方法 CD34 陽性表現為細胞膜或細胞漿上顯示棕黃色顆粒。CD34 在大多數新生血管內皮細胞表面表達，可顯示新生血管的形態，是測定MVD 的特定標記物[1]，采用weider 等方法進行。被CD34 染色的內皮細胞/細胞團，無論有無管腔形成，只要與周圍微血管和其他組織不相連，均計數為一個血管，排除肌層較厚及管腔直徑大于8個細胞的血管。MVD 計數單位為條/HP。

1.4.3 結果觀察方法 每個標本在低倍鏡下（10×10）確定3個高密度區域，每個高密度區域在高倍鏡下（20×10）計數，最后取3個區域平均值。觀察計數由3個實驗員分別進行，最終結果取三者平均值。

1.5 統計學方法 采用SPSS17.0 統計軟件進行分析，CD146 陽性率（%）及MVD 值（條/HP）數據以±s表示，計量資料的兩組比較采用t 檢驗，多組比較采用方差分析，多組間均數的兩兩比較采用q 檢驗，相關性分析采用Spearman 秩相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 EMs組及對照組中CD146 陽性率和MVD 情況

2.1.1 EMs組在位、異位內膜及對照組之間CD146陽性率和MVD 比較

EMs組異位及在位內膜中CD146 的陽性率及MVD 值均高于對照組（P<0.05）（圖1～4），而異位內膜與在位內膜相比無統計學差異（P>0.05）（表1）。

表1 EMs組在位、異位內膜及對照組之間CD146 陽性率和MVD比較Tab 1 Compare the expression of CD146 with MVD among eutopic,ectopic endometrium of EMs group and endometrium of control group

2.1.2 EMs組在位內膜與對照組內膜CD146 陽性率和MVD 比較

EMs組在位內膜無論增殖期還是分泌期，CD146 的陽性率和MVD 值均高于相應的對照組子宮內膜（P<0.05）；EMs組在位內膜分泌期CD146 的陽性率和MVD 值高于增殖期（P<0.05）；對照組分泌期子宮內膜CD146 的陽性率和MVD 值亦高于增殖期，但差異無統計學意義（P>0.05）（表2）。

表2 EMs組在位內膜與對照組CD146 陽性率和MVD 比較Tab 2 Compare the expression of CD146 with MVD between eutopic endometrium of EMs group and endometrium of control group

2.2 CD146 陽性率、MVD 值與R-AFS 相關性 EMs組在位及異位內膜中CD146 陽性率、MVD 值均與患者臨床分期的R-AFS 評分呈正相關性（表3）。

2.3 CD146 表達率與MVD 值相關性 所有標本中，CD146 表達率與MVD 值呈明顯正相關，r=0.833（P<0.05）。

表3 EMs組在位、異位內膜中CD146 陽性率、MVD 值與R-AFS評分相關性Tab 3 The correlation of the expression of CD146 and MVD with clinical stage(R-AFS)in eutopic,ectopic endometrium of EMs group

3 討論

EMs 病因學說眾多，但一直以經典的Sampson學說作為主導理論，即EMs 是子宮內膜手術種植于腹腔及切口或在月經來潮時隨經血逆流進入腹腔，種植于腹膜及盆腔其他臟器漿膜面，繼而形成病灶，異位內膜隨月經周期反復脫落、出血引起一系列病理改變及臨床癥狀。然而此學說不能解釋為什么70%～90%婦女都會出現經血逆流現象，卻僅10%～15%婦女發病，且高齡婦女中發病率未見明顯上升。近年，郎景和提出了EMs 的“在位內膜決定論”[2]，即不同個體逆流經血中的內膜碎片能否在“異地”黏附、侵襲、生長，在位內膜是關鍵，在位內膜的差異是根本差異，是發生EMs 的決定因素。因此研究的焦點轉向了EMs 患者在位子宮內膜與非EMs 患者子宮內膜之間存在的差異。

脫落的子宮內膜在非正常位置存活，必須依賴足夠的血液供應的建立及維持[3-5]，既往研究已證實EMs 患者體內血管生成活性升高，表現為血液、腹腔液、病灶中的多種促血管生成因子增加及病灶中MVD 值的升高[6]。本研究顯示EMs 患者在位和異位內膜中MVD 值相近，均高于非EMs 患者，且隨著臨床期別的增加而升高，亦證實了EMs 患者的微血管生成活性增強，且在疾病進展中具有重要意義。

血管新生需要內皮細胞連接結構的分離、內皮細胞的增殖遷移、細胞-細胞間和細胞-基質間的連接結構的重建等，其中內皮細胞的黏附、增殖和遷移是血管新生的關鍵過程,細胞間黏附分子在這一過程中發揮重要作用。CD146 最初從黑色素瘤細胞上發現，是一種具有跨膜結構的黏附分子，是免疫球蛋白超家族的一員。其在人血管內皮細胞，平滑肌細胞，活化的T 細胞及小腦皮層等組織中均有表達。Kang 等[7]學者研究發現，敲除內皮細胞CD146基因后，內皮細胞增殖、黏附和遷徙功能均受到一定程度的限制，提示了CD146 在血管新生過程中的重要性。實驗還證實，CD146 通過影響血管形成，參與了多種腫瘤的發生、發展[8-9]。本研究顯示EMs 患者在位、異位內膜中CD146 的表達水平與MVD 值的變化一致，均與患者臨床分期呈正相關，且在所有內膜標本中，CD146 表達率與MVD 值呈明顯正相關，提示CD146 很可能通過促血管生成參與了EMs 的發病、發展。另外，本研究還發現，EMs 患者在位內膜中，分泌期的CD146 表達率和MVD 值均高于增殖期，而正常內膜卻未表現出此差異，提示EMs 患者分泌期內膜中CD146 的過表達可能在EMs 的發生中起了更重要的作用。

綜上所述，EMs 患者在位及異位內膜中CD146的過表達引起子宮內膜中微血管生成增多，這種病理改變促使子宮內膜異位病灶的發生、發展。

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