溫脾湯對小鼠缺血腦組織SOD和MDA的影響

吳思思 戴偉娟

溫脾湯由附子、干姜、人參、大黃、甘草組成，作用是溫補脾陽，攻下冷積。主治脾陽不足，常用于急性單純性腸梗阻或不全梗阻等屬中陽虛寒，冷積內阻者。臨床多用于治療慢性腎衰竭、潰瘍性結腸炎、腦缺血缺氧、貧血等病癥。本實驗應用雙側頸動脈結扎制造的腦缺血模型，測定溫脾湯對腦組織中MDA和SOD含量的影響，以探討溫脾湯是否對缺血腦組織有保護作用。

1 材料

1.1藥物與試劑 草藥：人參、大黃、附子、干姜、甘草，均由濟寧邦爾中藥飲片有限公司提供。

溫脾湯制備：取上述藥物，先用水浸泡6 h，然后放入500 ml水熬制，煎煮2次，合并兩次的濾液至200 ml。置于冰箱中保存，臨用前搖勻。

丙二醛(MDA)測定試劑盒：由南京建成科技有限公司提供。超氧化物歧化酶(SOD測定試劑盒：由南京建成科技有限公司提供。蛋白測定試劑盒：由南京建成科技有限公司提供。

1.2動物 昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，購自山東省防疫站實驗動物室。

1.3儀器 紫外分光光度劑 UV754N 上海精密科學儀器有限公司生產。

2 方法

2.1分組與給藥 昆明種小鼠40只，隨機分4組：模型組、溫脾湯低、中、高劑量組[灌胃0.4，2.0，10.0 ml/(kg·d)]。模型組灌服同容積的生理鹽水。各小鼠連續灌胃8 d。

2.2小鼠腦缺血后腦組織勻漿液的制備 末次給藥后1 h，各組在結扎兩側頸總動脈1.5 h后斷頭，小心剝取兩側大腦半球，稱重，按重量∶體積=1∶9的比例加入預冷的生理鹽水(4℃)，用組織勻漿器充分勻漿，將勻漿液以3000轉/min離心12 min，取上清液。

2.3超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的測定 嚴格按照試劑盒說明，測定蛋白含量，繼而測定SOD和MDA的含量。

2.4統計學方法 實驗數據用均數±標準差表示，數據的統計分析均應用t檢驗。

3 結果

3.1超氧化物歧化酶(SOD)測定 結果表明，與模型相比，溫脾湯中、高劑量組小鼠腦組織中SOD含量顯著增高(P<0.01)，溫脾湯低劑量組小鼠腦組織中SOD含量明顯增高(P<0.05)，但不如中、高劑量顯著。見表1。

表1 溫脾湯對小鼠腦組織SOD含量的影響

注：與模型組比較，aP<0.05，bP<0.01

3.2丙二醛(MDA)測定 結果表明，與模型組相比，溫脾湯組小鼠腦組織中MDA含量顯著下降。見表2。

表2 溫脾湯對小鼠腦組織MDA含量的影響

注：與模型組相比，aP<0.05

4 討論

溫脾湯由人參、大黃、附子、干姜、甘草組成，近年來研究發現其成分或其有效成分對缺血有保護作用，但對復方湯劑未有明確研究。

本實驗采用小鼠雙側頸動脈結扎制造腦缺血模型，測定溫脾湯對腦組織中MDA和SOD含量的影響。結果表明與模型組相比溫脾湯組小鼠腦組織中SOD的含量明顯增加，且有明顯的劑量依賴性(低、中劑量組與模型組比較，P<0.05;高劑量組與模型組比較，P<0.01)。MDA含量顯著下降(給藥組與模型組比較，P<0.05)。

自由基代謝異常是腦缺血再灌注損傷的重要原因，腦缺血時,自由基的生成增加，防御機制活性降低，造成自由基損傷，腦缺血后，血清中MDA含量明顯升高，說明其脂質過氧化反應增強，SOD受到抑制,自由基清除能力降低，兩者呈負相關。因此，SOD和MDA的水平直接反映機體氧自由基的變化。

據有關資料報道，溫脾湯的有效成分有升高SOD和降低MDA含量的作用。呂風亞等[1]在實驗中發現，大鼠腦缺血再灌注后應用人參總皂苷治療可提高腦組織SOD含量，降低MDA的含量。李建生等[2]在研究大黃苷及苷元對腦缺血損傷大鼠自由基代謝的影響時指出，大黃苷及苷元能明顯提高大鼠SOD活性，降低MDA含量。宋鐵山等[3]在實驗中發現甘草總黃酮對腸缺血再灌注大鼠，能明顯降低血清和腸組織中的MDA的含量，提高體內SOD的活性。 孫慧蘭研究四逆湯的實驗[4]發現附子生物堿、干姜揮發油及甘草粗提取品都可不同程度地提高心肌缺血/再灌注損傷心肌的SOD活性，降低其MDA含量。閻惠英等[5]用榨出的生姜汁研究對黃嘌呤氧化酶系統所產生的超氧陰離子自由基有抑制作用，結果表明姜汁可使小鼠離體血清和肝勻漿超氧化物歧化酶(SOD)活力顯著增加。 由此可進一步證明溫脾湯的各個組成成分都有升高SOD和降低MDA的作用為本實驗提供了重要依據。而本實驗的結果，證明了溫脾湯這種復方湯劑用于保護缺血腦組織的可行性。

[1] 呂風亞.人參總皂甙對大鼠腦缺血再灌注后MDA、SOD及細胞凋亡的影響.腦與神經疾病雜志,2005,13(3):189-191.

[2] 李建生,劉敬霞,梁生旺,等.大黃苷及苷元對腦缺血損傷大鼠自由基代謝的影響.中國臨床康復,2004,8(34)：7748-7750.

[3] 宋鐵山,李湘楚.甘草總黃酮對大鼠腸缺血再灌注損傷的保護作用,咸寧學院學報(醫學版),2004,18(5)：330-331，334.

[4] 孫慧蘭,吳偉康,羅漢川,等.四逆湯有效部位抗心肌缺血/再灌注損傷神經酰胺機制的研究.中成藥,2005,27(12):1429.

[5] 閆慧英,張杰梅,喬曉君.姜和蒜抑制活性氧作用的研究.包頭醫學院學報,1997,13(1):10-12.