推拿手法防治失神經骨骼肌萎縮的實驗研究

馬書杰嚴雋陶黃品賢

（1.上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院、上海市中醫藥研究院推拿研究所，上海 200437；2.上海中醫藥大學統計教研室，上海 201203）

推拿手法防治失神經骨骼肌萎縮的實驗研究

馬書杰1嚴雋陶1黃品賢2

（1.上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院、上海市中醫藥研究院推拿研究所，上海 200437；2.上海中醫藥大學統計教研室，上海 201203）

目的：探討推拿手法對延緩失神經骨骼肌萎縮的作用及途徑。方法：六月齡新西蘭家兔84只，切斷右下肢脛神經后隨機分為失神經手法治療組（手法組）42只、失神經模型對照組（模型組）42只。手法組給予按揉法治療，模型組不予手法干預。分別在造模后第1、2、3周和第1、2、4、6個月時間點每組各取6只家兔檢測腓腸肌肌濕重、收縮力及衛星細胞計數。結果：造模后2周起手法組家兔腓腸肌收縮力明顯高于模型組；造模后2月起手法組家兔腓腸肌肌濕重明顯高于模型組；腓腸肌失神經后4周內，手法組肌衛星細胞增殖趨勢高于模型組，而4周以后，手法則不再起作用。結論：推拿手法在一定程度上可延緩失神經后骨骼肌萎縮，手法促進骨骼肌衛星細胞增殖與分化是手法減緩肌萎縮的可能途徑之一。

骨骼肌萎縮 失神經 肌衛星細胞 推拿手法

骨骼肌損傷是臨床常見的一大類疾患，在臨床實際中，骨骼肌急性損傷往往同時伴有神經損傷，由于治療手段應用不當或是治療不及時徹底，常常導致肌肉萎縮和再損傷。研究骨骼肌急性損傷的修復方式以及促進修復的手段，已成為國際運動、醫學界的研究熱點，包括手法治療的物理治療是目前治療骨骼肌損傷的有效手段。我們對手法在防治骨骼肌失神經萎縮中的作用及其機制進行了研究，現報告如下。

1 實驗材料

1.1 實驗動物新西蘭家兔，6月齡，雄性，體重（2.21±0.15）kg，由上海海軍研究院動物房提供。單籠，自由飲水，20℃恒溫環境飼養。

1.2 主要試劑及儀器3%戊巴比妥鈉（上海西唐生物科技有限公司提供，批號：20110112）；蘇木精、伊紅染色劑；YF-3手法測試儀（由上海中醫藥大學和復旦大學共同研發）；Powerlab/16型多道生理記錄儀（澳大利亞ADInstruments公司產品）；Dual BIO Amp/Stimulator隔離電刺激儀（澳大利亞ADInstruments公司產品）；光學顯微鏡（OLYMPUS CH）；圖像分析系統（OLYMPUS BX50）；電子天平（上海天平儀器廠）。

2 實驗方法

2.1 動物造模骨骼肌失神經動物模型：每只家兔均行下肢脛神經切斷術，造成失神經模型。3%戊巴比妥鈉溶液，1.5mL/kg體重，家兔腹腔緩慢注射麻醉，麻醉成功后右下肢剃毛，暴露腘窩及大腿后部，將家兔固定在動物手術臺上，局部消毒，做膝上股后外側切口，于腘窩解剖后暴露脛神經，鈍性分離出家兔右側脛神經，切斷脛神經干，并將近端游離斷端向上折返縫入股二頭肌肌膜上，阻止神經間自然生長，左下肢不做任何處理。

2.2 實驗分組計算機隨機將造模成功的家兔分為2組：失神經手法組（手法組）42只，失神經模型對照組（模型組）42只。

2.3 干預手段手法組大鼠造模成功后予按揉法干預[1]，干預手法的輕重及頻率通過YF-3手法測試儀標定，由專人經訓練，在實驗家兔右下肢后側腓腸肌肌腹操作。按揉法參數設為：壓力2kgf、頻率140次/min，每日1次，每次治療時間為15min。模型組不作手法干預。

2.4 檢驗指標各組在造模后第1、2、3周和第1、2、4、6個月各取6只家兔行以下指標檢測：腓腸肌收縮力、腓腸肌肌濕重、衛星細胞切片光鏡PCNA染色半定量計數。

2.5 統計學方法數據的分析與處理采用SPSS18.0軟件包，數據用±s）表示。組間采用2×7析因設計方差分析方法行統計檢驗，所有的統計檢驗以P＜0.05被認為所檢驗的差別有統計學意義。

3 實驗結果

3.12 組家兔造模后不同時間點腓腸肌收縮力比較見表1、表2、圖1。在造模后第2、3周以及第1、2、4和6月時間點，手法組家兔腓腸肌收縮力明顯高于模型組（P＜0.01）。雖然失神經后腓腸肌收縮力總體呈下降趨勢，但是自第2周至第2個月，手法組家兔腓腸肌收縮力下降平緩，略低于第1周，說明手法能維持、減緩急性失神經損傷后的腓腸肌收縮力的降低，但是2個月之后，2組腓腸肌收縮力出現明顯下降趨勢，但手法組仍明顯高于模型組，可見手法對于骨骼肌急性失神經后減緩腓腸肌收縮力下降有很大作用。

3.22 組家兔造模后不同時間點腓腸肌肌濕重比較結果見表3、表4、圖2。由趨勢圖走勢可見腓腸肌肌濕重比重總體呈下降趨勢，于造模后2周開始，手法組肌濕重比重高于模型組，造模2個月后，2組肌濕重比重走勢均較平穩，手法組明顯高于對照組，說明手法可以減緩腓腸肌肌濕重比重下降幅度與程度，但無神經再支配情況下仍不能阻止腓腸肌萎縮的趨勢。

表1 手法組與模型組家兔造模后不同時間點腓腸肌收縮力比較（±s）g

表1 手法組與模型組家兔造模后不同時間點腓腸肌收縮力比較（±s）g

組別動物數（只）統計量不同時間點腓腸肌收縮力1周2周3周1月2月4月6月手法組6x模型組6s0.320.270.310.150.27 0.150.26 sx 4.223.83 0.160.11 4.223.06 3.693.703.602.582.13 0.110.140.120.220.24 2.822.772.691.931.52相同時間點組間比較F0.65125.97223.67424.64519.15526.25318.200 P0.4460.0010.0020.0020.0030.0010.004

表2 腓腸肌收縮力指標2×7析因設計方差分析結果

圖1 手法組與模型組家兔造模后不同時間點腓腸肌收縮力的變化

表3 手法組與模型組家兔造模后不同時間點肌濕重比重比較（±s）

表3 手法組與模型組家兔造模后不同時間點肌濕重比重比較（±s）

組別動物數（只）統計量不同時間點腓腸肌濕重比重1周2周3周1月2月4月6月手法組6x模型組6s0.0610.0360.0620.1010.048 0.0500.040相同時間點組間比較F0.3790.0311.3720.32323.1120.4126.530 P0.5580.8650.2800.5880.0020.5410.038 sx 0.9080.584 0.1170.060 0.8520.593 0.5820.4860.5770.5750.559 0.1630.0460.0300.1100.083 0.5200.4670.4710.4530.446

表4 肌濕重比重指標2×7析因設計方差分析結果

圖2 手法組與對照組家兔造模后不同時間點肌濕重比重變化

3.32 組家兔造模后不同時間點腓腸肌衛星細胞計數比較見表5、表6、圖3。手法組與模型組家兔腓腸肌肌衛星細胞數目在造模后第3周時達到高峰，且手法組肌衛星細胞數目在前3周均高于模型組。而在造模后第1、2、4和6月時，手法組肌衛星細胞數目低于模型組。在第3周到第1個月，手法組與模型組肌衛星細胞數目都出現驟降，且手法組下降幅度超過模型組，第1個月時其數目低于模型組。到第2、4個月時2組肌衛星細胞數目中位數仍繼續下降，手法組明顯低于模型組，肌衛星細胞有耗竭趨勢。在第6個月時2組家兔肌衛星細胞數目中位數為最低。模型組在前3周肌衛星細胞數增長速度明顯低于手法組，說明手法干預在失神經前3周內可以明顯提高肌衛星細胞數目。而到第6個月時2組肌衛星細胞數目基本持平且都降至最低，可見如果不能早期恢復神經支配，手法到后期也不能阻止肌衛星細胞耗竭。上述結果說明兩個問題：一是肌衛星細胞總數一定，手法治療可以促進肌衛星細胞早期快速增殖，但不能增加肌衛星細胞的數量，所以會很快耗盡肌衛星細胞，反而造成后期快速下降，并低于模型組；二是早期失神經后手法治療可以起到促進肌衛星細胞增殖、延緩骨骼肌萎縮的作用。

4 討論

骨骼肌萎縮的防治已成為國內外研究的熱點，肌衛星細胞是骨骼肌再生修復的關鍵因素[2]。肌衛星細胞是一種具有增殖和自我更新能力的成肌干細胞，主要位于骨骼肌運動終板附近的肌膜與基膜間，在骨骼肌細胞生長和再生時，提供肌細胞核。通常情況下，肌衛星細胞處于未激活的靜止狀態，當肌細胞受傷時，衛星細胞即被激活并移行到肌纖維附近，形成大范圍的增殖與分化[3]。本實驗制成家兔骨骼肌失神經支配模型，在失神經后4周內，手法組家兔骨骼肌收縮力及骨骼肌濕重比均比模型組下降趨勢緩慢，說明推拿手法有一定減緩失神經骨骼肌萎縮的作用；但到第4周以后，手法的作用明顯減弱或者消失，其原因可能與失神經后營養中斷，神經營養因子等不能得以補充，再加上本身的消耗，以及骨骼肌運動終板退化有關。而肌衛星細胞經推拿手法治療后在失神經第1周即開始增殖，一直持續到第3周，其數量都明顯高于模型組，但是從第1個月開始其增殖速度明顯下降，且下降速度快于模型組，肌衛星細胞的數量也低于對照組。這說明手法在治療早期加快了失神經后骨骼肌的肌衛星細胞增殖速度，也很有可能加速了肌衛星細胞向成肌纖維的肌組織轉化，而這與骨骼肌收縮力及肌濕重的變化趨勢緩慢相吻合。所以，促進肌衛星細胞的增殖與分化，是手法防治骨骼肌萎縮的可能途徑之一，如果聯合現代康復醫學的被動訓練法，在治療神經不完全受損肌萎縮的早期應用方面應當有十分積極的意義，而手法防治骨骼肌萎縮的分子細胞機制還有待深入研究。

表5 手法組與模型組家兔造模后不同時間點腓腸肌肌衛星細胞數計數比較個

表6 失神經損傷后不同療法肌衛星細胞數指標2×7析因設計方差分析結果

圖3 手法組與模型組家兔造模后不同時間點肌衛星細胞數目變化

[1]《中醫學》編輯委員會.中國醫學百科全書·中醫學.上海：上?？茖W技術出版社，1997：856

[2]SchwartingS，SchroderM，StennertE，etal．Morphologyof denervated human facial muscles．ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec，1984，46（5）：248

[3]JunHu，XilinZhang，JuntaoYan.EffectsofMassageon Satellite Cells of Acute Contusive Skeletal Muscles.Journal of Acupuncture and Tuina Science，2007，2（5）：6

R685.05

A

1672-397X（2014）11-0079-03

馬書杰（1986-），女，博士研究生，研究方向：推拿的基礎研究與臨床應用。

嚴雋陶，doctoryjt@sohu.com

2014-06-17

編輯：吳寧

國家自然科學基金資助項目（30973806）；上海市中醫藥事業發展三年行動計劃（海派中醫流派傳承工程）丁氏推拿項目（ZYSNXD-CC-HPGC-JD-011）；嚴雋陶全國名老中醫藥專家傳承工作室項目