高效液相色譜法測定氫溴酸山莨菪堿注射液的含量和有關物質

曹振民,王超眾,劉磊,賈首時,王萌萌

(1.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院藥劑科,齊齊哈爾 161006;2.黑龍江省齊齊哈爾市食品藥品檢驗檢測中心,齊齊哈爾 161006;3.黑龍江省齊齊哈爾市第一醫院藥劑科,齊齊哈爾 161005;4.黑龍江省齊齊哈爾市第一醫院中西醫結合科,齊齊哈爾 161005)

高效液相色譜法測定氫溴酸山莨菪堿注射液的含量和有關物質

曹振民1,王超眾2,劉磊3,賈首時2,王萌萌4

(1.齊齊哈爾醫學院附屬第二醫院藥劑科,齊齊哈爾 161006;2.黑龍江省齊齊哈爾市食品藥品檢驗檢測中心,齊齊哈爾 161006;3.黑龍江省齊齊哈爾市第一醫院藥劑科,齊齊哈爾 161005;4.黑龍江省齊齊哈爾市第一醫院中西醫結合科,齊齊哈爾 161005)

目的 建立高效液相色譜(HPLC)法測定氫溴酸山莨菪堿注射液的含量和有關物質。方法采用ZORBAX Eclipse XDB-C8色譜柱(4.6mm×150 mm,5μm),以0.1%庚烷磺酸鈉溶液(用磷酸調節pH至2.5)-乙腈(65∶35)為流動相,流速為1.0 mL·min-1,檢測波長為210 nm。結果氫溴酸山莨菪堿在5～200μg·mL-1范圍內線性關系良好,回歸方程:A=31.59C+5.930,r=0.999 8(n=6),平均回收率為100.16%(RSD=1.08%)。供試品溶液在24 h內的穩定性良好(RSD=0.6%),定量限為50 ng。結論該方法簡便、準確、重復性好,適用于氫溴酸山莨菪堿注射液的質量控制。

山莨菪堿注射液,氫溴酸;色譜法,高效液相;含量測定;有關物質;質量控制

氫溴酸山莨菪堿為莨菪生物堿類M膽堿受體拮抗藥,臨床用于搶救感染性、中毒性休克,治療血栓、各種神經痛以及平滑肌痙攣等?！吨腥A人民共和國藥典》2010年版二部中,氫溴酸山莨菪堿注射液未收載有關物質檢查方法,含量測定項采用的方法為紫外-可見分光光度法[1]。另有文獻報道采用電感耦合等離子體-原子發射光譜法[2]、一階導數分光光度法[3]和線性滴定微機計算法[4]測定氫溴酸山莨菪堿的含量,筆者未檢索到測定其有關物質的文獻報道。為了更好地控制產品質量,筆者采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法測定氫溴酸山莨菪堿注射液的含量和有關物質,該方法簡便可行,為控制其制劑的質量提供科學方法,也可以作為《中華人民共和國藥典》再版時參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀(包括四元泵,紫外檢測器,柱溫箱,自動進樣器,工作站);島津UV2550紫外-可見分光光度計;Sartorius BP211D型十萬分之一天平;KQ-1000型超聲波清洗器;SHB-IIIA型循環水式多用真空泵。

1.2 試藥 氫溴酸山莨菪堿對照品(批號:100051-201105)購自中國食品藥品檢定研究院;氫溴酸山莨菪堿注射液(1 m L∶10 mg)為吉林某企業提供(批號: 20110601,20110602,20110701);氫溴酸(含量40%,分析純,批號:20120801),購自上海譜振生物科技有限公司;HPLC流動相所用乙腈為色譜純(Dikma Pure);水為屈臣氏純化水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:ZORBAX Eclipse XDB-C8色譜柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流動相:0.1%庚烷磺酸鈉溶液(用磷酸調節pH至2.5)-乙腈(65∶35);流速:1.0 mL·min-1;檢測波長:210 nm;柱溫:30℃;進樣量:20μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液 精密稱取氫溴酸山莨菪堿對照品適量,用水溶解并稀釋成每毫升中約含1 mg的溶液,搖勻,即得。

2.2.2 對照品溶液 精密稱取氫溴酸山莨菪堿對照品適量,用水溶解并稀釋成每毫升中約含0.02 mg的溶液,搖勻,濾過,即得。

2.2.3 供試品溶液 取氫溴酸山莨菪堿注射液10支,混勻,精密量取適量,加水稀釋成每毫升中約含0. 02 mg的溶液,搖勻,濾過,即得。

2.2.4 有關物質檢查溶液 取氫溴酸山莨菪堿注射液10支,混勻,精密量取適量,加水稀釋成每毫升中約含0.2 mg的溶液,搖勻,濾過,作為供試品溶液。精密量取1 m L,置100 mL量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液。

2.2.5 陰性空白溶液 按處方比例制成不含氫溴酸山莨菪堿的陰性樣品,并按含量供試品溶液的制備方法制得陰性空白溶液。

2.2.6 氫溴酸溶液 精密稱取氫溴酸適量,加水溶解并稀釋成每毫升中含0.04 mg的溶液,搖勻,濾過,即得。

2.3 有關物質檢測

2.3.1 專屬性實驗 取氫溴酸山莨菪堿注射液1 mL,分別加入1 moL·L-1鹽酸溶液、1 moL·L-1氫氧化鈉溶液、3%過氧化氫溶液各1 mL,室溫放置1 h后中和;另取2份樣品分別置85℃烘箱中2 h、254 nm紫外燈下照射1 d。分別加水定容至50 m L,取20μL注入液相色譜儀。結果表明,本品經酸破壞后,主峰面積略有減小,產生降解峰一個;經堿破壞后,主峰幾乎完全消失,產生降解產物峰3個;經氧化破壞后,主峰未見減小,產1個很大的雜質峰;本品對光和熱穩定。見圖1。

2.3.2 有關物質檢測方法 照“2.1”項色譜條件,取對照溶液20μL注入液相色譜儀,調節檢測靈敏度,使主成分峰的峰高約為滿量程的20%;再精密量取供試品溶液和對照溶液各20μL,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍,供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰,除溶劑峰附近的溴離子峰外,單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍(0.5%),各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積(1.0%)。

2.3.3 有關物質檢測結果 取氫溴酸山莨菪堿注射液3批,照“2.3.2”項下方法測定有關物質,結果見表1。

2.4 含量測定方法

2.4.1 線性關系考察 精密量取“2.2.1”項下的對照品貯備液0.5,1,2,5,10,20 mL,分別置100 m L量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻。進樣分析,記錄色譜圖,以濃度(C,μg·mL-1)為橫坐標,峰面積(A)為縱坐標做線性回歸,得回歸方程:A=31.59C+5.930,r=0.999 8(n=6),線性范圍為5～200μg·m L-1。

2.4.2 精密度實驗 取“2.2.2”項下的對照品溶液,重復進樣6次,其峰面積的RSD為0.31%,結果表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復性實驗 取同批號(批號1)的樣品6份,按“2.2.3”項下方法制備6份供試品溶液,依法進樣分析,測得平均含量為99.4%,RSD為1.1%,結果表明該方法重復性良好。

2.4.4 穩定性實驗 取同一份供試品溶液,分別在0,2,6,10,16,24 h進樣分析,記錄色譜圖。峰面積的RSD為0.6%,結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.4.5 檢測限和定量限實驗 在選定的色譜條件下,按信噪比為3和10作為檢測限和定量限,測得氫溴酸山莨菪堿的檢測限為15 ng,定量限為50 ng。

圖1 不同降解條件下氫溴酸山莨菪堿的HPLC色譜圖

2.4.6 回收率實驗 取已經測得含量的樣品(批號1),精密量取1 mL,分別置9個50 mL量瓶中,分別精密加入“2.2.1”項下的對照品貯備液(1 mg·mL-1)8,10,12 m L,加水稀釋至刻度,搖勻。精密量取5 m L,置50 mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻。得相當于加樣80%,100%,120%的溶液。精密量取上述溶液各20μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。結果平均回收率為100.16%,RSD=1.08%(n=9),見表2。

表1 3批樣品有關物質檢測結果 %

表2 山莨菪堿回收率實驗結果

2.4.7 樣品測定 取3批氫溴酸山莨菪堿注射液,按“2.2”項下方法配制對照品溶液、含量供試品溶液、陰性供試品溶液和氫溴酸溶液,按“2.1”項下色譜條件進樣分析,記錄色譜圖,并按外標法計算含量,并將該結果與用“《中華人民共和國藥典》2010年版二部氫溴酸山莨菪堿注射液含量測定”項下的方法(UV法)測得的結果比較,結果見表3。

3 討論

由于HPLC法測定氫溴酸山莨菪堿的含量筆者未見報道,因此色譜條件的選擇比較困難。實驗中曾嘗試過C18、C8色譜柱,磷酸鹽緩沖液、甲酸、離子對色譜等色譜條件搭配,結果表明在應用C8色譜柱,0.1%庚烷磺酸鈉溶液(用磷酸調節pH值至2.5)-乙腈(65∶35)為流動相時得到的峰型最佳,且峰面積重復性最好。實驗中還曾對0.1 mg·mL-1的氫溴酸山莨菪堿溶液進行紫外掃描。結果表明該物質在256 nm處有最大吸收, 210 nm處有較強的末端吸收。在兩個波長處主峰均可以得到較好的峰型和重復性,但是256 nm處時雜質響應值偏低,因此最終采用210 nm作為檢測波長。

表3 紫外法和HPLC法檢測氫溴酸山莨菪堿注射液含量測定結果 %

《中華人民共和國藥典》2010年版二部中未收錄氫溴酸山莨菪堿有關物質的檢查,本研究建立HPLC法測定有關物質的方法,是對該制劑質量標準的一個補充。本研究還與《中華人民共和國藥典》收載含量測定方法(UV法)進行比較,結果表明兩種方法差異無統計學意義,但本方法專屬性更強,準確度及精密度更好,操作簡單,且相對環保,能夠對氫溴酸山莨菪堿注射液的質量控制提供充分的實驗數據。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社,2010:556-557.

[2] 王偉,孫為德.電感耦合等離子體-原子發射光譜法間接測定氫溴酸山莨菪堿注射液[J].中國醫藥工業雜志, 2003,34(4):183-184.

[3] 李德明,范義鳳,王華.一階導數分光光度法測定氫溴酸山莨菪堿凝膠中氫溴酸山莨菪堿的含量[J].中國交通醫學雜志,2005,19(1):83-87.

[4] 曹共民,高慶一,尹光華,等.線性滴定微機計算法測定氫溴酸山莨菪堿含量的初步研究[J].華西藥學雜志,1989, 4(1):37-39.

DOI 10.3870/yydb.2014.06.030

R971.9;R927.2

A

1004-0781(2014)06-0797-03

2013-08-21

2013-11-08

曹振民(1972-),男,黑龍江齊齊哈爾人,副主任藥師,碩士,從事臨床藥學工作。電話:(0)13206615731,E-mail:caozhenmin@163.com。

王超眾(1983-),男,黑龍江齊齊哈爾人,主管藥師,碩士,主要從事藥物分析工作。電話:(0)15845206412, E-mail:wangchaozhongkcn@163.com。