冬凌草適宜采收期的研究△

李洋，董誠明，徐鵬，姚鋒

(河南中醫學院，河南 鄭州 450008)

冬凌草適宜采收期的研究△

李洋，董誠明*，徐鵬，姚鋒

(河南中醫學院，河南 鄭州450008)

目的：通過研究冬凌草生長時期的發育規律及有效成分的變化，初步探討冬凌草的適宜采收時期。方法：在冬凌草整個生長發育過程中，對株高、鮮干重的變化進行測量，并用HPLC法測定植株中冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸的含量，進行分析。結果：冬凌草干物質累積的高峰期出現在9月下旬；冬凌草甲素含量在9月下旬出現相對較大值；冬凌草乙素在6月下旬出現最大值，在9月下旬出現相對較大值；迷迭香酸在6月下旬出現最大值，8月下旬出現相對較大值。結論：綜合分析，栽植期為一年的冬凌草適宜采收期為9月下旬。

冬凌草；適宜采收期；發育規律；有效成分

冬凌草Rabdosiarubescens(Hemsl.) Hara，學名碎米椏，為唇形科香茶菜屬多年生植物；味甘苦，性微寒，具清熱解毒、消炎止痛及抗腫瘤的功效[1-2]。中藥的療效主要與其有效成分的含量有關，冬凌草中的主要成分是貝殼杉烷二萜類化合物，目前研究最多且療效已被公認的是冬凌草甲素和冬凌草乙素[3]。近年來發現以迷迭香酸為代表的冬凌草水溶性成分也有明顯的藥理活性[4-5]。冬凌草在民間作為清熱解毒、消炎止痛藥并用于抗癌已多年，經20多年的藥理學研究和臨床驗證，冬凌草具有獨特的抗菌消炎和多種保健作用。冬凌草既是當今新崛起的具有多種功效的藥用植物，又是防風固沙保持水土的優秀植物，亦為優良園林觀賞植物和重要蜜源植物，是很有開發前景的經濟作物。

目前，由于亂采濫挖，冬凌草資源逐漸減少。為規范冬凌草種植，確保冬凌草質量，確定其最佳采收適宜期，以達到冬凌草“安全、有效、穩定、可控”的目的。本文主要考察上述3種有效成分，對冬凌草整個生長時期進行動態觀察，分析比較其變化規律，進而確定冬凌草最佳采收期。作為多年生植物，不同生長年限的冬凌草采收期也不相同，相關研究表明冬凌草有3種采收方法：第一種方法是正常采葉法：7～8月份，將葉片全部采集，到深秋植株復原后再進行第二次采收，適合于栽植期3年以上的冬凌草；第二種方法是輪采法：7～8月份，采取隔行采集的方法，枝葉枯萎前采收剩余部分，適合于栽植期2年以上的冬凌草；第三種方法是后期采法：在冬凌草枝葉枯萎前全部采收，適合于栽植期1年的冬凌草[6]。隨著冬凌草的綜合開發利用，藥材需求量大大增加，為滿足新藥研發及其市場需求，提高冬凌草質量與產量已是迫不及待的任務，探索其適宜采收時期，對實現其質量產量最大化具有重要意義。本研究性實驗主要選取的是一年采收的冬凌草植株，對指導冬凌草的采收提供了一定理論依據。

1 材料與方法

1.1實驗地的選擇

實驗田地選取在河南省濟源市早廟村冬凌草規范化種植基地里，塊地向陽，沙質土壤，適宜冬凌草栽種。

1.2實驗種苗的選取

供試冬凌草種苗由河南省濟源冬凌草規范化種植基地提供，經河南中醫學院董誠明教授鑒定為唇形科植物冬凌草Rabdosiarubescens(Hemsl.) Hara。

1.3大田取樣

在冬凌草生長發育初期，植株高5cm左右、3片葉片時(2008-03-25，氣溫8～19℃)開始采樣，采用5點取樣法在試驗區中采集30株冬凌草種植植株的地上部分，每隔15d采樣一次，直至冬凌草完全枯萎時停止采樣(2008-11-20，氣溫1～12℃)。觀測指標為：株高(地面到頂生葉片葉柄的高度)、鮮重、干重(自然干燥后稱重)。

1.4含量測定

將采集的冬凌草樣品自然干燥，打粉過四號篩，用于測定有效成分含量。供試品溶液的制備：精密稱取1g的冬凌草粉末，置于100mL具塞三角瓶中，加入50mL甲醇，稱量稱重，靜置30min，超聲30min，冷卻，補足重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾既得，測定冬凌草甲素及迷迭香酸的含量[7-8]。精密稱取1g冬凌草粉末，置于100mL具塞容量瓶中，加入50mL丙酮，稱量重量，靜置30min，水浴回流加熱90min，冷卻，補足重量，搖勻，過濾，吸取濾液25mL，水浴蒸干，用甲醇定容于25mL容量瓶中，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾既得，用于測定冬凌草乙素含量[9]。

2 結果與分析

2.1冬凌草生長發育規律及其有效成分的動態積累

本實驗研究了采收期為一年的冬凌草整個生長發育變化趨勢，全生育期為270d左右。一共采集樣品17次，主要觀測株高、葉片干鮮重、冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸等指標，具體實驗數據見表1。

表1 不同生長時期冬凌草生長狀況及其有效成分含量

冬凌草植株株高變化趨勢見圖1，由圖1可知：從3月25日開始，植株進入萌芽期，此時期苗勢生長旺盛，漲幅較快，4月初至8月10日左右，此期間植株是生長期，株高一直在增高，基本上呈直線型增長趨勢，增長速度較快，該階段一直進行營養生長；8月10日至9月10日，此期間植株增長緩慢，株高基本變化不大，營養生長基本停止，進入開花期，表明生殖生長階段開始，10月10日以后植株基本停止生長，植株開始生殖生長，進入種子形成期，到11月底氣候開始變冷，植株逐漸開始老化并逐步停止生長，進入枯萎期。

冬凌草植株干鮮重變化見圖2，由圖2可知：植株葉片鮮重在9月10日左右出現最大值，在此之前一直呈上升趨勢，其中4月至5月初葉片鮮重增加明顯，植株葉片數逐漸增加、植株增粗生長旺盛；葉片干重呈上升趨勢，9月25日干重出現最大值后逐漸下降，這是由于植株開始進行生殖生長，養分逐漸轉移，逐步進入衰老期，葉片逐漸變黃、脫落導致的。

冬凌草植株有效成分含量變化見圖3，由圖3可知：冬凌草甲素基本上呈逐步減小趨勢，其中在9月25日時出現一個回升小高峰，在此之后植株進入種子形成期，甲素含量逐漸減少；迷迭香酸在整個生長階段基本上呈“M”型波動性變化，在植株進入快速生長階段時即6月25日左右出現一個最大值，此后含量有所下降，在8月25日出現一個回升小高峰，此后含量逐漸減少。冬凌草乙素含量在植株整個生長期含量均較少，在表3中未顯示，其含量在6月25日至7月10日之間處于較高值，此階段植株生長發育快速，養分吸收較多，而后逐漸減少，在9月25日左右出現一個回升小高峰，此后冬凌草乙素含量逐漸減少。

2.2有效成分與其生長指標的相關性分析

通過SPSS11.0統計軟件對不同生長時期冬凌草的株高、鮮重、干重、冬凌草甲素、冬凌草乙素、迷迭香酸六種指標進行了相關性分析，見表2。

圖1 一年中冬凌草植株株高變化趨勢

圖2 一年中冬凌草植株干鮮重變化示意圖

圖3 一年中冬凌草植株有效成分含量變化趨勢圖

株高鮮重干重冬凌草甲素迷迭香酸冬凌草乙素株高1.000鮮重0.905**1.000干重0.969**0.965**1.000冬凌草甲素-0.845**-0.760**-0.774**1.000迷迭香酸-0.652**-0.297-0.4390.4801.000冬凌草乙素-0.498*-0.181-0.2820.4780.825**1.000

注：*表示顯著相關(P<0.05)，**表示極顯著相關(P<0.01)

冬凌草生長指標及其有效成分含量的相關性分析見表2，由表2可知：冬凌草甲素含量與株高、鮮重、干重之間呈極顯著負相關(P<0.01)，與迷迭香酸、冬凌草乙素呈正相關；迷迭香酸與冬凌草乙素呈顯著正相關(P<0.01)，兩者均與冬凌草甲素呈正相關性；與冬凌草株高呈顯著負相關(P<0.05或P<0.01)，與鮮重呈負相關。相關性分析結果的表明：冬凌草三種有效成分的含量與植株生長、葉片干鮮重之間呈負相關性，冬凌草藥材應在冬凌草生物產量適宜時及時采收，在考慮產量的同時也充分注意有效成分含量問題，確保藥材的高質高產。

采用多指標綜合加權評分法，從株高(a)、葉片干重(b)、葉片鮮重(c)、冬凌草甲素(d)、迷迭香酸(e)、冬凌草乙素(f)幾個方面對冬凌草不同生長時期的綜合效益進行分析評價，從而篩選出最佳采收時期，分別賦予不同主觀系數：0.1、0.2、0.2、0.2、0.1、0.2，得到綜合加權評分值OD值。綜合加權平均評分值見表3(其中序號1～17表示從3月25日到11月25日不同采樣時期)。

OD=(0.1×ai/amax+0.2×bi/bmax+0.2×ci/cmax+0.2×di/dmax+0.1×ei/emax+0.2×fi/fmax)×100

其中i指第幾次采樣時期；max指該指標項下最大值。

表3 不同采收時期冬凌草的產量及質量綜合評價

由表3可知，7號和13號OD值最高均為69，即：6月25日和9月25日，此時間段植株產量與質量品質均較其他時間段高，初步建議冬凌草適宜采收為6月下旬和9月下旬。結合產區實際采收情況：適宜采收期確定為9月下旬，此時期冬凌草產量較高，各種指標性成分含量適宜，使冬凌草的產量及質量最大化。

3 小結與討論

本實驗通過對冬凌草整個生長時期的觀察，基本查明了冬凌草的生物學特性，其生長時期大致可以分為以下6個階段：萌芽期(3月中上旬)、生長緩慢期(3月下旬至6月中上旬)、快速生長期(6月中下旬至8月中上旬)、開花期(8月中下旬至9月下旬)、種子形成期(10月初至11月中上旬)、植株枯萎期(11月中下旬)。在冬凌草整個發育生長時期：株高最大值和鮮物質累積高峰期出現在9月中上旬；干物質累積高峰期出現在9月中下旬；冬凌草甲素出現兩次較大值，分別在8月上旬和9月下旬；迷迭香酸出現兩次較大值，分別是6月下旬和8月下旬；冬凌草乙素出現兩次較大值，分別為6月下旬和9月下旬。

在冬凌草植株生長早期(3～5月)雖冬凌草甲素含量很高，但干物質累積很低，不適宜采收；在植株生長中期(6～7月)三種有效成分含量均比較高，同時植株也在快速生長，干物質累積產量相對較高，適宜采收；在植株生長末期(8～9月)干物質累積基本上已達到最大值，三種有效成分含量也均處于相對較大值范圍，也比較適宜采收；在入秋以后，植株干物質重及三種有效成分含量均呈逐步下降趨勢，不適合采收。

制定適宜的采收期，對于提高冬凌草藥材的產量及質量具有重要作用。由于本實驗只研究了一年收獲期冬凌草的生長變化趨勢，并且只綜合考慮產量和質量等相關因素，并未參考氣候變化等自然因素，所以存在一定的局限性。由實驗研究結果分析，初步得出冬凌草最佳適宜采收期有兩個時期：6月下旬和9月下旬。再結合河南濟源冬凌草產區的一年收獲期冬凌草實際采收情況，綜合分析，確定冬凌草適宜采收期為9月下旬。適宜采收期的確定，對提高冬凌草的產業化、高產高質化具有重要意義，加快了冬凌草藥材的開發與利用，促進我國中藥材經濟的迅速發展。

[1] 劉晨江，趙志鴻.冬凌草的研究進展[J].中國藥學雜志，1998，33(10)：577-581.

[2] 鄭曉軻，董三麗，馮衛生.冬凌草的質量控制研究[J].中國試驗方劑學雜志，2005，11(2)：10-13.

[3] 李靜一.野生冬凌草資源分布調查、開發與保護[J].河南林業科技 2004，24(3)：48-51.

[4] 吳小勇.冬凌草無公害人工繁殖栽培技術[J].種子科技 2010，28(4)：36-38.

[5] 許紅艷，李章成，丁德蓉 冬凌草的栽培與利用[J].特種經濟動植物 2004，7(2)：28-30.

[6] 王新民，李明，介曉磊，等.冬凌草GAP栽培技術標準操作規程[J].安徽農學通報 2006，12(6)：142-144.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：107.

[8] 董誠明，王龍，蘇秀紅，等.氮磷鉀對冬凌草中迷迭香酸累積影響的研究[J].時珍國醫國藥，2008，19(10)：2390-2392.

[9] 崔璨.冬凌草種質資源研究[D].河南中醫學院，2010.6.

BestHarvestTimeStudyofRabdosiarubescensHara

LI Yang，DONG Chengming*，XU Peng，YAO Feng

(Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，China)

Objective：To preliminarily determine the suitable harvest time ofRabdosiarubescensHara through studying the development rule and the change of the effective components during its growth period.Methods：During theR.rubescenswhole growth，the changes of plant height and fresh dry weight were measured.The contents of oridonin, ponicidin and rosmarinic acid were determined by HPLC.Results：The peak period of dry matter accumulation appeared in late September；relatively large value of the oridonin content appeared in late September；the maximum of ponicidin appeared early in late June and relatively large values appeared in late September；the maximum of rosmarinic acid occurred in late June and in late August appeared relatively large value.Conclusion：The best harvest time of one-yearR.rubescensis in late September.

RabdosiarubescensHara；Best harvest time；Growth rule；Effective components

國家科技支撐計劃項目基金(2006BAI06A15-3)

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董誠明，教授，研究方向：中藥資源開發利用；Tel:(0371)86535313,E-mail:dcm663@sina.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.10.010

2014-04-26)