發酵飼料對斷奶仔豬血液部分免疫指標的影響

李旋亮，張 偉2，蘆 剛，李曉峰，張 武，霍 洋

（1.遼寧省盤錦市雙臺子區動物衛生監督所，遼寧 盤錦 124000；2.遼寧省盤錦市雙臺子區動物疫病預防控制中心，遼寧 盤錦 124000；3.遼寧省盤錦市雙臺子區畜牧獸醫局，遼寧 盤錦 124000）

發酵飼料對斷奶仔豬血液部分免疫指標的影響

李旋亮1，張 偉2，蘆 剛1，李曉峰3，張 武1，霍 洋1

（1.遼寧省盤錦市雙臺子區動物衛生監督所，遼寧 盤錦 124000；2.遼寧省盤錦市雙臺子區動物疫病預防控制中心，遼寧 盤錦 124000；3.遼寧省盤錦市雙臺子區畜牧獸醫局，遼寧 盤錦 124000）

本試驗旨在研究發酵飼料對斷奶仔豬腸血液部分指標的影響。將27頭平均體重6.83 kg的28日齡斷奶仔豬分為3個組。試驗I組（正對照組，含基礎日糧）、試驗Ⅱ組（負對照組，含基礎日糧+20%的過夜水）、試驗Ⅲ組（負對照組，含基礎日糧+菌液+20%過夜水）。試驗結果表明，水拌發酵組和菌液發酵組的中期Ⅲ組中IgA的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了30.00%（P＜0.05）、28.13%（P＜0.05）；后期Ⅲ組中IgA的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了24.32%（P＜0.05）、12.20%（P＜0.05）；中期各組間IgG的含量差異顯著（P＜0.05），后期Ⅲ組中IgG的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了27.64%（P＜0.05）、21.37%（P＜0.05）；Ⅰ組和Ⅱ組間差異不顯著（P＞0.05）。中期和后期各組間IgM的含量差異都不顯著（P＞0.05）。在中期Ⅲ組與Ⅰ組的溶菌酶含量差異顯著（P＜0.05），而Ⅲ組和Ⅱ組、Ⅱ組和Ⅰ組差異不顯著（P＞0.05）；在后期，溶菌酶的含量Ⅲ組與Ⅱ組差異不顯著（P＞0.05），分別比Ⅰ組提高了24.95%（P＜0.05）和23.21%（P＜0.05）。中期各組間SOD的含量差異不顯著（P＞0.05）；后期SOD的含量Ⅲ組分別比Ⅰ組合Ⅱ組提高了53.79%（P＜0.05），25.35%（P＞0.05）；Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）。發酵飼料可改善斷奶仔豬血液部分免疫指標，有助于減少仔豬腹瀉和增強仔豬對營養物質的消化吸收能力。

發酵飼料；溶菌酶；IGA；斷奶仔豬

隨著養豬生產集約化程度的不斷提高，仔豬早期斷奶變得越來越重要。但早期離乳易造成仔豬腸道功能紊亂，各項免疫指標下降，因而造成仔豬消化道消化吸收的面積減少，進而影響生長性能[1]，誘發“仔豬斷奶應激綜合征”[2]。而發酵飼料以飼料為基礎物質，添加有益微生物使其大量繁殖，先進行體外消化，分解飼料中的抗營養物質，當動物采食后，營養物質得到充分吸收，有益微生物又可定植在腸道中，從而改善仔豬的腸道結構，彌補早期斷奶帶來的缺點。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 發酵用菌液成分：含有乳酸菌、枯草芽孢桿菌，總均數5×1010CFU/g。菌液和基礎日糧均由沈陽愛特杰牧業有限公司提供。

1.2 試驗動物和日糧配制 選用28日齡美系大白和長白斷奶仔豬27頭，按體重相近原則隨機分為3個處理，每個處理3個重復，每個重復3頭仔豬。試驗I組即正對照組（PD），含有基礎日糧；試驗Ⅱ組即負對照組（ND），含有基礎日糧+20%水；試驗Ⅲ組為發酵飼料組（ND+P），含基礎日糧+20%水+菌液?；A日糧組成見表1。預飼期為7 d，試驗期為15 d。仔豬采用分欄飼養，自由采食和飲水。豬舍溫度保持在28℃左右。仔豬由沈陽市畜牧獸醫科學研究所種豬場提供。

1.3 血樣采集 36日齡（中期）、43日齡（末期）時，每個重復選取2頭仔豬，用10 mL的一次性注射器，在酒精火焰下無菌操作，前腔靜脈采血6～8 mL注射到促凝管中。

1.4 血清中IgA、IgM、IgG的測定 試驗中期及結束時，分別給仔豬前腔靜脈采血6～8 mL，用免疫比濁儀測定血清中IgG、IgA和IgM的含量。

1.4.1 試驗結果IgA的計算

IgA（g/L）=Cs×ΔAT/ΔAS（g/L）

式中：ΔAT以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值

ΔAS以空白管吸光度作對照的校準管吸光度值

CS校準管中IgA的濃度

1.4.2 試驗結果IgM的計算

IgM（g/L）=Cs×ΔAT/ΔAS（g/L）

式中：ΔAT以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值

ΔAS以空白管吸光度作對照的校準管吸光度值

CS校準管中IgM的濃度

1.4.3 試驗結果IgG的計算

IgG（g/L）=Cs×ΔAT/ΔAS（g/L）

式中：ΔAT以空白管吸光度作對照的樣品管吸光度值

ΔAS以空白管吸光度作對照的校準管吸光度值CS校準管中IgG的濃度

1.5 血清中超氧化物歧化酶（SOD）的測定 血清中SOD的測定原理：通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子自由基（O2-），后者氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下形成紫色，用可見光分光光度計測其吸光度。當被測樣品中含SOD時，則對超氧陰離子自由基有專一性的抑制作用，形成的亞硝酸鹽減少，比色時測定管的吸光度值低于對照管的吸光度值，通過公式計算可求出被測樣品中的SOD活力。

高等動物細胞內只有兩種SOD即銅鋅-SOD（CuZn-SOD）與錳-SOD（Mn-SOD），二者相加等于總SOD（T-SOD）。經樣本前處理過的樣本中Mn-SOD活力喪失，但Cu-SOD活力不變。

總SOD活力（U/mL）=（對照管吸光度-測定管吸光度）/對照管吸光度÷50%×反應體系的稀釋倍數×樣本測試前的稀釋倍數

1.6 血清中溶菌酶的測定 血清中溶菌酶的測定原理：在一定濃度的混濁菌液中，由于溶菌酶能水解細菌細胞壁上肽聚糖使細菌裂解而濃度降低，透光度增強，故可以根據透光度變化來推測溶菌酶的含量。

計算公式：

溶菌酶含量（μg/mL）=（測定管吸光度T15-空白管吸光度T15）/（標準管吸光度T15-空白管吸光度T15）×標準管濃度（10μg/mL）×樣本測試前稀釋倍數

1.7 數據分析 將試驗所測得的各項數據進行處理，數據整理及作圖（使用Excel 2003軟件），試驗結果用SPSS 13.0統計軟件進行方差分析和鄧肯氏法進行多重比較。試驗數據采用平均值±標準誤表示。

表1 日糧組成及營養成分Table1 The com position and nutrient level of basal diet

2 結果與分析

2.1 發酵飼料對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白的影響 見表2～4和圖1～3。

表2和圖1結果顯示，中期Ⅲ組中IgA的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了30.00%（P＜0.05）、28.13%（P＜0.05）；后期Ⅲ組中IgA的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了24.32%（P＜0.05）、12.20%（P＜0.05）。

表2 發酵飼料對斷奶仔豬血清中IgA的含量Table2 Effect o f ferm ented feed on serum IgA of weaned piglets g/L

圖1 發酵飼料對斷奶仔豬血清中IgA的含量Fig.1 Effect o f ferm ented feed on serum IgA of weaned piglets

表3 發酵飼料對斷奶仔豬血清中IgG的含量Table3 Effect o f ferm ented feed on serum IgG of weaned piglets g/L

圖2 發酵飼料對斷奶仔豬血清中IgG的含量Fig.2 Effect of fermented feed on serum IgG of weaned piglets

表3和圖2結果顯示，中期各組間IgG的含量差異顯著（P＜0.05），后期Ⅲ組中IgG的含量分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了27.64%（P＜0.05）、21.37%（P＜0.05）；Ⅰ組和Ⅱ組間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 發酵飼料對斷奶仔豬血清中IgM的含量Tab le4 Effect of ferm ented feed on serum IgM of weaned piglets g/L

圖3 發酵飼料對斷奶仔豬血清中IgM的含量Fig.3 Effect o f ferm ented feed on serum IgM o f weaned pig lets

表4和圖3結果顯示，中期和后期各組間IgM的含量差異都不顯著（P＞0.05）。2.2 發酵飼料對斷奶仔豬血清中溶菌酶的影響 見表5和圖4。

表5 發酵飼料對斷奶仔豬血清中溶菌酶的含量Table5 Effect of fermented feed on serum lysozym e of weaned piglets μg/mL

圖4 發酵飼料對斷奶仔豬血清中溶菌酶的含量Fig.4 Effect of fermented feed on serum lysozyme of weaned piglets

表5和圖4結果顯示，在中期Ⅲ組與Ⅰ組的溶菌酶含量差異顯著（P＜0.05），而Ⅲ組和Ⅱ組、Ⅱ組和Ⅰ組差異不顯著（P＞0.05）；在后期，溶菌酶的含量Ⅲ組與Ⅱ組差異不顯著（P＞0.05），分別比Ⅰ組提高了24.95%（P＜0.05），23.21%（P＜0.05）。

2.3 對仔豬血清中超氧化物歧化酶（SOD）的影響見表6和圖5。

表6 發酵飼料對斷奶仔豬血清中SOD的含量Table6 Effect o f ferm ented feed on serum SOD of weaned piglets U/m L

圖5 發酵飼料對斷奶仔豬血清中SOD的含量Fig.5 Effect of fermented feed on serum SOD of weaned piglets

表6和圖5結果顯示，中期各組間SOD的含量差異不顯著（P＞0.05）；后期SOD的含量Ⅲ組分別比Ⅰ組、Ⅱ組提高了53.79%（P＜0.05）、25.35%（P＞0.05）；Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 發酵飼料對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白的影響 斷奶仔豬血清中免疫球蛋白水平反映了其抵抗外界病原菌和病毒侵襲的能力。研究表明[3]，免疫球蛋白IgG、IgA和IgM可以給機體提供局部保護、預防腸道疾病發生、抵抗病原菌的侵襲等。研究發現[4]，仔豬最初的IgG、IgA和IgM來源于初乳，但由于飼養管理和個體差異較大，使其獲得量和時間有限，在仔豬階段，由于免疫器官發育的不完善，主動免疫很受限制，B細胞分泌的免疫球蛋白量非常有限，因此，提高仔豬自身免疫球蛋白水平相當關鍵?，F代養殖中，采取的是早期斷奶技術，缺少了母源的免疫將導致仔豬主動免疫停止甚至倒退，另外，斷奶后食物和環境上的應激直接改變仔豬的免疫狀態[5]，因此采取一定的措施來增強斷奶仔豬的免疫機能刻不容緩。近年來，發酵飼料對斷奶仔豬血清中免疫機能的報道較少。

本次試驗結果顯示，飼料經過有益菌發酵之后，IgA、IgM、IgG都有增長的趨勢，可能存在以下原因：添加有益菌后使腸道內雙歧桿菌增殖，桿菌細胞壁和分泌物可產生大量免疫物質如IgA免疫球蛋白，其阻止細菌附著于宿主的腸黏膜組織的能力是其他免疫球蛋白的7～10倍；乳酸桿菌本身還能對腸道免疫細胞產生強烈的刺激，增加抗體細胞數量，激活巨噬細胞的活力，強化機體免疫體系；芽孢桿菌能促進機體免疫器官、組織的成熟，使這些器官、組織處于高度反應準備狀態，T、B-淋巴細胞數量增多，提高機體的體液免疫和細胞免疫水平。以上都可以使免疫組織分泌免疫球蛋白。

3.2 發酵飼料對斷奶仔豬血清中溶菌酶的影響 溶菌酶（Lysozyme），即N-乙酰胞壁質酶（N-acetylmurmidase），作用于細菌細胞壁N-乙酰胞壁酸（NAM）與N-乙酰葡萄糖胺（NAG）之間的β-1,4-糖苷鍵，廣泛分布于自然界各種生物體中[6]。溶菌酶是一種水解粘多糖的堿性水解酶，它作為一種存在于機體正常體液及組織中的非特異性免疫因素，具有多種藥理作用。Imoto報道[7]，它可與各種誘發炎癥的酸性物質結合，使其失活，并能增強機體的免疫力，改善組織基質的粘多糖代謝，從而達到消炎、修復組織、改善胃腸道功能的目的。溶菌酶主要作用于細菌的細胞壁，細菌細胞裂解刺激免疫系統，激發機體內吞噬細胞的噬菌作用。溶菌酶對仔豬腹瀉有防治作用，與免疫球蛋白的功能緊密聯系。溶菌酶主要來自嗜中性白細胞、單核細胞及吞噬細胞溶酶體中，并能增強補體活性，從而殺滅細菌[8]。在邱偉海等[9]的試驗中可知，斷奶仔豬飼料中不添加任何抗生素或其他抗腹瀉的添加劑，腹瀉嚴重，在仔豬日糧中添加溶菌酶500 g/t基本可以控制腹瀉，可以替代抗生素。

本試驗結果表明，添加發酵飼料后血清酶濃度增加，分析原因可能是因為：發酵飼料中的乳酸桿菌和枯草芽孢桿菌有足夠的活菌數量和活性[10]，能定植于小腸上皮，調節機體胃腸道微生態平衡，并可促進腸道相關淋巴組織生理活動，使免疫器官發育加快，免疫系統成熟度提高，T和B淋巴細胞數量增加[11]，潘氏細胞的數量也增加了，所以分泌的溶菌酶增多。

以上結果都說明，在添加了乳酸桿菌和枯草芽孢桿菌發酵后，能明顯提高斷奶仔豬血清中溶菌酶的含量，飼喂效果優于干粉料。

3.3 發酵飼料對斷奶仔豬血清SOD的影響 SOD廣泛存在于動植物體內，其主要功能是去除動物體液和組織中代謝所產生的超氧基O2-，O2-具有很強的氧化性，極易破壞細胞核內mRNA，使蛋白質變性；它也可破壞血管內壁細胞，使原本光滑的血管內壁變的粗糙不平，加速膽固醇等脂質沉著等，反應式為：O2-+O2-+H+→H2O+O2。SOD活性提高，可削弱或去除超氧基氧化破壞細胞或細胞內還原性活性成分的作用，保護細胞功能的完整性[12]。

本試驗中，乳酸桿菌、芽孢桿菌能刺激動物處于高度“免疫準備狀態”，同時刺激免疫器官發育成熟，產生大量生理活性物質，如SOD、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHoPx），刺激機體產生抗體，增強吞噬細胞的作用，從而加強小腸和其他組織對病原物質的抵抗力[13]，從而增強了斷奶仔豬的體液免疫功能。另外，乳酸桿菌的添加，降低了腸道的pH，使腸道內的優勢菌群雙歧桿菌可能大量增殖，增加超氧化物酶的活性，清除自由基。

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Effects of Fermented Feed on Morphology of Small Intestine of Weaned Piglets

Li Xuanl iang1,Zhang Wei2,Lu Gang1,Li Xiaofeng3,Zhang Wu1,Huo Yang1
（1.Bureau of Panjin City Shuangtaizi Dist rict Rural Economy,Liaoning Panj in 124000；2.Panj in City Shuangtaizi animal disease prevention and control center,Liaoning Panjin 124000；3.Panj in City Shuangtaizi Dist rict Animal Husbandry and Veterinary Bureau,Liaoning Panjin 124000）

This experiment was to study fermented feed of weaning piglets intestinal blood part indicators.27 head average weight 6.83 kg of 28 days of age weaning piglets is divided into three processing.Test group I(positive control group,including basic diet),testⅡ group(negative cont rol group,including basal diet+20%overnight water),testⅢ group(negative cont rol group,including basic diet+bacteria l iquid+20%overnight water).Experimental resul ts show that water mixed bacteria fermentation and l iquid fermentation of medium-termⅢ group content of IgA in 30.00%higher than that ofⅠ,Ⅱ group respectively(P＜0.05)and 28.13%(P＜0.05);Content of IgA in the lateⅢ group thanⅠ,Ⅱ group increased by 24.32%(P＜0.05)and 12.20%(P＜0.05);Medium-term IgG levels signi ficant di f ference between groups(P＜0.05),the lateⅢ IgG levels of 27.64%higher than that ofⅠ,Ⅱ group respectively(P＜0.05)and 21.37%(P＜0.05);Ⅰ group andⅡ no signi ficant dif ference between groups(P＞0.05).Middle and late IgM content were not signi ficant di f ference between groups(P＞0.05).In the medium termⅢ andⅠ group of lysozyme content signi ficant di f ference(P＜0.05),whi leⅢ andⅡ group,Ⅱ andⅠ group no signi f icant di f ference (P＞0.05).In the later,the content of lysozymeⅢ andⅡ group no signif icant di f ference(P＞0.05),and 24.95%higher than that ofⅠ group respectively(P＜0.05)and 23.21%(P＜0.05).Mediumterm SOD content di f ferences between groups was not signif icant(P＞0.05).Post the content of SODⅢ group was 53.79%higher than that ofⅠ combinationⅡ group respectively(P＜0.05)and 25.35% (P＞0.05);Ⅱ group andⅢ no signi ficant di f ference between groups(P＞0.05).Fermented feed can improve weaned piglets part blood immune index,help reduce diarrhea piglets and enhance piglets to the digestion and absorption of the abil ity.

Fermented feed;Lysozyme;IGA;Weaned piglets

S828.5

1672-9692(2015)07-0001-07

2015-05-30

李旋亮（1982-），男，碩士研究生，主要從事飼料添加劑對仔豬生產性能影響的研究。