米泔水炮制后射干藥材中6種異黃酮類含量的變化

李 鎖，王光函，單國順，鄒桂欣，李國信

（1．遼寧中醫藥大學，遼寧 沈陽 110032； 2．遼寧省中醫藥研究院，遼寧 沈陽 110034）

米泔水炮制后射干藥材中6種異黃酮類含量的變化

李 鎖1，王光函2，單國順2，鄒桂欣2，李國信2

（1．遼寧中醫藥大學，遼寧 沈陽 110032； 2．遼寧省中醫藥研究院，遼寧 沈陽 110034）

目的考察米泔水炮制前后射干藥材中6種異黃酮類成分的含量變化。方法采用高效液相色譜(HPLC)法測定射干生品及米泔水炮制品中射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素A、鳶尾甲黃素B、野鳶尾黃素的含量，流動相為乙腈-0．1磷酸水（每100 mL含甲基- -環糊精和2-羥丙基- -環糊精各0．375 g），梯度洗脫。結果射干藥材經米泔水炮制后，射干苷及野鳶尾苷等苷類成分含量降低，而鳶尾黃素、鳶尾甲黃素A、鳶尾甲黃素B、野鳶尾黃素等苷元含量有所增加。結論米泔水炮制后射干中6種異黃酮類成分的含量均發生了變化，可促使異黃酮苷類成分向異黃酮苷元類成分轉化。

射干；米泔水；射干苷；野鳶尾苷；鳶尾黃素；鳶尾甲黃素A；鳶尾甲黃素B；野鳶尾黃素

射干為鳶尾科植物射干 Belamcanda Chinensis（L）DC．的干燥根莖，主要有清熱解毒、利咽消痰、散血消腫等功效，為治療喉痹咽痛之要藥[1]。其臨床主要用于治療上呼吸道感染、慢性咽炎、扁桃體炎、慢性鼻竇炎、支氣管炎、哮喘、肺氣腫、肺心病、咽喉腫痛和痰盛咳喘等[2]。射干根莖中主要含有異黃酮類化合物[3-4]，包括射干苷及其苷元、鳶尾黃素、野鳶尾苷及其苷元、野鳶尾黃素、次野鳶尾黃素，鳶尾甲黃素 B、鳶尾甲黃素A、白射干素等成分[5-8]，射干苷及野鳶尾苷口服后，在體內腸道菌群作用下轉變為其相應苷元而發揮療效。臨床常用品種是生射干，傳統理論認為，米泔水炮制方法能進一步增強其清熱解毒的功效，并能去除藥材中所含過多油脂，減少藥物的辛燥氣味，有調理脾胃、增進食欲的作用?！侗静莘纸洝份d，米泔水性味甘、涼，無毒，有清熱涼血、止煩渴、利小便、解毒等功效；《雷公炮炙論》載：“射干，凡使，先以米泔水浸一宿。漉出，用堇竹葉煮，從午至亥，漉出，日干用之?！盵9]但關于米泔水炮制法中異黃酮類成分含量變化尚未見詳細報道。本試驗中采用高效液相色譜（HPLC）法考察了米泔水炮制前后射干藥材中6種異黃酮類成分的含量變化，旨在從化學成分的角度解析射干米泔水炮制方法的原理，為米泔水制射干藥材提供理論依據。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（Chemstation色譜工作站，美國Agilent公司）；KQ250DB型超聲波發生器（昆山市超聲儀器有限公司）；FA1004型萬分之一電子天平（上海上天精密儀器有限公司）；CSIO型電熱鼓風干燥箱（重慶試驗設備廠）。對照品射干苷（中國食品藥品檢定研究院，批號為111607-200402）；野鳶尾苷、野鳶尾黃素（成都普瑞法科技公司，批號分別為13030803，13051402）；鳶尾甲黃素 A、鳶尾甲黃素B（江蘇永健醫藥科技有限公司，批號分別為20140724，20140616）；鳶尾黃素（成都生物科技有限公司，批號為12081808）；乙腈、磷酸均為色譜純，水為娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團公司），其余試劑為分析純；所購藥材經遼寧中醫藥大學李峰教授鑒定為射干 Belamcanda Chinensis（L．）DC．的根及根莖。

2 方法與結果

2．1 樣品制備

射干藥材準備：取同一批射干藥材，用四分法取樣，分為6等份，每份100 g，分別作為試驗用生品及米泔水炮制品，各平行3份。

米泔水制射干：取江米100 g，加水1 200 mL，第1次淘米水棄去；再加水1 200 mL，充分攪拌，漉出，即得米泔水。取射干藥材3份，每份加入上述制得的米泔水100 mL，25℃室溫浸泡過夜，取出藥材，并于65℃干燥至干。

2．2 水分測定

取干燥后射干生品及炮制品粉碎，過65目篩。用烘干法[10]測定2種樣品的含水量。結果生品含水量為4．64%、米泔水炮制含水量為5．17%。

2．3 含量測定

2．3．1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex C18柱（250 mm×4．6 mm，4 μm）；流動相：乙腈-0．1%磷酸溶液（每100 mL含有甲基-β環糊精和2-羥-丙基-β環糊精各0．375 g），梯度洗脫見表 1；進樣量：10 μL；流速：1．0 mL／min；檢測波長：265 nm；柱溫：30℃。典型高效液相色譜圖見圖1。

表1 梯度洗脫時間表

圖1 射干藥材米泔水炮制前后典型高效液相色譜圖

2．3．2 溶液制備

取射干生品粉末1 g（n=3），精密稱定，置100 mL具塞三角燒瓶中，分別精密加入 70%乙醇 25 mL，密塞，稱定質量。超聲（250 W，50 kHz）提取30 min，冷卻，稱重，用70%乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，用0．22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得供試品溶液。取射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素A、鳶尾甲黃素B、野鳶尾黃素對照品適量，用甲醇制成混合對照品貯備溶液，質量濃度分別為 0．595 7，0．434 7，0．540 5，0．095 4，0．316 3，0．325 3 g／L；精密吸取混合對照品貯備液1 mL，置10 mL容量癬中，用 70%乙醇稀釋至刻度，搖勻（質量濃度分別為 59．57，43．47，54．05，9．54，31．63，32．53 μg／mL），即得混合對照品溶液。2．3．3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取混合對照貯備液1，2，4，6，8，10，12 μL進樣，以峰面積（Y）為縱坐標、溶液進樣質量（X）為橫坐標進行線性回歸。結果見表2。

表2 線性關系考察結果（n=6）

精密度試驗：精密吸取混合對照品溶液20 μL，按擬訂色譜條件連續進樣6次，測定峰面積。結果射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素 A、鳶尾甲黃素 B、野鳶尾黃素的 RSD分別為1．18%，1．03%，0．94%，1．08%，1．88%，1．29%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密吸取同一供試品溶液10 μL，按擬訂色譜條件，分別于0，2，4，8，12，24 h時進樣測定。結果射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素 A、鳶尾甲黃素 B、野鳶尾黃素峰面積的 RSD分別為1．31%，1．76%，1．63%，2．01%，1．98%，1．47%（n=6），表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

重復性試驗：取射干藥材粉末1 g，精密稱定，平行6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定。結果樣品中射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、鳶尾甲黃素B、鳶尾甲黃素A、野鳶尾黃素的含量分別為15．500，6．654，8．650，2．123，3．278，5．085 mg／g，RSD分別為1．52%，1．18%，1．33%，1．89%，2．04%，1．58%（n=6），表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密稱取已測知含量的射干藥材粉末（1號）9份，每份約0．5 g，精密稱定，分別精密加入含6種對照品的混合溶液1．2，1．0，0．8 mL（射干苷7．802 g／L、野鳶尾苷3．412 g／L、鳶尾黃素 4．398 g／L、鳶尾甲黃素 B 1．085 g／L、鳶尾甲黃素 A 1．718 g／L、野鳶尾黃素2．635 g／L，所有溶液均用DMSO溶解），每種質量濃度制備3份。依法制備所需溶液，分別進樣并加樣測定含量。結果見表3。

表3 射干中6種活性成分加樣回收試驗結果（n=9）

2．3．4 樣品含量測定

分別取射干生品及米泔水炮制品各1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定并計算。結果見表4。

表4 射干米泔水炮制前后6種成分含量測定結果（mg／g，n=3）

3 討論

曾采用乙腈-0．1%磷酸水為流動相進行分離，但由于射干藥材中異黃酮類成分較復雜，鳶尾甲黃素A與藥材中的另一異黃酮成分野鳶尾黃素結構相近，只差1個甲氧基，在0．1%磷酸水為水相的峰上，兩者無法分開。Hirlekar等[11]報道，加入β-環糊精大環類物質可使異黃酮類成分的性質發生變化，β-環糊精甲基化后破壞了其分子內氫鍵，且甲基無立體阻礙，擴大了其疏水空腔，使其具有更強的包合特性，環糊精引入甲基和2-羥丙基等功能基團后，不但改變了其部分物理性質，還改變了其化學結構，從而使結構相近的鳶尾甲黃素A和野鳶尾黃素得到較好的分離，故擇乙腈-0．1%磷酸水（每100 mL含有甲基-β環糊精和2-羥-丙基-β環糊精各0．375 g）作為流動相。

射干藥材經米泔水炮制后，6種異黃酮類成分均發生了一定的變化。射干苷及野鳶尾苷等苷類成分含量降低，而鳶尾黃素、鳶尾甲黃素 A、鳶尾甲黃素 B、野鳶尾黃素等苷元含量有所增加?？梢?，米泔水炮制法對射干的化學成分含量影響較大，本試驗結果對進一步研究射干化學成分含量的影響因素提供了參考依據。

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[4]劉合剛．野生射干與栽培射干化學成分的定性比較[J]．時珍國醫國藥，2001，12（8）：685-686．

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Changes of 6 Isoflavone Contents In Rice Water after Processing of Belamcanda Chinensis

Li Suo1,Wang Guanghan2,Shan Guoshun2,Zou Guixin2,Li Guoxin2
(1．Liaoning University of TraditionalChinese Medicine,Shenyang,Liaoning,China 110032; 2．Liaoning Research Institute of Chinese Medicine, Shenyanng,Liaoning,China 110034)

Objective To determine the changes of 6 isoflavone contents in Belamcanda Chinensis by using rice water before and after processing．M ethods HPLC was used to determine the changes of tectoridin iridin,tectorigenin,iristectorigenin A,iristectorigenin B and irigenin contents Belamcanda Chinensis and rice water before and after processing．The mobile phase was acetonitrile-0．1% phosphoric acid(each 100 mL contains 0．375 g methyl-βcyclodextrin and 2-hydroxypropyl-βcyclodextrin)gradient elution．Results After rice water processing,the contents of aglycone,such as tectoridin and iridin etc．in Belamcanda Chinensis decreased and the contents of tectorigenin,iristectorigenin A,iristectorigenin B and irigenin ect．aglycone increased．Conclusion After using rice water processing,the contents of isoflavone contents in Belamcanda Chinensis were changed and prompt isoflavone glycosides composition to composition of isoflavone glycosides metaclass．

Belamcanda Chinensis;rice water;tectoridin;iridin;tectoridin;iristectorigenin A;inistectorigenin B；irigenin

R282.71；R284.1

A

1006-4931(2015)21-0010-04

李鎖，在讀碩士研究生，主要從事中藥分析研究工作，（電話）024-86803182（電子信箱）973007794＠qq．com；李國信，博士研究生，研究員，博士研究生導師，主要從事中藥新藥開發研究工作，本文通訊作者，（電話）024-86803184（電子信箱）yying_65＠126．com。

2015-06-17)

國家“十二五”重大新藥創制項目“中藥新藥臨床技術平臺評價研究技術平臺”，項目編號：2012zx09303-017；國家自然基金資助項目，項目編號：81273927。