品種、產地和采收年份對吳茱萸主要活性成分含量的影響＊

李秦晉，魏寶陽

(1．湖南農業大學 生物科學與技術學院，湖南 長沙410128;2．湖南體育職業學院，湖南 長沙410019)

吳茱萸始載于《神農本草經》，列為中品，性熱，味辛、苦，有小毒，具溫中散寒、理氣止痛、降逆止嘔、助陽止瀉的功效［1］，是蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa(Juss．)Benth．、石 虎Evodiarutaecarpa(Juss．)Benth．var．officinalis(Dode)Huang或疏毛吳茱萸Evodia rutaecarpa(Juss．)Benth．var．bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果實。8-11月果實未開裂時，剪下果枝，曬干或低溫干燥，除去枝、葉、果梗等雜質即得［2］。吳茱萸俗稱“辟邪翁”，氣味獨特，有殺菌、凈化空氣作用，其生物堿有抗腫瘤、抗過敏等多種生物活性［3-5］。但各生產基地吳茱萸品種較多，品質差別大［6］，且近年來，吳茱萸作為經濟類中藥材被廣泛栽種，缺乏合理規劃和科學指導，非道地產區吳茱萸藥材品質較差，市場價格連續十年走低，道地產區受其影響，栽培面積大量萎縮。近幾年吳茱萸價格有所回升，從20元/kg升至40元/kg，勢必又會引起新一輪的擴種，為了更好的指導生產實踐，湖南中醫藥大學李順祥團隊自2007年始對全國不同產區吳茱萸開展了深入調查并進行了大量的研究工作［7-12］，本文分析各地吳茱萸藥材吳茱萸堿等主要有效成分的含量，分析各地吳茱萸品種、產地對藥材品質的影響。

1 實驗材料與方法

1．1 同一品種不同產地材料

2009、2010年采集自貴州銅仁，廣西桂林、柳城，湖南新晃、婁底、瀏陽、湘鄉，湖北咸豐，江西萬載、樟樹，浙江溫州等地(均為2003年栽種)，采集方法:采用五點采樣法，采集10株吳茱萸的部分果實混合。并經湖南省中醫院研究院謝昭明研究員鑒定，其中包括吳茱萸Euodia rutaecarpa(Juss．)Benth．，疏毛吳茱萸Euodia rutaecarpavar．bodinieri和石虎Euodia rutaecarpavar．officinalis，分類整理見表1。

表1 不同產地吳茱萸樣品采集Tab．1 The locations and times for harvesting of Euodia rutaecarpa

1．2 同一產地不同品種材料

選取2010年采集的貴州銅仁(見表一帶“*”者)、湖南瀏陽(見表一帶“#”者)地區的石虎、疏毛吳茱萸、吳茱萸樣品進行分析。

1．3 不同采收年份材料

選取貴州銅仁、湖南新晃、湖南瀏陽三個產區(均為2003年栽種)的石虎樣品，采集年份從2007年(四年樹齡)到2010年(八年樹齡)的同一成熟程度，采用五點采樣法隨機采集4批材料。．

1．4 儀器與試劑

Agilent 1100高效液相色譜儀;電子分析天平(METTLER AE240);HS-3120超聲清洗器(江蘇漢邦科技有限公司);吳茱萸堿對照品(批號:110802-200505)，吳茱萸次堿對照品(批號:0801-9702)，吳茱萸內酯對照品(批號8002200102)均購自中國藥品生物制品檢定所;乙腈(HPLC級)(Honeywell);水為純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司);乙醇(AR)(湖南匯虹試劑有限公司)。

1．5 實驗方法

2007年(四年樹齡)至2010年(八年樹齡)樣品的含量在2010年9月一次測量，采用的方法是參考袁等［7］、蔡等［8］建立的實驗方法。

1．5．1 供試品溶液的制備 取本品粉末(過三號篩)約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%乙醇25 mL，稱定重量，浸泡1 h，超聲處理(功率100 W，頻率40 kHz)40 min，放冷，再稱定重量，用80%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

1．5．2 對照品溶液的制備 參照《中國藥典》2010

年版取吳茱萸堿對照品、吳茱萸次堿對照品、吳茱萸內酯對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1 mL含吳茱萸堿0．15 mg、吳茱萸次堿0．1 mg、含吳茱萸內酯0．7 mg的溶液。

1．5．3 色譜條件 色譜柱為日本資生堂公司CAPCELLPAK MGC18柱(4．6 mm×150 mm，5μm)。以乙腈-水-四氫呋喃-冰醋酸(41∶59:1∶0．2)為流動相;檢測波長為225 nm。

1．5．4 吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內酯的含量測定 將吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內酯對照品儲備液稀釋5、10、20、40、80倍，其中吳茱萸堿和吳茱萸次堿標準液混合在一起，各取50μL，用定量閥(20μL)進樣，測定峰面積。以進樣濃度C為橫坐標(x)，峰面積A為縱坐標(y)進行線性回歸，構建的回歸方程。按樣品處理的方法處理好樣品，分別測定各批樣品的含量。

2 結果與分析

2．1 吳茱萸主要成分含量檢測結果

吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內酯的檢測的回歸方程y為峰面積，x為檢測物質的濃度(見表2)，從R值可以看出，各回歸方程呈現良好的線性關系。

吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內酯的標樣和吳茱萸樣品的檢測色譜圖見圖1。

從圖3的樣品峰可以看出，樣品的分離效果較理想，用該條件分析主要成分的含量是可行的。

2．2 同一品種不同產地吳茱萸的主要成分含量測定結果

同一品種不同產地的吳茱萸樣品，其吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內酯的含量測定(重復3次)結果見圖2，圖3。從圖2和圖3可以看出，石虎品種在不同地區生長其藥材成分含量差異較大，銅仁地區，新晃地區的茱萸堿、吳茱萸次堿和吳茱萸內酯的含量最高，而在瀏陽地區稍低，在萬載地區為最低，體現了強烈的地區差異。作為道地產區的貴州銅仁，湖南新晃可能是其最適宜生長區，而江西萬載地區，由于海拔、溫度等環境因子的不同，有效成分含量很低。

疏毛吳茱萸吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內酯的含量以廣西柳城、桂林兩地的含量最高，而在銅仁，湖南婁底地區的含量一般，在湖南瀏陽，江西樟樹的含量均較低，也出現了較大的地區差異性。吳茱萸五個地區的樣品的吳茱萸堿、吳茱萸次堿、吳茱萸內酯的含量都較低，以湖北咸豐、湖南湘鄉稍高，浙江溫州最低，但含量差異不大。與石虎、疏毛吳茱萸相比，吳茱萸含量低，地區間差異小，其道地產區不明顯。

圖1 樣品含量測定色譜圖Fig．1 Chromatograms of samples

圖2 同一品種不同產地吳茱萸吳茱萸堿、吳茱萸次堿的含量分析Fig．2 Evodiamine and Rutaecarpine contents analysis of Fructus Evodiae of the same species from different habitats

侯曉虹［13］等對34種吳茱萸中吳茱萸堿和吳茱萸次堿的含量進行了測定，發現廣西上林地區的含量較高;張雪琴等［14］的研究也表明，銅仁及廣西的含量較高;宋亞芳等［15］的一測多評法分析結果也顯示來自貴州等道地產區的吳茱萸成分含量較高，與該研究結果基本一致。吳茱萸的含量的高低還受到一些人為因素的影響，如，浙江溫州地區的吳茱萸含量最低，當地藥農一般是吳茱萸花落后一周內進行采集，吳茱萸果實粒小、顏色綠，市場上較走俏，但分析發現其有效成分含量較低，這可能與采收過早有關。

2．3 同一產地不同品種吳茱萸的主要成分含量測定結果

對同一產地的不同品種的吳茱萸藥材含量進行分析(重復3次)，結果見表3。比較同一生態條件下不同品種的含量差異，更能有效比較不同品種的差別，有利于對更適宜的中藥材品種進行選擇。

由圖可見，銅仁地區作為道地產區，三個品種中以石虎的含量最高，而吳茱萸的含量最低。瀏陽地區的含量分析揭示了相同的趨勢，其石虎品種含量最高，而吳茱萸含量最低?？梢娫谶@兩個地區，栽培石虎品種可能更加合適，其次是疏毛吳茱萸品種。市場上有三種規格的吳茱萸藥材，即小花、中花、大花，以小花品質較好。調查發現，小花主要是石虎品種，而大花主要是吳茱萸品種，通過研究發現，作為小花的石虎，其有效成分含量比大花的吳茱萸含量高。

圖3 同一品種不同產地吳茱萸吳茱萸內酯的含量分析Fig．3 Evodine content analysis of Fructus Evodiae of the same species from different habitats

表3 同一產地不同品種吳茱萸藥材的含量分析Tab．3 Contents analysis of Fructus Evodiae of different species from the same habitats

2．4 不同采收年份的含量測定結果與分析

2007年至2010年銅仁、新晃、瀏陽的石虎樣品含量測定情況(重復3次)見圖4，銅仁地區的石虎樣品，2009年含量最高，2008年含量最低，據調查發現2008年由于冰凍天氣，銅仁的吳茱萸植株普遍受損，許多枝條被冰雪壓斷，這一年的含量比較低;而2010年基地無人管理，水肥供應不足，甚至吳茱萸成熟季節無人采收，含量較2009年低。新晃地區情況與銅仁較類似，但植株大多生長在農家土地邊上，水肥較銅仁好，含量平均較高。瀏陽地區石虎的含量呈現增加趨勢，該地2003年引種栽培，有效成分含量有隨樹齡增加而升高的趨勢，在2009年，2010年含量均較高，可見石虎在栽種六年后(即2009年)成分含量達到較高的水平。

圖4 不同年份石虎吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量分析Fig．4 Evodiamine and Rutaecarpine contents analysis of Fructus Evodiae in year of 2007 to 2009

3 討論

3．1 同一品種不同產地的差異

石虎，疏毛品種在不同產區其藥材成分含量差異較大。石虎在銅仁地區，新晃地區的含量最高，作為道地產區的貴州銅仁，湖南新晃可能是其最適宜生長區。疏毛吳茱萸品種以廣西柳城、桂林兩地的含量最高，判斷廣西地區最適宜疏毛吳茱萸生長，為其適宜產區。不同產地的差異大可能是道地性的一個表征，即道地產區含量高，非道地產區含量低。吳茱萸品種在不同地區其有效成分差異不大，且含量較石虎、疏毛吳茱萸低，吳茱萸不像石虎、疏毛一樣有明顯的地區差異性。

3．2 同一產地不同品種的差異

在同一產地，不同品種有效成分含量差異明顯，因此作為特定產區，應選擇最適宜栽培的品種，如銅仁，瀏陽地區以石虎的成分含量最高，因此其適宜栽培品種是石虎。在特定產區選擇合適的品種，有利于藥材的品質和質量保證。

3．3 不同年份含量差異

2007年至2010年對銅仁、新晃、瀏陽的石虎進行跟蹤調查發現，瀏陽地區石虎的有效成分隨樹齡增加而增加，成分含量較高的時期為栽種五年后的果實;銅仁，新晃地區的變化沒有規律，但可以判斷天氣的影響較大，如2008年遭受冰凍災害，這兩個地區的含量降低。同時管理情況也對成分影響較大，如2010年管理情況較差，含量較低。吳茱萸藥材，如果管理不好，其掛果少，掛果小，產量低，同時有效成分含量也低。

3．4 吳茱萸采收加工對品質的影響

吳茱萸不同產區由于栽培歷史與天氣等原因，各自形成一種采收習慣。通過實地考察發現，浙江溫州，建德等地區，其采收時間較早，一般在7月中旬采完，藥材色澤嫩綠，顆粒小，在市場上價格處于中上水平，但成分含量相對較低。江西樟樹等地的吳茱萸栽培面積廣，采收期一般在8月上旬，果實采收后曬干，其顏色黃綠，氣味芬芳，盡管其有效成分相對其它地區較低，但在市場上極為走俏。而銅仁，新晃等地區，由于處于山地，且海拔高，其采收期一般在8月中旬，果實略顯暗色;廣西柳城的吳茱萸，藥農一般在農歷8月15日左右采摘，如我們調查的吳家樹先生種植的吳茱萸(主要是疏毛品種)，在中秋節采摘，此時吳茱萸果實呈扁形，心皮分成明顯的五瓣，果實表面粗糙，顏色較枯暗，雖然此時期吳茱萸堿等有效成分含量較高，但因為藥材成色不好，在出售中藥商不愿購買。

3．5 吳茱萸品質的道地性分析

吳茱萸道地性即指產地的道地性，同時也是品種的道地性［16］。不同產地的同一品種差異大，如石虎在貴州地區品質好。同一產地的不同品種的差異也較大，如銅仁、婁底的三個不同品種差異明顯。因此在考察吳茱萸道地性時，要選擇吳茱萸某一個品種并從幾個特定產區來分析其道地性。另外，各地采收加工的習慣對藥材品質的影響也不容忽視。

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