Xpert MTB/RIF Assay在結核病診斷中的應用

高 漫，鄒遠嫵，白廣紅，梁亞萍

（陜西省結核病防治院檢驗科，陜西 西安 710100）

Xpert MTB/RIF Assay在結核病診斷中的應用

高 漫，鄒遠嫵，白廣紅，梁亞萍

（陜西省結核病防治院檢驗科，陜西 西安 710100）

目的對Xpert MTB/RIF檢測結核分枝桿菌（MTB）方法進行臨床研究，評價其在結核病診治中的應用價值。方法應用Xpert MTB/RIF法檢測結核患者的MTB，以BACTEC MGIT 960培養法為參考方法，獲得該方法的靈敏度、特異度。結果

對123例結核患者的臨床樣本進行Xpert MTB/RIF法檢測、BACTEC MGIT 960培養及細菌涂片抗酸染色法檢查，其靈敏度和特異度分別為65.9%、47.2%、31.2%和100.0%、96.0%、100.0%。結論Xpert MTB/RIF檢測MTB速度快，靈敏度高，特異度強，對結核患者的早期診斷及治療有著重要的意義。

結核分枝桿菌； Xpert MTB/RIF檢測； 特異度； 靈敏度

近年來，結核病患者數量呈上升趨勢，影像學檢查與細菌學實驗室檢查是結核病診斷的主要依據，但是對于早期的病例，患者特征不明顯，影像學檢查難以確認，細菌學檢查傳統的涂片法與漂浮集菌法陽性率低［1］，L－J培養法周期長［2］。由美國BD公司生產的BACTEC MGIT 960系統檢測結核分枝桿菌（MTB）陽性率較高、周期較短，但培養周期平均仍需12天左右［3］。為尋求一種特異度強與靈敏度高，檢測周期短的實驗方法對結核患者早期診斷與治療至關重要。由美國Cepheid公司研發生產的Xpert MTB/RIF方法操作簡單、快捷，可以在2小時內完成MTB復合群和利福平耐藥性的檢測并得出結果報告［4］，對于結核患者的早發現早診斷早治療提供了有效的方法。本研究對Xpert MTB/RIF檢測MTB方法進行臨床研究，以評價其檢測能力及在結核病診治中的臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究的試驗組標本是收集本院2013年8月至2014年1月肺結核住院患者灌洗液標本123例作為試驗組，男性78例，年齡19～75歲，平均年齡47歲；女性45例，年齡20～68歲，平均年齡44歲。對照組標本為收集的本院最終確診為肺結核以外的肺外結核患者灌洗液標本25例。

1.2 儀器與試劑 Xpert MTB/RIF儀器及試劑由美國Cepheid公司研發生產，BACTEC MGIT 960系統及試劑由美國BD公司研發生產。

1.3 方法 Xpert MTB/RIF檢測方法采用GeneXpert檢測系統，是一種半巢式實時熒光定量PCR體外診斷技術，針對rpoB基因81bp利福平耐藥核心區間（RRDR）設計引物、探針，檢測其是否發生突變，進而用于診斷患者是否感染MTB，以及是否對利福平耐藥（rpoB序列存在突變）。操作步驟：灌洗液與試劑按2∶1混合，加入2mL液體到試劑盒內，試劑盒放入機器（手工操作結束），樣品自動洗滌和過濾，自動超聲破碎樣品，釋放核酸，DNA與PCR試劑混合，半巢式熒光定量PCR擴增和檢測，打印結果。以H37Rv為陽性對照，同時進行Xpert MTB/RIF檢測、BACTEC MGIT 960培養、涂片抗酸染色。

1.4 統計學處理 采用SPSS17.0軟件進行數據分析，檢測結果采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 試驗組123例臨床灌洗液標本的檢測 見表1。

2.2 對照組25例肺外結核患者灌洗液標本的檢測 見表2。

3 討 論

試驗組結果顯示有統計學意義（P＜0.01），Xpert MTB/RIF檢測方法靈敏度高于BACTEC MGIT 960方法與涂片抗酸染色法。對照組顯示，Xpert MTB/RIF檢測方法與“金標準”BACTEC MGIT 960方法和涂片抗酸染色法特異度強［5］，BACTEC MGIT 960方法對照組中的1例陽性確認為試驗過程中造成的污染。

MTB生長周期長，涂片抗酸染色法陽性率低但其成本低，操作簡單，適用于基層醫院；BACTEC MGIT 960系統培養陽性的菌株還需進一步鑒定是NTM或MTB，為MTB才能進行藥敏實驗，為NTM則不能進行藥敏實驗，且成本高，適用于大醫院；Xpert MTB/RIF最大程度簡化MTB檢測，且不受NTM影響［6］，將BACTEC MGIT 960需至少3周才能完成的MTB及其利福平耐藥監測縮短為2小時［7］，且一次完成，操作簡單、易學，手動時間不超過5分鐘，檢測結果不會因人而異，整個檢測在一個密閉環境中進行，對操作者和周圍環境安全，成本與BACTEC MGIT 960成本相當。對于手動操作過多的試驗，Xpert MTB/RIF的操作在很大程度上避免了標本的污染和交叉感染，有效防止了假陽性或污染的出現。Xpert MTB/RIF完全整合了傳統PCR檢測所需的三個步驟，又將樣品準備、擴增、定量檢測進行統一，只需樣品準備，核算提取、核酸擴增、序列檢測都是儀器內進行，無需特殊實驗室，儀器設備簡單。

缺點是Xpert MTB/RIF檢測依賴于樣品中存在的MTB數目，正確采集、處理和存放標本，才能獲得可靠的結果。Xpert MTB/RIF檢測結果陽性不一定表示存在有生命力的MTB，經抗菌藥物治療后MTB DNA可能仍存在，BACTEC MGIT 960培養陽性的前提是標本中存在有生命力的MTB［8］，所以，Xpert MTB/RIF不能作為評估治療成功或失敗的指標，但Xpert MTB/RIF檢測陽性率高于BACTEC MGIT 960，且檢測所需時間僅為2小時，臨床可根據患者病情選擇檢測方法。

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［3］梁亞萍，高漫.BACTEC MGIT 960用于結核分枝桿菌快速培養的初步評價［J］.中國預防醫學雜志，2011，12（6）：521－522.

［4］ 張治國，歐喜超，孫倩，等.利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增技術檢測痰標本中結核分枝桿菌及其耐藥性的研究［J］.中國防癆雜志，2013（1）：13－16.

［5］王巍，李洪敏，王安生，等.BACTEC－MGIT960快速培養藥敏對肺結核診治的應用和評價［J］.中國防癆雜志，2003，12（6）：42－44.

［6］唐神結，胡忠義.結核病臨床診治進展年度報告：2012年第一部分結核病臨床診斷［J］.中國防癆雜志，2013，6（6）：405－426.

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10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.058

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1673－4130（2015）03－0413－02

2014－09－24）