祖師麻凝膠膏劑的制備工藝及含量測定

李希珍，張慶賀，董剛，李平亞，盧丹

(吉林大學藥學院，長春 130021)

祖師麻(Cortex daphnes)為瑞香科瑞香屬植物黃瑞香(DaphnegiraldiiNitsche)的干燥根皮及莖皮，別名祖司麻、大救駕、金腰帶、黃狗皮，分布于陜西、甘肅、四川、青海等省。味辛、苦，性溫，有小毒，具有祛風除濕、活血止痛、舒筋活絡、消腫等功效，主治風濕痹痛、四肢麻木、頭痛、腰痛、跌打損傷、支氣管炎和風濕性關節痛等癥[1，2]。

目前，臨床上應用的含有祖師麻外用制劑均為橡膠膏劑，有祖師麻膏藥、祖師麻腰間盤突出貼和祖師麻關節止痛膏。橡膠膏劑由于具有載藥量較小(0.2%～2.0%)、生物利用度低、對皮膚有刺激性、貼敷于皮膚上不易揭去[3～5]等缺點，使應用受到限制；而凝膠膏劑的載藥量一般為5%～10%，最大可達20%。由于其保濕性好，所以透皮吸收好、生物利用度高，且對皮膚刺激小，可反復帖敷[6，7]。因此，凝膠膏劑的研究日益成為外用制劑開發的熱點。本試驗研究了祖師麻凝膠膏劑的制備工藝，以期為廣大風濕類患者提供更加高效和舒適的臨床用藥。

1 儀器與材料

RK-200型水凝膠涂布機流水線(天津瑞康醫藥生物科技有限公司)；RCT-3200型超純水機(長春萊博帕特科技發展有限公司)；JYT-10型托盤天平(上海醫用激光儀器廠)；FA1104N型分析天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)；KQ-3200型超聲波清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)；1525型高效液相色譜儀、2998型PDA檢測器(美國Waters公司)；AT-330柱恒溫箱(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。

祖師麻(采自太行山，經吉林大學藥學院生藥教研室張晉敏教授鑒定為祖師麻)；祖師麻提取物(實驗室自制，批號140521)；祖師麻甲素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110900-201006)；甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 評價標準

測定初黏度、剝離性、殘留量、皮膚追隨性，并對其外觀質量打分，評分時將各指標的最大值作為參照，然后多指標綜合加權評分，根據綜合評價計算公式計算出各批制劑的得分。試驗發現，皮膚追隨性對凝膠膏劑的使用影響較大，故設定其權重k4為0.3；殘留量和剝離性對凝膠膏劑的黏度有一定的影響，故設定其權重k3和k2均為0.2；初黏度和外觀質量對凝膠膏劑的質量和使用影響較弱，故設定其權重k1和k5均為0.15，權重設定與文獻[8]報道基本一致。祖師麻凝膠膏劑的評價指標及評分標準見表1。

表1祖師麻凝膠膏劑的評價指標及評分標準

Table 1 The evaluation index and scoring standard of cortex daphnes gels

注：*.皮膚追隨性是指將成型的凝膠膏劑貼于手腕背部，用力甩10下不脫落為滿分10分。

Note:Skin to follow sex refers to the forming gel paste paste on the back of the wrist,hard left off under 10,for out of ten.

2.2 制備工藝考察

采用L9(34)正交試驗進行制備工藝考察[9～11]。在預實驗的基礎上，考察活性氫氧化鋁、甘油、酒石酸和EDTA-2Na共4個因素用量，對每個因素確定3個水平，見表2。

按L9(34)正交試驗因素水平表，稱取適量的EDTA-2Na、活性氫氧化鋁和聚丙烯酸鈉置于燒杯中，混合均勻，加入甘油，攪拌均勻，作為A相；稱取適量酒石酸，加入50mL超純水，攪拌使之完全溶解，作為B相；稱取祖師麻提取物，加入250mL超純水，攪拌使之充分溶解，作為C相；將B相和C相倒入A相中，立即攪拌均勻，涂布于無紡布上，陰干即得[12，13]。

表2祖師麻凝膠膏劑制備工藝正交試驗因素水平

Table 2 The orthogonal experiment factor levels of preparation technology of cortex daphnes gels

按“2.1”項下評價標準對祖師麻凝膠膏劑樣品進行評分及其方差分析，結果見表3和表4。

表3祖師麻凝膠膏劑制備工藝正交試驗結果

Table3Theorthogonalexperimentresultsofpreparationtechnologyofcortexdaphnesgels

編號No.ABCD總 分Totalpoints1111142.082122255.163133364.374212155.555223292.066231174.927313248.348321357.899332137.42K153.8748.6658.3057.19K274.1868.3749.3859.47K347.8858.9068.2659.27R26.2919.7118.882.08

表4祖師麻凝膠膏劑制備工藝正交試驗結果方差分析

Table4Theanalysisofvarianceoforthogonalexperimentresultsofcortexdaphnesgels

方差來源SoruceofvariationSSfFPA1139.542118.57<0.01B583.23260.69<0.05C535.22255.69<0.05D9.6121.00

注：F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

由直觀分析可知，各因素對祖師麻凝膠膏劑制備工藝的影響因素順序為A>B>C>D，以極值最小的D因素進行方差分析表明，A因素(EDTA-2Na)對祖師麻凝膠膏劑制備工藝的影響極顯著；B因素(酒石酸)和C因素(活性氫氧化鋁)對祖師麻凝膠膏劑制備工藝的影響顯著；D因素(甘油)對祖師麻凝膠膏劑制備工藝無顯著影響。確定最佳工藝條件為A2B2C3D2，制備工藝如下：稱取EDTA-2Na 0.6g、活性氫氧化鋁0.7g和聚丙烯酸鈉34g置于燒杯中，混合均勻，加入甘油130g，攪拌均勻，作為A相；稱取酒石酸1.2g，加入50mL超純水，攪拌使之完全溶解，作為B相；稱取祖師麻提取物適量，加入250mL超純水，攪拌使之充分溶解，作為C相；將B相和C相倒入A相中，立即均勻，涂布于無紡布上，陰干即得。

按確定的工藝制備3批祖師麻凝膠膏劑，并按“2.1”項下的評分標準進行綜合評分，3批產品平均得分為93.16，RSD 0.08%，表明確定的制備工藝穩定可行。

2.3 含膏量

含膏量測定采用《中國藥典》2010版一部附錄Ⅱ“貼膏劑的含膏量測定法第二法”測定祖師麻凝膠膏劑的含膏量。結果表明，含膏量分別為：5.9mg/100cm2、6.1mg/100cm2、6.0mg/100cm2。

2.4 含量測定

含量測定方法采用《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ D“高效液相色譜法”測定祖師麻凝膠膏劑中祖師麻甲素的含量。

色譜條件：Diamonsil C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相甲醇-0.3%磷酸(24∶76)，檢測波長327nm，流速1.0mL/min，柱溫35℃。

對照品溶液的配制：精密稱取祖師麻甲素對照品適量，加85%甲醇制成0.1g/L的對照品溶液。

供試品溶液的配制：精密稱定祖師麻凝膠膏體2.114g，加85%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用85%甲醇補足失去的重量，用0.2μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。

含量測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.4.1標準曲線的繪制精密吸取祖師麻甲素對照品溶液1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL，分別置于10mL容量瓶中，用85%甲醇定容至刻度，得系列對照品溶液。分別精密吸取20μL，按“2.4”項下色譜條件測定，以質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，得回歸方程Y=3.55×103X-2.27×105(r=0.9994)，線性范圍0.2μg～2.0μg。

2.4.2精密度試驗精密吸取同一供試品溶液，連續進樣6次，按“2.4”項下色譜條件測定，結果峰面積的RSD為0.99%，說明該方法精密度良好。

2.4.3重復性試驗取同一批祖師麻凝膠膏劑，按“2.4”項下供試品制備方法平行制備6個供試品溶液，依次按“2.4”項下色譜條件測定，結果祖師麻甲素含量的RSD 1.17%，表明該方法重復性良好。

2.4.4穩定性試驗取同一批樣品制得的供試品溶液，分別于0h、2h、4h、8h、24h、48h各進樣10μL，結果祖師麻甲素含量的RSD為1.82%，表明供試品溶液在48h內穩定。

2.4.5加樣回收率試驗精密稱取已知含量的祖師麻凝膠膏劑9份，分別加入祖師麻甲素對照品適量，按“2.4”項下供試品制備方法制備供試品溶液。精密吸取各供試溶液10μL，按“2.4”項下色譜條件測定(表4)，測定結果表明，該方法回收率良好。

表4祖師麻甲素加樣回收率試驗

Table 4 The Sample recovery rate experiment of daphnetin

2.5 樣品祖師麻甲素含量測定

按“2.2”項下最佳工藝制備3批祖師麻凝膠膏劑，每批次按5%比例取樣，按“2.3”項和“2.4”項方法測定含膏量和祖師麻甲素含量。3批祖師麻凝膠膏劑的平均祖師麻甲素含量(n=2)分別為10.1mg/貼、10.1mg/貼、10.2mg/貼。

3 討論

本凝膠膏劑是以聚丙烯酸鈉為骨架材料，活性氫氧化鋁為交聯劑，甘油為保濕劑，酒石酸和EDTA-2Na為調節劑。聚丙烯酸鈉作為骨架材料，不但為有效成分提供骨架支撐，而且本身可以作為增黏劑，提高凝膠膏劑的黏度；保濕劑常用的有甘油、丙二醇、山梨醇、聚丙二醇等，因甘油無色澄清、高沸點，具有較強的吸濕性，冰點較低、能防止冰凍，貼于皮膚后，有溫熱的感覺，故選擇甘油作為保濕劑。

研究表明，在制備凝膠膏劑時，攪拌速度與時間是關鍵因素。攪拌速度過快，成膠時間縮短，且容易引進氣泡，難以涂布；攪拌速度過慢，容易出現部分成膠，膠體顏色不均，使有效成分在凝膠膏體中分布不均。一般攪拌速度控制在100r/min～120r/min，攪拌時間3min～5min較好。

供試品溶液的制備方法一般采用回流提取法和超聲提取法，參考《中國藥典》2010版中祖師麻片和跌打止痛膏的供試品溶液的制備方法。本實驗選擇超聲提取法，并對提取溶劑和提取時間進行考察。提取溶劑考察了純甲醇、85%甲醇、75%甲醇和水，結果顯示，85%甲醇效果最好，超聲提取30min祖師麻甲素能提取完全。

本實驗采用HPLC對祖師麻凝膠膏劑的有效成分祖師麻甲素進行含量測定，研究表明，本方法操作簡單，精密度、重復性、穩定性和準確性良好，適用于祖師麻凝膠膏劑的含量測定和質量控制[14，15]。

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