兩種鹽酸特拉唑嗪片的人體生物等效性研究

朱蕾蕾，郭麗霞，詹 燕，裘福榮，趙彤芳，葉宇婕，元唯安，李安平，李明花，蘇淑芳，蔣 ?。ǎ虾Ｖ嗅t藥大學附屬曙光醫院臨床藥理科，上海00；．上海藥物代謝研究中心，上海00；．山西振東制藥股份有限公司，山西長治460000）

兩種鹽酸特拉唑嗪片的人體生物等效性研究

朱蕾蕾1，郭麗霞2，詹 燕2，裘福榮1，趙彤芳1，葉宇婕1，元唯安1，李安平3，李明花3，蘇淑芳3，蔣 健1（1．上海中醫藥大學附屬曙光醫院臨床藥理科，上海201203；2．上海藥物代謝研究中心，上海201203；3．山西振東制藥股份有限公司，山西長治460000）

目的評價單劑量口服國產和進口鹽酸特拉唑嗪片的人體生物等效性。方法采用單中心、隨機、開放、雙周期交叉試驗設計，21名受試者在不同周期分別空腹口服國產和進口鹽酸特拉唑嗪片2 mg，于給藥前0 h及給藥后60 h內不同時間點采集靜脈血4 m l，采用液-質聯用（LC-MS／MS）法測定受試者血漿中特拉唑嗪的濃度。結果國產和進口鹽酸特拉唑嗪片的t1／2分別為（13.2±2.39）和（12.5±1.93）h；tmax分別為（1.01±0.83）和（1.08±0.69）h；Cmax分別為（40.1±10.6）和（37.3±9.57）ng／m l；AUC0-∞分別為（428±82.1）和（426±85.2）ng?h／m l。國產鹽酸特拉唑嗪片的相對生物利用度為（101.2±14.7）%。國產與進口鹽酸特拉唑嗪片AUC0-t和C max幾何均值比的90%置信區間（CI）均落在80%～125%之間。結論國產和進口鹽酸特拉唑嗪片具有生物等效性。

鹽酸特拉唑嗪；液-質聯用；生物等效性

鹽酸特拉唑嗪（terazosin hydrochloride）是一種長效的抗高血壓藥，具有阻滯外周突觸后α1-腎上腺素受體的作用，從而引起血管擴張，外周血管阻力減小而降低血壓。本品具有對心輸出量影響極小、不引起反射性心跳加快、不減少腎血流量或腎小球過濾等優點。由于α1-腎上腺素受體阻滯而使膀胱頸、前列腺、前列腺包膜平滑肌松馳，尿道阻力和壓力、膀胱阻力減小，從而減輕尿道癥狀，因此鹽酸特拉唑嗪也是目前治療男性良性前列腺增生下尿路癥狀的一線藥物［1］。該研究的目的是評價山西振東制藥股份有限公司的鹽酸特拉唑嗪片與進口鹽酸特拉唑嗪片（高特靈）的人體生物等效性，為藥品注冊和臨床用藥提供依據。

1 材料

1．1儀器 島津液相色譜系統，包括DGU-20A3型脫氣機，LC-20ADXR型二元液相泵，SIL-20ACXR型自動進樣器和CTO-20AC型柱溫箱（日本島津公司）；MS／MS系統，TSQ Quantum Vantage型三重四極桿串聯質譜儀，配備加熱電噴霧電離源（HESI源）（美國Thermo Fisher公司）；CPA225D型分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；Hitachi CT15RE型臺式高速離心機（日本日立公司）；H-101型多功能漩渦混合器（上?？岛坦怆妰x器有限公司）。

1．2藥品與試劑 受試制劑：鹽酸特拉唑嗪片（山西振東制藥股份有限公司，規格：2 mg／片，批號：20130501）；參比制劑：鹽酸特拉唑嗪片（高特靈，美國雅培制藥有限公司生產，上海雅培制藥有限公司分包裝，規格：2 mg／片，批號：6027752）。內標：哌唑嗪（美國Sigma公司，批號：129K1137V，含量：99%）；鹽酸特拉唑嗪二水合物（山西振東制藥股份有限公司，批號：100375-201103；含量：92．3%，按鹽酸特拉唑嗪計算）。甲醇、甲酸、醋酸銨均為色譜純；水為自制超純水。

2 方法

2．1受試者選擇與試驗方案 共有22例男性健康受試者入選試驗，實際完成試驗21例，年齡（24．48±2．69）歲，身高（175．29±5．43）cm，體重（67．29±7．91）kg，體重指數為19.72～23.92 kg／m2，平均（21．83±1．54）kg／m2。所有受試者均無煙酒嗜好，無藥物過敏史和藥物濫用史，試驗前3個月內沒有參加過其他臨床試驗，試驗前2周內沒有服用過其他任何中西藥物。試驗前體格檢查和血尿常規、血生化、HBsAg、HCV抗體、H IV抗體等實驗室檢查和心電圖檢查均無異常發現，血壓均不低于100／70 mm Hg。試驗前所有受試者均簽署知情同意書。試驗方案經上海中醫藥大學附屬曙光醫院倫理委員會批準。

采用DAS3．1．1軟件包將受試者隨機分為2組，分別雙周期交叉單劑量單次空腹口服鹽酸特拉唑嗪片受試制劑或參比制劑2 mg（1片）。受試者從給藥前10 h開始禁食（禁水至少1 h），給藥2 h后方可自由飲水，4和10 h后統一進清淡午餐和晚餐。受試者給藥后避免由臥位或坐位突然轉向立位，給藥前（30 m in內）和給藥后0．5、1、2、4、8、12 h各監測血壓1次，其后每日監測1次。分別于給藥前（0 h）和給藥后15、30、45、60、80、100 min及2、2.5、3、4、6、9、12、24、36、48、60 h采集肘靜脈血，每次4 m l，置肝素抗凝試管中，3 500 r／min離心10 m in，分離血漿，于－20℃冰箱中冷凍保存。

2．2色譜與質譜條件 色譜柱：C18柱（150 mm× 4．6 mm，5μm，美國Agilent公司）；流動相：甲醇-10 mmol／L醋酸銨水溶液-甲酸（65∶35∶0．1，V／V／V）；流速：0．60 m l／min。離子源：加熱電噴霧化學電離源（HESI源），正離子方式檢測；源噴霧電壓：3 000 V；加熱毛細管溫度：350℃；氣化室的溫度：300℃；鞘氣（N2）壓力35 Pa；輔助氣（N2）壓力15 Pa；碰撞氣（A r）壓力0．16 Pa；掃描方式：選擇反應監測（SRM）；掃描時間：200 ms；特拉唑嗪和內標哌唑嗪用于定量分析的離子反應分別為：m／z 388→m／z（247＋290）和m／z 384→m／z 247，全掃描質譜圖見圖1；特拉唑嗪和內標哌唑嗪的碰撞能量分別為32 V和30 V。

2．3血漿樣品處理 受試者血漿樣品室溫解凍后，渦流混勻。取100μl受試者血漿樣品，分別加入25．0μl內標工作溶液、25．0μl甲醇-水（1∶1，V／V）和200μl甲醇，渦流混合1 m in，離心5 min（14 000 r／min），取5μl上清液進行LC-MS／MS分析。

2．4方法學驗證

2．4．1 專屬性考察 以6個不同來源的人空白血漿及相應空白血漿配制的定量下限（LLOQ）樣品評價方法的專屬性，結果表明，內源性物質不干擾待測物和內標的測定。典型色譜圖見圖2。

圖1 特拉唑嗪（A）和內標哌唑嗪（B）產物離子全掃描質譜圖

圖2 人血漿中特拉唑嗪及哌唑嗪（內標）的典型色譜圖

2．4．2 標準曲線的制備 取人空白血漿，配制成相當于特拉唑嗪血漿濃度分別為0．250、0．750、2．50、5．00、12．5、25．0、50．0 ng／m l的血漿樣品，以待測物濃度為橫坐標，待測物與內標物的峰面積比值為縱坐標，用加權（W＝1／x2）最小二乘法進行回歸運算，求得的直線回歸方程即為標準曲線。測得人血漿中特拉唑嗪的線性范圍為0．250～50．0 ng／m l。

2．4．3 精密度及回收率試驗 取低、中、高3個濃度特拉唑嗪血漿樣品（0．600、4．00、40．0 ng／m l），每個濃度進行6個樣本分析，分別在3 d內測試。測得日內相對標準差小于5．5%，日間相對標準差小于10．2%。配制低、中、高3個濃度血漿樣品和空白血漿樣品預處理后加入相應溶液的樣品，以提取后峰面積與未經提取獲得的峰面積之比計算回收率，每一待測物及相應內標的回收率均在87．3%以上，且相對標準差（RSD）小于6．4%。結果見表1。

表1 回收率及精密度試驗結果（±s）

表1 回收率及精密度試驗結果（±s）

加入濃度（ρB／ng?m l－1）RSD RSD RSD（%）0．600 0．615±0．010 2．5 0．617±0．032 2．2 90．9 0．（%）（%）回收率百分率（%）日內精密度測得濃度（ρB／ng?m l－1）日間精密度測得濃度（ρB／ng?m l－1）8 6．00 3．99±0．08 2．1 4．08±0．17 10．2 90．1 1．9 40．0 40．8±1．0 2．5 42．1±1．5 9．3 87．3 6．4

2．4．4 穩定性考察 分別考察特拉唑嗪低、高2種濃度的血漿樣品室溫放置6 h、血漿樣品經沉淀蛋白處理后室溫放置24 h、血漿樣品經歷3次冷凍-解凍循環、血漿樣品－20℃放置39 d的穩定性。特拉唑嗪血漿樣品穩定性的相對標準差（RSD）范圍為0．5%～4．2%，相對偏差（RE）為－2．5%～8．8%。

2．4．5 數據處理與統計分析 應用Pharsight公司的Phoenix W inNonlin 6．3軟件，采用非房室模型法（NCA）計算藥動學參數AUC0-t、AUC0-∞、t max、Cmax和t1／2。對主要藥動學參數（AUC、Cmax）對數轉換后進行方差分析，采用90%CI法進行兩制劑的生物等效性評價，受試制劑的AUC0-t的90%CI在參比制劑相應參數的80%～125%范圍內，且受試制劑的C max的90%CI在參比制劑相應參數的75%～133%范圍內，即可判斷兩制劑生物等效［2］；tmax采用非參數檢驗法。對受試者人口學指標和安全性數據進行描述性統計分析。

3 結果

3．1藥-時曲線 21名受試者單次口服鹽酸特拉唑嗪受試制劑和參比制劑2 mg后的平均藥-時曲線見圖3。

圖3 21名受試者單次口服鹽酸特拉唑嗪受試制劑與參比制劑2mg后的平均藥-時曲線

3．2藥動學參數 21名受試者單次口服鹽酸特拉唑嗪受試制劑與參比制劑2 mg后的主要藥動學參數見表2。

3．3生物等效性評價 方差分析結果顯示鹽酸特拉唑嗪AUC0-∞、AUC0-t和C max在給藥順序間、兩制劑間和兩周期間的差異均無統計學意義，鹽酸特拉唑嗪受試制劑與參比制劑的AUC和C max幾何均值比及其90%CI見表3。t max經非參數檢驗，受試制劑與參比制劑差異無統計學意義（P＝0．213）。

3．4安全性評價 試驗期間共有3名受試者發生3次不良事件，均發生在第一周期給藥當天。1名受試者給予參比制劑半小時后出現血壓下降，伴惡心、嘔吐1次，臥位半小時后緩解，因符合剔除標準，最后退出試驗；另2名受試者均是在給予參比制劑4 h后，由臥位轉為站立時出現頭暈，測血壓下降，臥位或坐位半小時后緩解。3例不良事件均判斷與試驗藥物有關。其余受試者無不良事件發生。所有受試者試驗后各項實驗室、心電圖檢查未見異常。

表2 21名受試者單次口服鹽酸特拉唑嗪受試制劑與參比制劑2mg后的主要藥動學參數（±s）

表2 21名受試者單次口服鹽酸特拉唑嗪受試制劑與參比制劑2mg后的主要藥動學參數（±s）

93 tmax（h）1．01±0．83 1．08±0．69 Cmax（ng／m l）40．1±10．6 37．3±9．57 AUC0-t（ng?h／m l）414±78．3 414±81．4 AUC0-∞（ng?h／m l）428±82．1 426±85．2 F（%）101．2±14．參比制劑t1／2（h）13．2±2．39 12．5±1．藥動學參數受試制劑7

表3 鹽酸特拉唑嗪受試制劑與參比制劑的生物等效性評價結果

4 討論

筆者采用LC-MS／MS測定方法，具有準確性好、精密度和靈敏度高、樣品處理簡便等優點，測得的主要藥動學參數與文獻報道基本一致［3，4］。藥動學參數等效性統計分析結果表明，鹽酸特拉唑嗪片受試制劑與參比制劑特拉唑嗪AUC0-t和Cmax幾何均值比的90%CI均落在80%～125%之間，說明2種制劑在體內的吸收、分布、消除過程相似，鹽酸特拉唑嗪片受試制劑與參比制劑具有生物等效性。

該研究因試驗對象為健康受試者，給藥后可能會出現明顯的血壓下降，1名受試者因此出現惡心、嘔吐，由于符合“服藥后4 h以內出現嘔吐、腹瀉等影響藥物代謝結果者”的剔除標準而未完成試驗；另有2位受試者均是由于臥位轉為站立位過快導致的體位性低血壓，在加強了受試者的宣教后，第二周期沒有再出現任何不良事件?？傮w可以認為鹽酸特拉唑嗪片安全性良好，但在健康受試者給藥試驗中需排除血壓正常偏低者，試驗過程中要加強監護，尤其要避免體位的過快轉變。

［1］ 祝凌飛．特拉唑嗪治療良性前列腺增生療效M eta分析［J］．中國藥房，2013，24（24）：2279-2282．

［2］ 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典2010年版二部［S］．北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄195-199．

［3］ 顧逸敏，姚 藍，劉艷梅，等．進口和國產鹽酸特拉唑嗪片的人體生物等效性研究［J］．藥學服務與研究，2009，9（5）：370-373．

［4］ 陳 鈞，陸 偉，史振祺，等．兩種鹽酸特拉唑嗪片劑人體生物等效性評價［J］．中國藥學雜志，2003，38（6）：446-448．

Bioequivalence study on two terazosin hydrochloride tablets

ZHU Leilei1，GUO Lixia2，ZHAN Yan2，QIU Furong1，ZHAO Tongfang1，YE Yujie1，YUAN Wei’an1，LI Anping3，LI M inghua3，SU Shufang3，JIANG Jian1（1．Department of Clinical Pharmacology，Shuguang Hospital Affiliated to ShanghaiU-niversity of Traditional Chinese Medicine，Shanghai201203，China；2．ShanghaiCenter for Drug Metabolism and Pharmacokinetics Research，Shanghai201203，China；3．Shanxi Zhendong Pharmaceutical Co．，Ltd．，Changzhi460000，China）

ObjectiveTo evaluate the bioequivalence of domestic and imported terazosin hydrochloride tablets after single oral dose．MethodsItwas a single center，randomized，open，cross-over trail design，21 subjects were fasting oral administered of 2 mg domestic and imported terazosin hydrochloride tablets in different periods，venous blood 4 m l were collected in different time points before and 60 h after adm inistration，plasma concentration of terazosin was determ ined by LC-MS／MS．ResultsThemain pharmacokinetic parameters of domestic and imported terazosin hydrochloride tablets were as follows：t1／2：（13．2±2．39）h vs（12．5±1．93）h，tmax：（1．01±0．83）h vs（1．08±0．69）h，Cmax：（40．1±10．6）ng／m l vs（37．3± 9．57）ng／m l；AUC0-∞：（428±82．1）ng?h／m l vs（426±85．2）ng?h／m l．The relative bioavailability of domestic terazosin hydrochloride tabletswas（101．2±14．7）%．90%CI of domestic and imported terazosin hydrochloride tablets AUC0-tand Cmaxgeometricmean ratio fell between 80%－125%．ConclusionThe domestic tablets are bioequivalent to the imported tablets．

terazosin hydrochloride；LC-MS／MS；bioequivalence

R969；R972．4

A

1006-0111（2015）05-0419-04

10．3969／j．issn．1006-0111．2015．05．009

2014-09-26

2015-03-31

［本文編輯］顧文華

“十二五”重大新藥創制《創新藥物研究開發技術平臺建設》（2012ZX09303009-001）；上海市進一步加快中醫藥事業發展三年行動計劃（2014－2016年）中醫藥專門人才計劃（ZY3-RCPY-3-1059）

朱蕾蕾，博士，主治醫師．研究方向：新藥臨床研究．E-mail：zhuleilei1981＠163．com

蔣 健，博士，主任醫師，博士生導師．研究方向：新藥臨床研究．E-mail：jiangjiansg＠126．com