蠲痹湯對類風濕關節炎大鼠模型細胞因子的影響

俞琦　蔡琨　王文佳

【摘要】目的：觀察蠲痹湯對類風濕關節炎大鼠關節炎指數（AI）、血清細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平的影響，探討蠲痹湯治療類風濕關節炎的免疫機制。方法：將大鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、甲氨喋呤對照組、蠲痹湯高/低劑量組，制備類風濕關節炎大鼠模型，給藥組以不同劑量蠲痹湯灌胃，對照組代以生理鹽水，檢測AI、血清細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的表達。結果：與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明顯上升，IL-10、IL-4水平明顯下降（P<001）；與模型對照組比較，蠲痹湯高、低劑量均能明顯降低實驗大鼠AI和血清TNF-α、IL-1β水平（P<005或P<001），對IL-4水平無影響（P>005），蠲痹湯高劑量組能顯著升高模型大鼠IL-10水平（P<001）。結論：蠲痹湯對類風濕關節炎模型大鼠TNF-α等炎癥因子具有干預作用，提示蠲痹湯可通過抑制炎性細胞因子TNF-α、IL-1的表達，促進抗炎細胞因子IL-10的分泌，從而達到治療RA的效果。

【關鍵詞】蠲痹湯；類風濕關節炎；大鼠模型；細胞因子

【中圖分類號】R2855【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2015）14-0001-02

類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA）屬難治性疾病，臨床多采用化學藥物或生物制劑進行治療，但療效不穩定。蠲痹湯出自清代程國彭所著《醫學心悟》，由獨活、桂心、秦艽、當歸、川芎、炙甘草、海風藤、桑枝、乳香、木香組成，具有祛風除濕、益氣活血、蠲痹止痛等功效，是臨床治療類風濕關節炎的常用方劑，療效顯著[1-3]。為探討其作用機制，本研究通過制備類風濕關節炎大鼠模型，以血清細胞因子為觀察指標，觀察蠲痹湯對類風濕關節炎的免疫調節作用，為進一步研究蠲痹湯治療類風濕關節炎的作用機制提供實驗依據。

1材料與方法

11實驗動物Wistar大鼠50只（180±20）g（雌雄分籠），由貴陽醫學院實驗動物中心提供[許可證號：SCXK（黔）2002-0001]。

12藥材與試劑蠲痹湯：按原方比例常規方法制備水煎劑，調整濃度為01g生藥/ml，濾過除菌，置4℃備用；甲氨喋呤（上海華聯制藥有限公司）；完全福氏佐劑（Sigma公司）；大鼠細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10、IL-4檢測試劑盒（上海拜力生物科技有限公司）。

13儀器EIX808U型全自動酶標儀（美國BioTek）。

2實驗方法

21動物分組動物購回適應性飼養1周后，隨機分為2組。正常對照組大鼠10只；模型組大鼠40只，造模后又隨機分為模型對照組、甲氨喋呤對照組、蠲痹湯高劑量組、蠲痹湯低劑量組，每組10只。

22大鼠類風濕關節炎模型的制備[4]模型組大鼠左后足跖皮內注射完全福氏佐劑，01ml/只，建立佐劑性類風濕關節炎大鼠病理模型。

23給藥方法造模后第7d，甲氨喋呤對照組按12mg/kg灌服，1次/d，連續2周；蠲痹湯高、低劑量組分別按22g/kg、11g/kg灌服，1次/d；正常對照組和模型對照組灌服等量生理鹽水，每天一次，連續給藥2周。

24關節炎指數（arthritis index，AI）的計算[5]大鼠致炎后第12d開始觀察并記錄關節病變程度，每4d1次，病變按5級分法評價，根據未注射佐劑的余下肢體的病變程度累計積分，計算出AI。0分：無紅腫；1分：小趾關節紅腫；2分：趾關節和足趾腫脹；3分：踝關節以下的足爪腫脹；4分：包括踝關節在內的全部足爪腫脹。把各個關節的積分累計起來，即為每只大鼠的AI。

25指標檢測末次灌胃12h后開始禁食（不禁水），24h后股靜脈取血，分離血清，細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平的檢測均按試劑盒說明書操作。

26統計分析數據分析采用SPSS170軟件進行，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，P<005表示差異有統計學意義。

3結果

31對類風濕關節炎大鼠關節炎指數的影響由表1可知，致炎后16d，蠲痹湯高劑量組大鼠關節炎指數顯著低于模型對照組（P<005）；致炎后20d，蠲痹湯高、低劑量組大鼠關節炎指數均較模型對照組明顯降低（P<005）；從致炎16d起，蠲痹湯高、低劑量組關節炎指數與甲氨喋呤對照組近似，無統計學差異（P>005）。

32對類風濕關節炎大鼠血清細胞因子水平的影響由表2可知，與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清細胞因子TNF-α、IL-1β水平明顯上升，IL-10、IL-4水平明顯下降，差異有統計學意義（P<001）；與模型對照組比較，蠲痹湯高、低劑量組均能明顯降低RA模型大鼠血清TNF-α、IL-1β水平（P<001或P<005），對IL-4水平均無影響（P>005）。蠲痹湯高劑量組能顯著升高模型大鼠IL-10水平（P<001）。

4討論

類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種累及周圍關節為主的多系統性自身免疫性疾病，屬于中醫學“痹證”范疇。多因風寒濕熱等外邪侵襲人體，閉阻經絡，氣血運行不暢所致。本病較為常見，且是頑固的慢性關節炎癥性病變，常侵犯四肢小關節，可引起全身的關節腫脹疼痛及功能障礙，并可伴有關節外的系統性損害，是致殘性疾病之一。臨床上多采用化學藥物或生物制劑進行治療，但其毒副作用明顯、患者難以長期耐受，且療效不穩定。近年來，用中醫中藥辨證治療類風濕關節炎取得很好療效。蠲痹湯源自《醫學心悟》，由獨活、桂心、秦艽、當歸、川芎、炙甘草、海風藤、桑枝、乳香、木香組成，是治療類風濕關節炎常用方劑，療效顯著。

研究表明，在RA的發病過程中，細胞因子的失調占有重要的地位，TNF-α、IL-1β主要由單核細胞及巨噬細胞分泌，使外周血和關節滑液中IL-1β和TNF-α升高。IL-1β和TNF-α是炎癥、組織損傷及免疫反應的主要介質，在RA的發病機理中居中心地位，參與RA的發生發展過程，二者相互協調、促進，在多數情況下表現協同性生物學效應[6]。表達的IL-1β和TNF-α可刺激滑膜細胞和軟骨細胞產生基質金屬酶、膠原酶等，導致滑膜炎癥和軟骨破壞，同時可激活破骨細胞，使骨質溶解[7]。IL-4和IL-10是兩種抗炎癥的Th2型細胞因子，可負調節抗原提呈細胞的功能，抑制Th1增生，抑制IL-1β、TNF-α和其他一些炎癥性細胞因子的功能和生成。IL-10、IL-4在RA病變中含量明顯降低。實驗和臨床觀察證實，糾正促炎癥細胞因子和抗炎癥細胞因子的平衡失調狀態，可以緩解或阻止關節炎癥的發生和發展[8]。

本研究結果顯示，致炎20d后，與模型對照組比較，蠲痹湯高、低劑量均能顯著降低實驗大鼠關節炎指數（P<005）；從致炎16d起，蠲痹湯高、低劑量組關節炎指數與甲氨喋呤對照組近似，無統計學差異（P>005），表明蠲痹湯能抑制大鼠RA的繼發病變。與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明顯升高，IL-10、IL-4水平明顯降低（P<001），提示模型大鼠淋巴細胞免疫功能下降，炎性細胞因子分泌增多，抗炎性細胞因子減少，促進了RA的發生發展。與模型對照組比較，蠲痹湯高、低劑量能明顯降低實驗大鼠血清TNF-α、IL-1β水平（P<001或P<005），蠲痹湯高劑量組能顯著升高模型大鼠IL-10水平（P<001），說明蠲痹湯在一定劑量下對類風濕關節炎大鼠模型的免疫功能及紊亂的細胞因子具有調節作用，提示蠲痹湯可通過抑制炎性細胞因子TNF-α、IL-1β的表達，促進抗炎細胞因子IL-10的分泌，從而達到治療RA的效果。經蠲痹湯治療后，模型動物IL-4水平不發生變化，提示其不能調節IL-4的表達。

佐劑性關節炎動物模型與人類RA有較高的相似度，利用該模型對RA治療藥物篩選具有重要的應用價值。本實驗采用佐劑性關節炎癥動物模型進行研究的結果表明：蠲痹湯對佐劑性關節炎大鼠足關節病變有顯著抑制作用，其臨床治療類風濕關節炎的機制可能與其調節炎性細胞因子的產生、調節機體免疫有關。

參考文獻

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（收稿日期：2015415）