水楊酸鈉對低劑量硫酸慶大霉素致聾的保護作用

李兆龍，徐義策，周潔 （華中科技大學同濟醫學院附屬孝感醫院耳鼻咽喉科，湖北 孝感432000）

藥物性耳聾是耳毒性藥物引起內耳毛細胞損傷后所造成的一種感音神經性耳聾，以往的研究主要集中在氨基甙類藥物作用后損傷內外毛細胞、螺旋神經節、血管紋等部位以及氧自由基對線粒體損傷等［1］。而水楊酸鈉是臨床上常用的解熱鎮痛藥，也是一種自由基清除劑［2］。本實驗通過同時給予慶大霉素及水楊酸鈉注射液腹腔注射，觀察大鼠聽覺功能的改變，為以后研究傳入神經神經突觸性聽力損傷提供實驗方面的依據。

l 材料與方法

1.1 動物分組

選用5周齡清潔級SD大鼠44只，雌雄不限，體重100～110g（由湖北省實驗動物研究中心提供），隨機分成慶大霉素（GM）組、水楊酸鈉（SA）組、聯合用藥（GM＋SA）組、正常對照組。

1.2 動物給藥

GM組給予慶大霉素150mg／kg腹腔注射，1次／d；SA組給予水楊酸鈉溶液150mg／kg腹腔注射，1次／d；GM＋SA組同時給予慶大霉素及水楊酸鈉注射液腹腔注射，劑量同上。硫酸慶大霉素注射液：8萬單位／mL，天津藥業焦作有限公司生產，批號：10021721；水楊酸鈉，北京化工二廠生產，批號：910418；10%水合氯醛：湖北省孝感市中心醫院生產。正常對照組不予任何處理。

1.3 聽性腦干反應（ABR）閾值測試

各組大鼠均于用藥后第7、10、14天檢測ABR閾值，正常對照組同時檢測。ABR閾值檢測方法見文獻 ［3］。

1.4 統計學分析

ABR閾值檢測數據以 （±s）表示，組間差異性檢驗采用SPSS 18.0for windows統計分析軟件進行方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 動物一般狀況觀察

所有實驗動物在用藥后飲食正常，部分動物用藥后體重無明顯下降，各組之間體重無明顯差異，無偏頭、肢體外展、強迫環繞運動、站立不穩等前庭功能異?，F象，無死亡大鼠。

2.2 大鼠ABR閾值

給藥7d后GM組（150mg／kg）12只大鼠Click聽閾有所下降，給藥第10、第14天后大鼠Click聽閾繼續下降，與正常對照組比較ABR（Click）閾值差異均有統計學意義（P＜0.05）。給藥第7天、10、14天后，SA組（150mg／kg）12只大鼠ABR（Click）聽閾未有明顯下降，與正常對照組比較無統計學差異（P＞0.05）。給藥第7、10、14天后，GM＋SA組（150mg／kg）12只大鼠ABR（Click）聽閾未有明顯下降，與正常對照組比較無統計學差異（P＞0.05）。見表1。

表1 不同藥物對大鼠ABR閾值的影響

3 討論

本實驗中GM組大鼠在給藥第7天，各頻率ABR閾值開始下降，繼續給藥至第14天，大鼠聽力下降明顯。主要是氨基甙類藥物在耳蝸有一個蓄積的過程并損傷內外毛細胞，有實驗［1，4］證實在氨基甙類藥物暴露后的大鼠，內外毛細胞有不同程度的缺失。部分毛細胞胞核發生凋亡，這也可能是機體啟動了一系列保護性的機制來對抗氨基甙類藥物造成的耳毒性。實驗亦證實內外毛細胞能主動吸收慶大霉素，尤其是低回毛細胞吸收作用更強［1］，這也可能是我們常常所見到的高頻聽力下降的一種原因。

在本實驗中SA組大鼠在給藥第10天，各頻率ABR閾值未有明顯變化，繼續給藥至第14天，大鼠聽力下降輕度下降（P＞0.05）對大鼠進行行為學觀察發現部分大鼠偶爾有方向缺失感，反應靈敏性下降，但停藥觀察后大鼠均反應正常。大量研究表明神經的可塑性變化可導致耳鳴［5］，而且停藥后大鼠恢復原有狀態是否為神經可塑性的結果還需進一步研究。目前有研究表明在耳蝸傳入神經與內毛細胞之間存在著一種帶狀突觸結構，這種突觸結構比較復雜主要成員有RIBEYE，Bassoon及Piccolo，而RIBEYE被認為是內毛細胞帶狀突觸結構的組成部分，可能具有酶活性，含有A domain及B domain，現可用抗CtBP2抗體標記RIBEYE中的B domain從而起到標記整個帶狀突觸結構［6，7，4］。聽覺過程包括聲－電－化學－點神經沖動－中樞信息等多個環節，包括內外毛細胞，支持細胞，傳入神經纖維，傳入神經突觸。有研究表明注射水楊酸鈉使位于外毛細胞上的驅動蛋白prestin蛋白特異性表達增強從而使外毛細胞的電致運動增強；注射水楊酸鈉能夠引起氯化物轉運體家族多個成員mRNA表達的改變。多種因素的協同作用可能使外毛細胞所處內環境中的Cl－濃度發生改變，最終導致外毛細胞內的Cl－濃度增加而使耳蝸主動性增加［8］。

在本實驗中GM＋SA組大鼠聽力未發生明顯變化，表明水楊酸鈉對低劑量硫酸慶大霉素耳毒性具有一定的保護作用。以往研究表明自由基和鐵離子在GM的耳毒性中起重要作用，而SA對GM造成的耳毒性有一定的保護作用［9］，而在這個過程中內毛細胞的帶狀突觸究竟發生了怎么樣的變化尚需進一步的研究。

［1］丁大連，Richard S.氨基糖苷類抗生素耳毒性研究 ［J］.中華耳科學雜志，2007，5（2）：125～131.

［2］Song B B，Anderson D J，SchachT J.Protection from gentamicinot otoxicity by iron chelators in guinea pig in vivo ［J］.J Pharmacol Exp Ther，1997，282：369～377.

［3］袁分錢；楊仕明；孫建和，等 .速尿與硫酸卡那霉素聯合用藥對大鼠內耳毒性的實驗觀察 ［J］.中華耳科學雜志，2011，9（1）：66－71.

［4］李姝娜，柳柯，任重，等 .慶大霉素對耳蝸內毛細胞帶狀突觸數量的影響 ［J］.解剖科學進展，2008，14（3）：298～301.

［5］劉丹政，王德輝，周梁，等.水楊酸對C57BL／6小鼠耳蝸聲損傷的作用 ［J］.中國臨床醫學，2008，15（2）：239～242.

［6］Liu K，Li S，Jang X J，et al.Quantitative analysis of the ribbon synapse number of cochlear inner hair cells in C57BL／6Jmice using the three－dimensional modeling method.Sci China ［J］.C Life Sci，2009，52：807～812.

［7］徐義策，王雪峰，柳柯，等 .氨基甙類藥物毒性對耳蝸內毛細胞傳入神經突觸谷氨酸受體的影響 ［J］.解剖科學進展，2012，18（5）：401～404，408.

［8］馮爽，韋嘉章，高萌，等.水楊酸鈉抑制大鼠螺旋神經節神經元電壓門控鈉通道的研究 ［J］.廣西醫科大學學報，2010，27（1）：1～4.

［9］Su Huasha，Jochen S.Antioxidanta attenuate gentamicin－induced free radical formation in vitro and ototoxicity in vivo：D－methionine is a potential protectant ［J］.Heart Res，1999，142：34～40.