乳制品中有機氯類農藥殘留雜質的檢測

王爭爭，平麗娟，郭明剛，王艷飛，張琦

（蒙牛乳業（焦作）有限公司，河南 焦作 454000）

0 引言

目前，關于乳制品中有機氯類農藥殘留的檢測條件不明確，雜質干擾嚴重，不能很好的分離目標峰與雜質峰，不能滿足檢測需求。本文通過對乳制品中有機氯類農藥殘留檢測條件的探索，尋找最佳檢測條件。

1 材料與儀器設備

α -六六六，β -六六六，γ -六六六（林丹），δ -六六六，p，p'-滴滴伊，p,p'-滴滴滴，o,p'-滴滴涕，p,p'-滴滴涕，艾氏劑，狄氏劑，七氯，環氧七氯，α-硫丹，β-硫丹，硫丹硫酸酯，順式氯丹，反式氯丹，氧化氯丹。

標準物質的儲備液：以正己烷或者丙酮配制各標準物質的儲備液。

標準物質的工作液：以正己烷配制混合標準工作液（建議濃度為檢出限的100倍）。

氯化鈉（分析純）、硫酸鎂（分析純）、乙腈（色譜純）、正己烷（國產色譜純）、正己烷（進口色譜純）。

50 mL離心管：聚乙烯材質、聚丙烯材質、玻璃材質。Varian450-GC氣相色譜儀（配ECD檢測器、配自動進樣器）。

2 檢測條件

2.1 儀器條件

進樣口溫度270℃；檢測器溫度300℃。

柱溫舊升溫程序：初始溫度85℃，保持2 min，以40℃/min升至165℃，保持10 min，以40℃/min升至215℃，保持5 min，以10℃/min升至280℃，保持5.25 min，總時間為32 min。

柱溫新升溫程序：初始溫度85℃，保持2 min，以40℃/min升至200℃，保持8 min，以8℃/min升至235℃，保持2 min，以20℃/min升至280℃，保持6.5 min，總時間為28 min。

CP-Sil 19CB色譜柱：50m×0.25mm×0.20 μ m。最高允許柱溫280℃。載氣為高純氮氣，純度大于99.999%，分流比為關，柱流速為1.3 mL/min。

2.2 方法

稱10 g樣品于50 mL離心管中，加20 mL乙腈，3.5～4.5 g硫酸鎂和1.0～1.5 g氯化鈉，渦旋1 min，以4 500 r/min轉速離心5 min，有機相乙腈旋轉蒸干，用2.5 mL乙腈、5 mL純水、2.5 mL乙腈分別沖洗轉入50 mL離心管，加入10 mL正己烷，渦旋30 s，正己烷層轉移到玻璃試管，再加5 mL正己烷重復提取1次，合并提取液，氮氣吹干，加1 mL洗脫試劑（正己烷：丙酮=9：1）溶解，過SPE凈化柱，加3 mL洗脫試劑沖洗玻璃試管，倒入SPE柱，重復3次洗脫，氮氣吹干，加入1.00 mL正己烷溶解，過濾后，進氣相色譜檢測。

圖1 舊升溫程序中標準品與原奶樣品譜圖對照

所用空白均為純水代替樣品，所用樣品均為原奶。單次或者單項目對比均在相同條件下、同一批次處理。

3 雜質分析

3.1 升溫程序的改變對雜質的影響

（1）用舊升溫程序單純檢測樣品時，在α-硫丹處有干擾，不影響結果出具及回收率的檢測；在β-666處有干擾，不影響結果出具，但影響回收率的檢測；在氧化氯丹處有嚴重的干擾，幾乎與標準品目標峰重合，影響結果的出具及回收率的檢測,如圖1和表1、表2所示。

（2）通過改變儀器的升溫程序，使β-666和氧化氯丹與相應的雜質分離。新升溫程序檢測時，β-666和氧化氯丹處無雜質干擾，正常結果出具及檢測回收率；在α-硫丹處有雜質干擾，不影響結果出具及回收率的檢測；新增反式氯丹和順式氯丹處有雜質干擾（由于升溫程序的改變，造成其他雜質滯留于此），不影響結果出具及回收率的檢測，反式氯丹檢測回收率時需手動積分。如圖2、和表3～表7所示。

由上述可以看出，通過改變儀器方法的升溫程序，可以使影響結果出具及回收率檢測的雜質峰與目標峰分離，其他雜質不影響結果的出具及回收率的檢測。

3.2 實驗器材對雜質的影響

3.2.1 離心管之間的空白對比

圖2 新升溫程序中標準品與原奶樣品譜圖對照

表1 舊方法中β-666回收率的檢測

表2 舊方法中α-硫丹回收率的檢測

表3 新方法中β-666回收率的檢測

使用聚乙烯離心管、玻璃管和聚丙烯離心管檢測空白，然后進行對比，發現在氧化氯丹處的雜質聚乙烯離心管（1 611 mV）較玻璃管（737 mV）和聚丙烯離心管（733 mV）大2倍，玻璃管和聚丙烯離心管處雜質無明顯區別；β-666處均無雜質干擾；α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處雜質無明顯區別。

表4 新方法中氧化氯丹回收率的檢測

表5 新方法中α-硫丹回收率的檢測

表6 新方法中反式氯丹回收率的檢測

表7 新方法中順式氯丹回收率的檢測

3.2.2 有機藥品對聚丙烯離心管和聚乙烯離心管的溶出雜質對比

（1）用聚乙烯離心管和聚丙烯離心管分別加入20 mL乙腈、3.5～4.5 g硫酸鎂和1.0～1.5 g氯化鈉，渦旋離心，有機相乙腈氮氣吹干，加入1.00 mL正己烷溶解，過濾檢測，然后進行對比發現在氧化氯丹處的雜質聚乙烯離心管（37 mV）較聚丙烯離心管（25 mV）差別不大，處于正常范圍；β-666、α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處均無雜質干擾。

（2）用聚乙烯離心管和聚丙烯離心管分別加入5 mL乙腈和5 mL純水，加入10 mL正己烷，渦旋30 s，正己烷層轉移到玻璃試管，再加5 mL正己烷重復提取一次，氮氣吹干，加入1.00 mL正己烷溶解，過濾檢測，然后進行對比發現在氧化氯丹處的雜質聚乙烯離心管（420 mV）較聚丙烯離心管（160 mV）大2.5倍，β-666處均無雜質干擾，α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處雜質無明顯區別。

由上述可以看出，正己烷對玻璃管和聚丙烯離心管無溶出物質，對聚乙烯離心管有溶出物質；三種器具檢測的空白中β-666處均無雜質干擾；α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處雜質無明顯區別，玻璃管和聚丙烯離心管氧化氯丹處雜質無明顯區別；由于有機溶劑對玻璃管無溶出物質，所以玻璃管和聚丙烯離心管中氧化氯丹、α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處的雜質均為藥品中的雜質。由于玻璃管易碎，可以用聚丙烯離心管代替聚乙烯離心管，減小雜質對檢測的影響。

3.3 藥品的排查

3.3.1 藥品之間的對比及同一廠家不同時間的藥品對比

（1）前處理中涉及到濃縮提取后上機檢測的藥品：乙腈25 mL，硫酸鎂 3.5～4.5 g，氯化鈉1.0～1.5 g，純水5 mL，正己烷25 mL，丙酮1 mL。

通過濃縮液的對比發現，氧化氯丹處雜質，正己烷濃縮液為560 mV；乙腈、水、丙酮的濃縮液和氯化鈉、硫酸鎂的乙腈提取液為15 mV左右，與正己烷原液15 mV沒有區別。α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處的雜質：正己烷濃縮液均為15 mV左右，乙腈、水、丙酮的濃縮液和氯化鈉、硫酸鎂的乙腈提取液均沒有。

（2）同一廠家同一個批次不同到貨時間的色譜純正己烷。新正己烷原液、新正己烷配制標準品與舊正己烷配制標準品對比發現，氧化氯丹處雜質新正己烷（20 mV）較舊正己烷（3 mV）大近7倍，如果換算為樣品，即一個樣品需要25 mL正己烷濃縮，理論上氧化氯丹處雜質新正己烷為500 mV、舊正己烷（75 mV）。

由上述可以看出，氧化氯丹、α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處的雜質均為正己烷藥品中雜質所導致，且同一廠家同一批次不同到貨時間的藥品之間雜質相差較大。

（3）不同廠家之間的藥品對比。通過國產色譜純正己烷與進口色譜純正己烷原液對比以及25 mL濃縮液對比發現：進口色譜純正己烷在α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處均無雜質干擾，在氧化氯丹處雜質干擾很小。

氧化氯丹處雜質：國產色譜純正己烷原液（38 mV），25 mL濃縮液（1 800 mV）；進口色譜純正己烷原液（2.5 mV），25 mL濃縮液（13 mV），進口色譜純正己烷25 mL濃縮液（13 mV）比國產色譜純正己烷原液（38 mV）還小。

由上述以看出，進口色譜純正己烷比國產色譜純正己烷對目標峰的干擾雜質少，雜質小。此外，檢測時：（1）最高柱溫不能超過柱子允許的最高恒溫溫度；（2）使用自動進樣器，進樣量準確，重復性好；（3）使用氮氣做載氣時要用高純氮氣，純度大于99.999%；（4）配制標準品所用的藥品最好使用色譜純，或者分析純經過重蒸；（5）所用標準品是國家承認的有資質的廠家或者研究機構生產的，最好是有標準物質證書的一級標準物質。

4 結果與討論

通過以上改變，使β-666和氧化氯丹與相應的雜質分離，β-666和氧化氯丹處無雜質干擾，正常結果出具及檢測回收率；在α-硫丹、反式氯丹和順式氯丹處無雜質干擾，正常結果出具及檢測回收率。

為了減少有機氯檢測過程中的雜質干擾：

（1）通過對上機檢測時的升溫程序的改變：使用新升溫程序（初始溫度85℃，保持2 min，以40℃/min升至200℃，保持8 min，以8℃/min升至235℃，保持2 min，以20℃/min升至280℃，保持6.5 min，總時間為28 min。）先對干擾雜質進行分離，使干擾嚴重的雜質與目標峰進行分離，減少雜質對目標峰的影響。

（2）通過對檢測時使用的玻璃器具（聚乙烯離心管、聚丙烯離心管、玻璃離心管）的排查：發現聚乙烯離心管有雜質溶出，對檢測有機氯產生影響，雜質干擾嚴重；玻璃離心管無雜質溶出，但是易碎；聚丙烯離心管無雜質溶出；最后使用聚丙烯離心管代替有雜質溶出的聚乙烯離心管及易碎的玻璃離心管。

（3）對檢測時使用的藥品（國產色譜純正己烷、進口色譜純正己烷）的排查：發現國產色譜純正己烷對檢測有機氯產生影響，雜質干擾嚴重；進口色譜純正己烷雜質干擾很??；最后使用進口色譜純正己烷代替國產色譜純正己烷。

通過這三處改變可減少雜質干擾，減少對回收率的影響，減少對結果出具的影響。

[1]GB/T 5009.19-2008食品中有機氯農藥多組分殘留量的測定[S].北京：中國標準出版社，2009.3

[2]GB/T 5009.162-2008動物性食品中有機氯農藥和擬除蟲菊酯農藥多組分殘留量的測定[S].北京：中國標準出版社，2009.3

[3]GB/T 23210-2008牛奶和奶粉中511種農藥及相關化學品殘留量的測定氣相色譜-質譜法[S].北京：中國標準出版社，2009.5