乙型肝炎病毒DNA定量檢測與臨床的關系

朱建奎

【摘要】 目的 探討乙型肝炎（乙肝）病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）定量檢測與臨床的關系。方法 100例乙型肝炎血清標志物陽性患者作為研究組， 22例正常健康人作為對照組， 通過微板核酸雜交技術對其進行HBV-DNA 聚合酶鏈式反應（PCR）的定量檢測。結果 所有研究對象依據血清學標志物可分為五組， 乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝E抗原（HBeAg）、乙肝核心抗體（抗-HBc）陽性患者的HBV-DNA陽性率遠高于其他組患者， 比較差異有統計學意義（P<0.05）。結論 乙肝血清學標志物不能完全反映出患者機體中HBV病毒復制情況， 而HBV-DNA 的定量檢測， 對于乙肝病毒感染病情進展的檢測和抗HBV復制藥物治療有重要臨床意義。

【關鍵詞】 乙型肝炎病毒；脫氧核糖核酸；定量檢測；血清學標志物

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.03.016

HBV是誘發病毒性感染的最主要病原， 而我國在世界范圍內是一定肝炎病毒感染率相對較高的國家之一， 大約2億左右人口感染乙型肝炎病毒， 因而其引發原發性肝癌的危險系數也大幅度增加。所以， 防治乙型肝炎病毒感染一向是我國控制傳染病的首要問題[1]。但是， 乙型肝炎病毒血清學標志物無法滿足醫生判斷患者病情和評估抗病毒藥物的臨床療效[2]。因此本次研究中， 選取2014年1月～2015年1月本院收治的100例乙型肝炎血清標志物陽性患者作為研究組， 同期選取22例正常健康人作為對照組， 運用微板核酸雜交技術對其進行HBV-DNA PCR的定量檢測， 分析乙型肝炎病毒DNA定量檢測與臨床的關系， 現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年1月～2015年1月本院收治的乙型肝炎血清標志物陽性患者100例作為研究組， 其中男55例， 女45例， 年齡26～74歲， 平均年齡（58.43±6.34）歲；同期選擇22例正常健康人作為對照組， 其經檢查均為肝功能正常、HBV血清學標志物陰性者， 其中男13例， 女9例， 年齡26～73例， 平均年齡（58.23±6.04）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異均無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 試劑與儀器 試劑：上海浩源生物科技有限公司所提供的HBV微板核酸雜交定量檢查試劑盒， 上?？迫A公司所提供的HBV血清學標志物檢測試劑盒；儀器：英國TECHNE-GEN IUS PCR擴增儀， 奧地利生產的SLT-SPECTRA型酶標儀。

1. 3 檢測方法 試劑準備：將PCR主反應液、稀釋液和裂解液進行分裝處理；標本制備：在50 μl裂解液中混入50 μl標本， 并在37℃的保溫箱中進行1 h的保溫處理， 并置入100 μl中和液， 再使用樣品稀釋液A予以稀釋， 使之成為樣品原液， 再使用樣品稀釋液B對樣品原液進行稀釋， 并取稀釋后樣品15 μl， 將其置入主反應液中， 再加入50 μl的石蠟油。標本處理完畢后進行擴增與雜交， 并使用TMB系統對雜交后的標本進行顯色處理， 使用酶標儀獲取讀數， 并予以定量計算。

1. 4 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數 ± 標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

所有研究對象依據血清學標志物可分為五組， HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性患者的HBV-DNA陽性率遠高于其他組患者， 比較差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

HBV血清標志物檢查是最早應用于臨床的檢測方法之一， 其在判斷HBV復制和診斷HBV感染情況上曾發揮較大作用[3]。然而， 因為病毒變異以及集體對于免疫應答不同等原因， HBV血清標志物檢查指標已經無法準確反映乙型肝炎病毒全貌[4]。而患者血清中HBV-DNA定量檢測則能準確反映患者血清內HBV-DNA復制情況， 且逐漸成為HBV治療的臨床療效檢測指標[5]。因此， 分析HBV血清標志物與HBV-DNA的定量結果， 對于乙型肝炎診斷和抗HBV藥物的療效判定提供重要依據。

本組研究結果顯示， HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性組為乙肝病毒感染期標志， 該組患者的HBV-DNA檢出率為94.6%， 其DNA的拷貝數是（4.2±0.6）×107 copies/ml， 可見該組患者的乙肝病毒復制的活躍性最高， 此類型患者的傳染性最強。HBsAg、抗-HBe、抗-HBc組是乙肝病毒長期攜帶標準， 其HBV-DNA含量拷貝數是（7.5±2.9）×105 copies/ml， 提示其病毒復制仍然比較活躍。HBsAg、抗-HBc陽性組患者的DNA拷貝數為（6.3±2.1）×105 copies/ml， 明顯低于HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性組， 可見其病毒復制水平相對較低， 且傳染性也比較弱。目前認為， 其為HBV感染恢復期。

綜上所述， 乙肝血清學標志物作為是否存在乙肝病毒感染的檢測無法正確反映患者機體中乙肝病毒復制情況， 但HBV-DNA定量檢測， 對于評估乙型肝炎病毒感染進展和抗病毒藥物療效有重要的臨床意義， 其在乙型肝炎治療方案的選擇與療效判定方面有廣泛應用前景。

參考文獻

[1] 楊陽， 黃鑫， 崔智威， 等. 乙型肝炎病毒DNA定量檢測室內質控品的制備及應用研究. 醫學信息， 2015， 28（4）：330-331.

[2] 金怡， 魏飛力， 馬麗娜， 等. 熒光定量聚合酶鏈反應和直接測序法檢測乙型肝炎病毒逆轉錄區耐藥變異的比較. 中華肝臟病雜志， 2010， 18（9）：641-642.

[3] 鞠瑩， 高彥欣， 趙汝欽 . 核苷（酸）類似物治療慢性乙型肝炎的全程優化策略. 國際流行病學傳染病學雜志， 2012， 39（5）：339-341.

[4] 曹季軍， 呂心路， 許愛萍， 等. 乙型肝炎病毒DNA定量檢測臨界室內質控品的制備與初步應用.檢驗醫學與臨床， 2011（22）： 2771-2772.

[5] 王澤， 唐景峰. 乙型肝炎病毒阿德福韋酯耐藥多重熒光聚合酶鏈反應檢測方法的建立及臨床應用.實用醫技雜志， 2015（3）： 240-245.

[收稿日期：2015-06-09]