飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐生長性能、體脂肪酸組成及空腸中小腸型脂肪酸結合蛋白表達的影響

張 婷 鐘 偉 羅 婧 周 寧 黃 健 王 卓孫皓然 樊燕燕 李光玉（中國農業科學院特產研究所，吉林省特種經濟動物分子生物學省部共建實驗室，長春130112）

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飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐生長性能、體脂肪酸組成及空腸中小腸型脂肪酸結合蛋白表達的影響

張 婷 鐘 偉 羅 婧 周 寧 黃 健 王 卓孫皓然 樊燕燕 李光玉?
（中國農業科學院特產研究所，吉林省特種經濟動物分子生物學省部共建實驗室，長春130112）

摘 要：為研究飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐生長性能、體脂肪酸組成及空腸中小腸脂肪酸結合蛋白（I?FABP）表達的影響，選取145日齡、體重相近的健康雄性銀狐50只，隨機分成5組（每組10個重復，每個重復1只），分別飼喂含10%、12%、16%、20%、24%混合油脂（雞油∶豆油＝1∶1）的試驗飼糧，試驗飼糧實測脂肪水平分別為12．85%（A組）、14．71%（B組）、18．72%（C組）、22．23%（D組）、26．11%（E組）。預試期為15 d，正試期為75 d。結果顯示：1）飼糧脂肪水平顯著影響冬毛期銀狐的平均日采食量（ADFI）（P＜0．01），ADFI隨著飼糧脂肪水平的升高而降低；B、C、D組的平均日增重（ADG）極顯著高于A、E組（P＜0．01）；D組料重比（F／G）顯著低于A、B、E組（P＜0．05）。2）隨著飼糧脂肪水平的升高，肌間脂肪中飽和脂肪酸（SFA）的比例升高，單不飽和脂肪酸（MUFA）的比例下降（P＜0．05），而多不飽和脂肪酸（PUFA）的比例無顯著變化（P＞0．05）。3）飼糧脂肪水平對銀狐皮下腹部脂肪中SFA、MUFA和PUFA的比例無顯著影響（P＞0．05）。4）隨飼糧脂肪水平的升高，空腸中I?FABP mRNA的相對表達量呈上升趨勢，表現為E組顯著高于A、B、C組（P＜0．05）。由此得出，當飼糧脂肪水平達到18．72%時，冬毛期銀狐表現出最佳的生長性能；銀狐體脂肪酸組成能夠反映飼糧的脂肪酸組成，肌間脂肪脂肪酸組成受飼糧脂肪水平的影響，而皮下脂肪脂肪酸組成相對穩定；此外，提高飼糧脂肪水平可促進冬毛期銀狐空腸中I?FABP的表達。

關鍵詞：銀狐；脂肪水平；生長性能；脂肪酸組成；小腸型脂肪酸結合蛋白

脂肪是最經濟有效的能量來源，在冬毛生長期，銀狐需要沉積脂肪抵御嚴寒，因此適量的飼糧脂肪水平有利于能量儲存，進而獲得較好的生長性能。飼糧中添加脂肪可為動物機體提供生長所需的脂肪酸［1］。大量試驗證實，毛皮動物體脂肪酸組成與飼糧脂肪酸組成存在一定的對應關系［2－4］，而且不同組織中脂肪酸組成有差異［5］。小腸型脂肪酸結合蛋白（I?FABP）特異性地表達于小腸近端上皮吸收細胞，與長鏈脂肪酸具有高度親和力，能夠促進長鏈脂肪酸的吸收和轉運［6］。毛皮動物飼糧脂肪水平往往高于其他單胃動物，根本原因在于脂肪代謝相關基因的調控不同。銀狐的體組織雖然不被食用，但研究銀狐體脂肪酸組成是探索銀狐體脂肪酸在體內分配利用的基礎。本試驗旨在研究飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐生長性能、體脂肪酸組成及空腸中I?FABP表達的影響，為銀狐脂肪酸營養及脂肪代謝研究提供基礎數據。

1　材料與方法

1．1 試驗設計

選取145日齡、體重相近的健康雄性銀狐50只，隨機分成5組，每組10個重復，每個重復1只，單籠飼養，籠子尺寸為100 cm×80 cm×80 cm。5組銀狐分別飼喂含10%、12%、16%、20%、24%混合油脂（雞油∶豆油＝1∶1）的試驗飼糧，試驗飼糧實測脂肪水平分別為12．85%（A組）、14．71%（B組）、18．72%（C組）、22．23%（D組）、26．11%（E組）。預試期為15 d，正試期為75 d。整個試驗在室外自然光照條件下進行，由專人進行飼養。每天早晚各飼喂1次，自由采食并保證充足的飲水，每日觀察記錄狐貍的健康狀況并記錄采食量，計算平均日采食量（ADFI）。試驗初始和結束各稱重1次以計算平均日增重（ADG）。根據ADFI和ADG計算料重比（F／G）。

1．2 試驗飼糧

以膨化玉米、豆粕、秘魯魚粉、肉骨粉、玉米蛋白粉、干酒糟及其可溶物（DDGS）、雞油、豆油等為主要原料，同時添加由礦物質、維生素等組成的營養性添加劑制成試驗飼糧。試驗飼糧組成及營養水平見表1，試驗飼糧脂肪酸組成見表2。

表1　試驗飼糧組成及營養水平（風干基礎）Table 1　Composition and nutrient levels of experimental diets（air?dry basis）　%

表2　試驗飼糧脂肪酸組成Table 2　Fatty acid composition of experimental diets　%

1．3 樣品采集

試驗結束后，每組隨機選取7只銀狐，心臟注射5 mL的琥珀乙酰膽堿處死。迅速解剖，取空腸近端1／4處約1 cm，用生理鹽水沖洗掉食糜，放入凍存管后立即投入液氮中10 min以上，之后轉入－80℃冰箱保存。分別取大腿內側肌肉、皮下腹部脂肪各50 g，用生理鹽水沖洗掉血跡，放入自封袋，－20℃冰箱冷藏待測脂肪酸組成。

1．4 測定方法

1．4．1 常規養分測定

試驗飼糧粗蛋白質含量采用凱氏定氮法測定，參照GB／T 6432—1994；粗脂肪含量采用索氏提取儀測定，參照GB／T 6433—1994；粗灰分含量采用高溫灼燒法測定，參照GB／T 6438—1992測定；鈣含量采用乙二胺四乙酸（EDTA）絡合滴定法測定，參照GB／T 6436—1992；磷含量采用釩鉬酸銨比色法測定，參照GB／T 6437—1992。

1．4．2 脂肪酸測定

脂肪酸組成測定采用氣－質－質聯用儀（Agi?lent 7890A－7000B）測定。色譜條件：色譜柱DB－5MS（30 m×250 μm×0．25 μm）；初始柱溫55℃，保持2 min，再以5℃／min的速率升至200℃，保持1 min，再以2℃／min的速率升至230℃，保持3 min，再以5℃／min的速率升至270℃，保持10 min；進樣口溫度為250℃；載氣為氦氣（99．999%），1．0 mL／min；進樣量為1 μL；分流比為10∶1。質譜條件：電子轟擊離子（EI）源；離子源溫度230℃；電子能量為70 eV；接口溫度為250℃；質荷比（m／z）為50～500。

1．4．3 空腸中I?FABP表達的測定

1．4．3．1 總RNA的提取和cDNA的合成

取空腸樣品100 mg左右，在液氮中研磨成粉，收集于1．5 mL無RNA酶Eppendorf管中?？俁NA的提取采用RNAiso Reagent試劑（TaKaRa公司），提取過程參照試劑盒說明書。提取的總RNA通過凝膠電泳檢測其完整性，并測定總RNA 在260和280 nm處的吸光度（OD）值，以檢測其純度。反轉錄采用10 μL反轉錄反應體系：總RNA 2．0 μL，5×PrimeScriptTMBuffer 2．0 μL，Ran?dom6 mers（100 μmol／L）0．5 μL，PrimeScriptTMRT Enzyme Mix 0．5 μL，Oligo dT Primier （50 μmol／L）0．5 μL，RNase Free dH2O 4．5 μL。反轉錄反應參數：37℃，15 min，85℃，5 s，4℃保存。反轉錄cDNA于－20℃凍存備用。

1．4．3．2 I?FABP mRNA相對表達量的測定

采用Real time PCR技術（SYBR Green染料法，TaKaRa公司試劑盒）。用β－肌動蛋白（β?actin）作為內參基因，引物序列信息見表3，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。采用25 μL Real time PCR反應體系：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（2×）12．5 μL，Forward primer （10 μmol／L）0．5 μL，Reverse primer 0．5 μL，RNase Free dH2O 9．5 μL，PCR反應液2．0 μL。反應程序：預變性95℃1 min，1個循環；PCR反應95℃，5 s，退火25 s（具體退火溫度見表3），共40個循環。熔解曲線用于確定擴增產物的特異性，反應程序為：65～95℃，每升高0．5℃分析1次，95℃結束，61個循環。

1．5 數據統計與分析

試驗結果以平均值±標準差表示，數據用Excel進行整理并用SAS 8．0軟件中的GLM程序進行方差分析，組間的多重比較采用Duncan氏法進行，P＜0．01為差異極顯著，P＜0．05為差異顯著，P＞0．05為差異不顯著。

表3　引物序列Table 3　Primer sequences

2　結 果

2．1 飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐生長性能的影響

由表4可知，飼糧脂肪水平極顯著影響冬毛期銀狐的ADFI（P＜0．01），ADFI隨著飼糧脂肪水平的升高而降低。ADG在B、C、D 3組間無顯著差異（P＞0．05），但這3組均極顯著高于A、E組（P＜0．01），其中E組最低，C組最高。料重比（F／G）以D組最低，顯著低于A、B、E組（P＜0．05）。

表4　飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐生長性能的影響Table 4　Effects of dietary fat level on growth performance of silver fox during winter fur?growing period

2．2 飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐體脂肪酸組成的影響

2．2．1 飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐肌間脂肪脂肪酸組成的影響

由表5可知，隨著飼糧脂肪水平的升高，銀狐肌間脂肪中C16∶1、C18∶1和單不飽和脂肪酸（MUFA）的比例呈降低趨勢；其中，A、B組肌間脂肪中C16∶1的比例極顯著高于D、E組（P＜0．01），A組肌間脂肪中C18∶1的比例顯著高于其他各組（P＜0．05），A、B組肌間脂肪中MUFA的比例顯著高于C、D、E組（P＜0．05）。A組銀狐肌間脂肪中C16∶0和飽和脂肪酸（SFA）的比例顯著低于其他各組（P＜0．05）。

2．2．2 飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐皮下脂肪脂肪酸組成的影響

由表6可知，飼糧脂肪水平顯著影響銀狐皮下脂肪中C16∶1的比例（P＜0．05），而對其他脂肪酸及SFA、MUFA和多不飽和脂肪酸（PUFA）的比例無顯著影響（P＞0．05）。

2．3 飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐空腸中I?FABP表達的影響

由圖1可知，E組銀狐的I?FABP mRNA相對表達量顯著高于A、B、C組（P＜0．05），與A組相比，E組銀狐的I?FABP mRNA相對表達量提高了2．07倍。

表5　飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐肌間脂肪脂肪酸組成的影響（占總脂肪酸的比例）Table 5　Effects of dietary fat level on fatty acid composition of intermuscular fat of silver fox during winter fur?growing period（proportion of total fatty acid）　%

3　討 論

3．1 飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐生長性能的影響

脂肪是高能飼料，飼糧中適量添加可提高能量濃度，有利于提高動物生長性能。前人研究表明，提高飼糧能量濃度可促進毛皮動物生長性能的發揮［7－8］。本試驗研究表明，過量添加油脂導致冬毛期銀狐ADFI、ADG下降，F／G增加。這與陳萍［9］在兔上的研究結果一致。動物都具有為能而食的天性，飼糧能量濃度過高勢必導致采食量下降。采食量的下降是導致生長減慢的關鍵因素［10］。本試驗結果顯示，冬毛期銀狐ADG隨飼糧脂肪水平的升高呈現先增高后降低的趨勢，而F／G則呈現相反的趨勢，說明適當提高飼糧脂肪水平有利于銀狐生長，提高飼料報酬，節約飼料成本。

表6　飼料脂肪水平對冬毛期銀狐皮下脂肪脂肪酸組成的影響（占總脂肪酸的比例）Table 6　Effects of dietary fat level on fatty acid composition of subcutaneous fat of silver fox during winter fur?growing period（proportion of total fatty acid）　%

圖1　飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐空腸中I?FABP mRNA相對表達量的影響Fig．1　Effects of dietary fat level on relative expression of I?FABP mRNA in jejunum of silver fox during winter fur?growing period

3．2 飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐體脂肪酸組成的影響

有關狐肌間脂肪脂肪酸組成的研究鮮有報道。在其他哺乳動物上的研究表明，飼糧脂肪水平影響肌間脂肪脂肪酸組成。徐海軍等［11］研究發現，隨飼糧能量水平的升高，育肥豬肌內SFA的比例下降。陳萍［9］研究表明，提高飼糧脂肪水平顯著降低肉兔背最長肌MUFA比例。本試驗結果顯示，銀狐肌間脂肪脂肪酸組成反映了飼糧脂肪酸組成，與飼糧相比，C16∶0比例略有升高，C18∶2比例下降，且隨脂肪水平的提高SFA比例增加而MUFA（如C18∶1）比例下降，說明高脂飲食促進肌間SFA的沉積。隨飼糧脂肪水平的升高，銀狐食入的脂肪酸增加，可能影響其機體脂肪酸的轉化和分配，導致肌間SFA沉積。與飼糧脂肪酸相比，肌間脂肪中C20∶4比例略有增加，而C18∶3比例減少。這是由于毛皮動物自身可將C18∶3轉化成C20∶4等長鏈PUFA［12］。

本試驗表明，銀狐皮下脂肪SFA、MUFA、PU?FA的比例不受飼糧脂肪水平變化的影響。這與Suarez?Belloch等［13］在豬上的研究結果一致。Zalewskil等［14］對貉脂肪組織脂肪酸組成進行研究發現，皮下脂肪中SFA、MUFA和PUFA的比例分別為34．54%、46．94%和10．22%。本試驗結果顯示，銀狐皮下脂肪中MUFA的比例相對較高，可能是由于不飽和脂肪酸（UFA）相對SFA在脂肪酸動員上是有利的，沉積于銀狐皮下的UFA更有利于氧化分解以供其能量的需求［15］。銀狐皮下脂肪中C18∶2和C18∶3的比例較飼糧中低，這與Rouvinen等［12］在藍狐上的研究結果一致。

3．3 飼糧脂肪水平對冬毛期銀狐空腸中I?FABP表達的影響

脂肪的吸收主要發生在小腸的前2／3處，中短鏈脂肪酸可通過被動擴散穿過細胞膜，而長鏈脂肪酸需要借助某些蛋白質完成跨膜轉運［16］。I?FABP是一種與長鏈脂肪酸高度親和的蛋白，能夠增加長鏈脂肪酸的水溶性，因此對脂肪酸的吸收以及向細胞內的轉運具有重要作用［17－19］。本試驗結果顯示，銀狐空腸中I?FABP mRNA相對表達量隨飼糧脂肪水平的升高而升高。本試驗采用飼糧其脂肪酸組成以長鏈脂肪酸為主，大量的長鏈脂肪酸進入小腸促進了I?FABP的表達。銀狐可能通過增加I?FABP的表達促進脂肪的利用，進而減小高脂飲食對機體造成的損傷。這是否是銀狐相對其他單胃動物能夠耐受較高脂肪的主要原因之一有待進一步研究。

4　結 論

本試驗條件下，當飼糧脂肪水平達到18．72%時，冬毛期銀狐表現出最佳的生長性能。飼糧脂肪水平影響冬毛期銀狐體脂肪酸組成且不同組織脂肪酸沉積規律有差異。隨飼糧脂肪水平的升高，銀狐肌間脂肪中SFA比例增加而MUFA比例下降，皮下脂肪中脂肪酸組成變化不大。此外，提高飼糧脂肪水平可促進冬毛期銀狐空腸中I?FABP的表達。

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Effects of Dietary Fat Level on Growth Performance，Body Fatty acid Composition and the Expression of Intestinal Fatty Acid Binding Protein in Jejunum of Silver Foxes during Winter Fur?Growing Period

ZHANG Ting ZHONG Wei LUO Jing ZHOU Ning HUANG Jian WANG Zhuo SUN Haoran FAN Yanyan LI Guangyu

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（責任編輯 菅景穎）

（State Key Laboratory of Special Economic Animal Molecular Biology，Institute of Special Animal and Plant Science，Chinese Academy of Agricultural Science，Changchun 130112，China）

Abstract：This experiment was conducted to study the effects of dietary fat level on growth performance，body fatty acid composition and the expression of intestinal fatty acid binding protein（I?FABP）in jejunum of silver foxes during winter fur?growing period．Fifty 145?day?old male silver foxes with a similar body weight were randomly divided into 5 groups with 10 replicates per group and 1 fox per replicate．Foxes in those 5 groups were fed the experimental diets contained 10%，12%，16%，20%，and 24%lipid mixture（soybean oil∶chicken oil＝1∶1），and measured value of total fat level of those diets was 12．85%（group A），14．71% （group B），18．72%（group C），22．23%（group D）and 26．11%（group E），respectively．The pre?test pe?riod lasted for 15 days and the trial period lasted for 75 days．The results showed as follows：1）the average daily feed intake（ADFI）was significantly affected by dietary fat level（P＜0．01），and the ADFI showed a decrease trend with the dietary fat level increasing；the average daily gain（ADG）in groups B，C and D was significantly higher than that in groups A and E（P＜0．01）；the feed／gain（F／G）in group D was significantly lower than that in groups A，B and E（P＜0．05）．2）With the dietary fat level increasing，the proportion of saturated fatty acids（SFA）of intermuscular fat was increased，and the proportion of monounsaturated fatty acids（MUFA）was decreased，while the proportion of polyunsaturated fatty acids（PUFA）had no significant change（P＞0．05）．3）Dietary fat level had no significant effects on the proportion of SFA，MUFA and PUFA of subcutaneous fat of silver foxes（P＞0．05）．4）The relative expression of I?FABP mRNA in jejunum was in?creased with the dietary fat level increasing，and it showed that group E was significantly higher than groups A，B and C（P＜0．05）．In conclusion，the silver foxes have the best growth performance when fed diets with 18．72%fat during winter fur?growing period；body fatty acid composition of silver foxes reflect the dietary fat?ty acid composition，the fatty acid composition of intermuscular fat is affected by dietary fat level，while the fatty acid composition of subcutaneous fat is stable；moreover，increasing dietary fat level can improve the ex?pression of I?FABP in jejunum of silver foxes during winter fur?growing period．［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（7）：2300?2308］

Key words：silver foxes；fat level；growth performance；fatty acid composition；intestinal fatty acid binding protein

Corresponding author?，professor，E?mail：tcslgy＠126．com

通信作者：?李光玉，研究員，博士生導師，E?mail：tcslgy＠126．com

作者簡介：張 婷（1988—），女，吉林長春人，碩士研究生，研究方向為野生動植物保護與利用。E?mail：zhangting542118＠163．com

基金項目：吉林省自然科學基金項目（20140101033JC）；吉林省特種經濟動物營養與生理研究創新團隊項目（20121810）

收稿日期：2015－01－19

doi：10．3969／j．issn．1006?267x．2015．07．038

文章編號：1006?267X（2015）07?2300?09

文獻標識碼：A

中圖分類號：S816