沙門氏菌檢測的不確定度研究

崔晗，劉玥婷，孫赟，柳媛，徐婕，趙航

（1.大連出入境檢驗檢疫局，遼寧大連116050；2.遼寧出入境檢驗檢疫局，遼寧大連116000）

沙門氏菌檢測的不確定度研究

崔晗1，劉玥婷1，孫赟2，柳媛1，徐婕1，趙航1

（1.大連出入境檢驗檢疫局，遼寧大連116050；2.遼寧出入境檢驗檢疫局，遼寧大連116000）

隨著我國實驗技術水平的不斷提高，對于菌類的檢測也達到了一定的高度。盡管如此，因為一些實驗因素的影響，無法保證實驗測量數據的精度，通過對于沙門氏菌的不確定度研究，可以分析出影響不確定度比較大的因素，對于我國實驗技術水平的提高具有重要意義。

沙門氏菌；不確定度；檢測方法

沙門氏菌是食物傳播病原菌中研究最活躍的細菌。沙門氏菌也稱豬霍亂沙門氏菌，有的沙門氏菌對人形成專門致病，有的沙門氏菌對動物形成致病，而沙門氏菌對人的病害主要是引起食物中毒。目前從食品中分離和鑒定沙門氏菌，通用的方法分5個步驟。首先，前增菌。使食物樣品在含有營養的非選擇性培養基中增菌，使受損傷的沙門氏菌細胞恢復到穩定的生理狀態。其次，選擇性增菌。在含選擇性抑制劑的促生長培養基中樣品進一步增菌的一個步驟。此培養基允許沙門氏菌持續增殖，同時阻止大多數其他細菌的增殖。再次，選擇性平板分離。這一步采用固體選擇性培養基，抑制非沙門氏菌的生長，提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識別。最后，生物化學篩選。排除大多數非沙門氏菌，也提供了沙門氏菌培養物菌屬的初步鑒定。血清學技術提供了培養物菌種的鑒定。

1 不確定度概述

1.1 研究不確定度的意義

不確定度意指測量誤差的存在，對于結果的準確性存在著不確定性程度，從另一個側面也能反映出實驗結果的真實度。不確定度越小，實驗結果越接近真實值[1]，質量就會越高，水平也就越高，其使用的價值也就會越高。對于不確定度的研究是學界對于誤差判斷的最新理解和闡述，是實驗性誤差研究的新思維。在研究不確定度時，也要準確分析誤差與不確定度的區別，統計學家與測量學家一直在尋找合適的術語正確表達測量結果的可靠性。譬如以前常用的偶然誤差，由于“偶然”二字表達不確切，已被隨機誤差所代替，近年來人們感到“誤差”二字的詞義較為模糊，如講“誤差是±1%”，使人感到含義不清晰。但是，若講“不確定度是±1%”則含義是明確的。因而用隨機不確定度和系統不確定度分別取代了隨機誤差和系統誤差。測量不確定度與測量誤差是完全不同的概念，它不是誤差，也不等于誤差。不確定度目前有2種表達方式，一是標準不確定度，二是擴展不確定度。標準的不確定度體現于測量值的分散性，一般根據分散程度得出標準的不確定度。

1.2 校準的不確定度

測量的不確定度是指在某一測量過程中，某一項的結果值與實際結果存在的誤差，而影響這一現象的因素有多種，包括主標準、被測標準、人員、方法和環境等多方面因素影響。不確定度與準確度不同，它只是實驗的測量結果，而準確度針對的是標準裝置或標準器。[2]在檢測試驗中，檢測試驗的技術狀況由周期鑒定保證，同時還要設定有效期限。在測量時一定要有統一試驗技術標準，測量過程中檢測、實驗的其他技術由控制實驗的規程規定，這也說明實驗過程管理規律性的重要性。在實驗室定期檢查過程中，分為幾大環境狀況，既檢測實驗、檢測實驗技術人員、檢測實驗環境、測量方法等。檢測實驗室的標準也與以上幾大狀況有關，要求每個環節都應按照實驗室的規程做到標準化，當發現實驗檢測異常時，應確定是否是實驗室檢測環節出現了問題，并及時找到原因，采取措施及時糾正。

實驗室校準的不確定度也要求所有的檢測標準校準及各類型的校準都應具有評定測量不確定程序。對于校準的不確定度，需要開展不確定度評估的領域有：對校準的檢測實驗室，必須每項參數都進行不確定度評價；對于儀器校準、儀器校正、儀器校驗、儀器計量實驗室，必須具備完整的不確定度評價程序，必須具有對所檢項目進行不確定度評估的能力[3]。

2 沙門氏菌的不確定度分析

2.1 不確定度的分析來源

①被測量數據及定義的不完整性，主要是實驗數據結果的不全面。②測量方法在實驗中不夠理想。測量方法對于實驗數據的結果影響很大，直接影響不確定度的值域大小。③取樣的代表性不夠。由于實驗本身帶有的一種不確定性，有時候取樣由于受現實環境的限制，并不能代表被測量的真實情況，同時一般實驗也只能通過實驗數據來對實驗結果進行分析，所以取樣的代表性往往對實驗結果造成影響，勢必影響實驗結果的不確定度。④測量過程受環境影響或實驗前未完善實驗環境，在實驗時測量結果受環境的影響是必然的，也是不可避免的。⑤測量儀器的分辨力及測量敏感度對不確定度的影響，儀器的好壞對結果產生直接的影響，這也是儀器使用的局限性。⑥測量標準或測量物質的不標準性。測量的標準是根據一定條件設定的，因為是人為設定的，必將影響實驗測量結果的確定度。⑦實驗的標準產生于對比，對于不確定度的研究，其不確定度分析來源離不開測量方法的近似假設。因此，實驗數據的可靠性與以上因素息息相關，對于實驗的結果把控離不開以上因素。同樣，對于沙門氏菌的不確定度研究也離不開對于以上數據的分析。

2.2 沙門氏菌的檢測原理及流程

沙門氏菌是需氧菌，具有較完善的呼吸酶系統，需分子氧做受氫體，只能在有氧條件下生長繁殖。厭氧菌缺乏完善的呼吸酶系統，受氫體為有機物，只能在無氧條件下生長繁殖：兼性厭氧菌具有完善的呼吸酶系統，在有氧或無氧環境中都能生長。

檢測流程1：測定樣品→取樣→稀釋樣品→培養基表面涂布→沙門氏菌個數→報告結果。

檢測流程2：樣品25g+225mL生理鹽水→10倍系列稀釋→選擇兩三個適宜稀釋度，各以0.1mL加入到MRS平板進行涂布→（36±1）℃培養→沙門氏菌總數→報告結果。

2.3 實驗設計及步驟

20個樣品選擇10-5、10-6、10-73個連續的稀釋度進行沙門氏菌總數檢測，同一個樣品每次平行檢測2次，最終采用合并樣品標準差來求檢測結果的不確定性。

具體步驟如下：①整個操作均在無菌環境下進行，先將蛋白胨、牛肉浸出粉、瓊脂、蒸餾水制成普通瓊脂培養基；②調節pH，0.1MPa，20min滅菌，趁熱加入其他成分，充分搖勻使溶解，制得平板后備用；③按上述過程，再取1mL無菌吸管，10倍遞增樣品勻液；④沙門氏菌總數計數，首先估計樣品的活菌總數，每個稀釋度吸取0.1mL樣品均勻液分別置于2個普通瓊脂培養基，然后使用L形線進行涂布，在（36±1）℃下進行培養，從稀釋到培養時間間隔必須在15min內，然后在平板上查出所有菌落。通過記錄稀釋倍數的所有菌落數量，以CFC/g表示。實驗取菌落數在30～300CFU的平板上進行查取，選擇的10-5、10-6、10-73個平板中的2個平板的平均數進行計量。在選擇平板時，要選擇比較均勻的平板，大片的菌落平板一般不作為實驗參考平板，有的平板只有1/2的菌落分布，而且比較均勻，可以查出菌落數并乘以2。

2.4 測量結果與分析

菌落數在30～300CFU時，按公式計算：N=∑C/（n1+0.1n2）d，∑C為平板菌落數，n1為第一稀釋度的平板個數，n2為第二稀釋度的平板個數。

沙門氏菌的不確定度來源，主要是培養條件，分為培養時間允差及培養適度的允差，沙門氏菌既是需氧菌也兼具厭氧菌。所以，在實驗結果上看到，在培養基上的分布大部分都是均勻的，大部分菌落的分布也很均勻，得出培養條件對不確定度影響不大。實驗要求在15min完成，且多次進行稀釋，從培養的菌落中可以看出稀釋對不確定度影響很大。通過以上實驗可以分析出可能影響沙門氏菌實驗不確定度的三大因素，一是實驗測量結果是否具有完成性，二是需了解實驗的設備、器材及人員操作水平等，三是改進測量方法及提高實驗檢測水平。同時，對不確定度展開細化研究，包括培養條件、樣品保存條件、重復性。從實驗結果來看，沙門氏菌經過重復測量，每次測量的結果相差較大，分散性也有明顯差異，對不確定度影響較大，而對于一些實驗儀器如天平、移液管、錐形瓶、菌落計數器，這些器材對于不確定度的影響可以忽略不計。

從實驗數據來看，檢測方法可以影響到計量學及統計學上的有效計算；合理的不確定度評定，可以根據對方法及特性的理解和測量范圍，并結合經驗進行確認；對于實驗測量的結果具有影響的因素，應對其進行充分的分析，保證其對實驗測量的不確定因素在經驗值范圍內。從檢測結果還可以發現，用貝塞爾公式直接計算標準差，會因為數據的分散導致標準差值較大，所以可以先對分散值取對數，再對其結果進行比較分析。

3 結論

隨著生物實驗技術的發展，沙門氏菌的檢測和鑒定技術也在不斷的完善。而對于沙門氏菌的不確定度研究，對于人類在生物制藥及其他領域都有重要意義，也是未來實驗原因分析的新思路。通過實驗對沙門氏菌的不確定度進行研究，同樣可以看到沙門氏菌研究存在的問題，對于解決沙門氏菌實驗中的難題具有非常好的效果。

[1]陳玲,張菊梅,楊小鵑,等.南方食品中沙門氏菌污染調查及分型[J].微生物學報,2013,53(12):1326-1333.

[2]楊保偉,曲東,申進玲,等.陜西食源性沙門氏菌耐藥及相關基因[J].微生物學報,2010,50(6):788-796.

[3]黃福標,盧冰霞,劉磊,等.屠宰豬腸道沙門氏菌的分離鑒定、耐藥性分析及致病性試驗[J].中國畜牧獸醫,2012,39(1):172-177.

Study on the Uncertainty of Salmonella

Cui Han1,Liu Yue-ting1,Sun Yun2,Liu Yuan1,Xu Jie1,Zhao Hang1
(1.Dalian Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Liaoning Dalian 116050;2.Liaoning Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau,Liaoning Dalian 116000)

With the level of experimental technology of our country continues to improve,the fungus research has reached a certain height.In spite of this,because of some experimental factors,the complete accuracy of the experimental measurement data can not be guaranteed,through the research on the uncertainty of Salmonella,it is important to analyze the factors that affect the degree of uncertainty,which is important to improve the level of experimental technology in our country.This paper is based on the uncertainty of the entrance of Salmonella,Salmonella and briefly describes the relevant concepts of uncertainty,the uncertainty of Salmonella research experiment.Based on this,in view of the uncertainty of the Salmonella,a brief description of the relevant concepts of Salmonella and its uncertainty and its experimental results were described.

Salmonella;Uncertainty;Detection method

R516.3

A

2096-0387（2016）06-0055-03

崔晗（1980-），女，內蒙古人，碩士，工程師，研究方向：食品分析。