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蟲害誘導果實揮發物對蠅蛹金小蜂趨性行為的影響及其成分初步鑒定

2016-09-14 01:19趙海燕梁廣文陸永躍
植物保護 2016年4期
關鍵詞:寄生蜂番石榴實蠅

趙海燕, 梁廣文, 陸永躍*

(1. 海南省農業科學院植物保護研究所/海南省植物病蟲害防控重點實驗室,??凇?71100; 2. 華南農業大學昆蟲學系, 廣州 510642)

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蟲害誘導果實揮發物對蠅蛹金小蜂趨性行為的影響及其成分初步鑒定

趙海燕1,梁廣文2,陸永躍2*

(1. 海南省農業科學院植物保護研究所/海南省植物病蟲害防控重點實驗室,???71100; 2. 華南農業大學昆蟲學系, 廣州510642)

為了解果實揮發物在蠅蛹金小蜂尋找寄主過程中的作用,本文采用“Y”形嗅覺儀測試了健康果實及蟲害誘導果實揮發物對蠅蛹金小蜂的引誘趨性。測定結果表明,蟲傷1 d的番石榴和陽桃果實揮發物對蠅蛹金小蜂雌蜂具有顯著的引誘作用。進而選取了蟲傷1 d的番石榴和陽桃果實,利用固相微萃取法對其揮發物進行了收集,并用GC-MS 對收集到的揮發物進行了初步鑒定。鑒定結果表明,蟲傷1 d的番石榴果實揮發物中共檢測到8種化合物,多是萜烯類化合物,其中反式-石竹烯的相對含量最高,其次是二十二烷醇;蟲傷1 d的陽桃果實揮發物成分中共鑒定出16種物質,主要為烷烴類、萜烯類、酯類及酮類,其中α-紫羅蘭酮含量最高,其次為11-硬酯炔酸甲酯。

蟲害誘導;果實揮發物;蠅蛹金小蜂

蠅蛹金小蜂[Pachycrepoideusvindemmiae(Rondani)]屬于小蜂總科(Chalcidoidea),金小蜂科(Pteromalidae),金小蜂亞科(Pteromalinae),是一種能夠寄生環裂亞目多種蠅類蛹的抑生型(idiobiont)寄生蜂。它廣泛分布于世界60多個國家和地區,如美國、巴西、澳大利亞、丹麥、哥倫比亞和中國等[1-2],是雙翅目中許多害蟲的天敵[2-3]。蠅蛹金小蜂過去常用于家畜和鳥類飼養過程中所招致蠅類的生物防治,主要作為家蠅(MuscadomesticaL.)和廄螫蠅(StomoxyscalcitransL.)的控制措施被利用[4-5]。美國夏威夷和南美諸國引進該蜂對地中海實蠅[Ceratitiscapitata(Wiedemann)]、南美按實蠅[Anastrephafraterculus(Wiedemann)]、墨西哥按實蠅[A.ludens(L?w)]和西印度按實蠅[A.obliqua(Macquart)]等蠅類進行控制[6]。近年來,在哥斯達黎加、美國、澳大利亞、丹麥和哥倫比亞等地大規模的繁殖釋放控制實蠅類害蟲,其寄生率達到了40%[6-7]。在我國,主要以橘小實蠅[Bactroceradorsalis(Hendel)]和家蠅為寄主開展了一些蠅蛹金小蜂生物學特性方面的研究[8-12]。關于寄主揮發物對蠅蛹金小蜂嗅覺行為的影響尚未見報道。

植物釋放揮發性信息化合物和部分非揮發性信息化合物對昆蟲的行為起著重要的調控作用。揮發性信息化合物主要分為兩類:自然狀態下植物釋放的揮發性物質和蟲害誘導的植物揮發物。寄主植物揮發物在天敵昆蟲搜索和定位寄主的過程中起著重要作用[13-14],而植食性昆蟲誘導的植物揮發物可作為互益素吸引天敵昆蟲對害蟲的搜尋和定位[15]。在植物-害蟲-天敵體系中,昆蟲取食誘導植物產生對天敵具有引誘作用的化學物質[16],這一現象普遍存在。目前這一領域研究多關注于植食性昆蟲取食植物葉片后產生的揮發物對天敵的影響,而取食植物果實后產生的揮發物對天敵的影響報道較少。因而,本文以芒果(MangiferaindicaLinn.)、陽桃(AverrhoacarambolaLinn.)和番石榴(PsidiumguajavaLinn.)果實為試材,研究了3種果實不同處理揮發物對寄生蜂選擇行為的影響,同時選取了對寄生蜂引誘力最強的處理,對其揮發物進行了收集和鑒定,以期明確蠅蛹金小蜂在棲境選擇和尋找寄主過程中利用植物揮發物的來源及其作用。

1 材料與方法

1.1供試材料

供試蠅蛹金小蜂為華南農業大學生態學實驗室內飼養的種群。寄生蜂的飼養:羽化后的寄生蜂置于養蟲籠內(25 cm×25 cm×30 cm),每籠密度為100~150對雌雄蜂,然后將含有200頭左右橘小實蠅蛹的培養皿(直徑9 cm,蛹均勻地平鋪在培養皿底部)置于籠內,24 h后將蛹移出?;\內提供清水和15%的蜂蜜水作為寄生蜂成蟲食物。將移出的橘小實蠅蛹放入底部含有少量濕潤細沙的一次性杯子中(250 mL),蛹的上面覆蓋3~5 cm的濕潤細沙,用濾布(120目)封口,置于養蟲室內,待蜂羽化。將初羽化的寄生蜂成對放入指形管內,備用。

供試橘小實蠅采自廣州市陽桃園,將帶有實蠅幼蟲的果實帶回實驗室,讓其在沙內化蛹,獲得實蠅蛹。

供試植物果實為番石榴(‘芭樂’品種)、陽桃(‘臺灣蜜絲’品種)和芒果(‘小臺芒’品種)。

寄主飼養、寄生蜂繁殖及其試驗均在溫度(26±1)℃,濕度(RH)65%±5%,光周期L∥D=14 h∥10 h的室內進行。

1.2試驗設計及處理

試驗共設9個處理,即:①健康完好的果實vs空白對照;②機械損傷的果實vs空白對照;③蟲傷1 d果實vs空白對照;④蟲傷4 d果實vs空白對照;⑤蟲傷8 d果實vs空白對照;⑥健康完好的果實vs蟲傷1 d果實;⑦健康完好的果實vs蟲傷4 d果實;⑧健康完好的果實vs蟲傷8 d果實??瞻讓φ罩肝对雌績葲]有放任何物質。機械損傷果實的獲得:用鑷子在完好無損健康的果實表面扎孔;蟲傷果實的獲得:取完好無損健康的果實,將每個果實接入約10粒橘小實蠅卵,分別于第1天,第4天和第8天用于試驗。試驗中各處理的英文及簡寫如表1所示。

1.3嗅覺行為測定方法

采用“Y”形嗅覺儀測定蠅蛹金小蜂對不同處理果實揮發物的反應,以自制的玻璃瓶(250 mL帶磨砂口的容量瓶)作味源瓶,內盛不同處理的果實。嗅覺儀的兩臂及直管臂均長10.0 cm,內徑1.5 cm,兩臂夾角75°,為了避免由于周圍光強不均勻影響寄生蜂的趨性行為,把嗅覺儀放于由金屬絲制成的正方形盒子內,正方形盒子四周用蠟紙 (30 cm×30 cm×30 cm)遮蓋,在盒子的正上方放一個40W白熾燈以使兩測試臂的光強一致?!癥”形嗅覺儀兩臂分別通過硅膠管與味源瓶相連。在氣流進入味源瓶之前,先經過活性炭和蒸餾水瓶過濾,以凈化空氣和增加空氣濕度。氣泵連接在“Y”形嗅覺儀主臂上,抽氣速度400 mL/min,側臂的氣流量通過氣體流量計控制在200 mL/min。生測時,通過小的指形管,將寄生蜂雌蜂逐頭引入嗅覺儀的直管內,然后觀察記載3 min內寄生蜂的行為反應。選擇標準如下:當某蜂爬至出口處或超過某臂1/2處并持續1 min以上者,記該蜂對該臂的氣味源作出選擇。如蜂引入后5 min,仍不做出選擇,則結束對該蜂的行為觀察。每測定5頭,調換嗅覺儀方位一次,用以消除幾何位置對寄生蜂行為可能產生的影響。每測定10頭,用95%乙醇清洗嗅覺儀并用吹風機吹干、冷卻。每個處理共測60頭蜂。當更換處理時,用超聲波清洗裝置,并用95%乙醇清洗、用烘箱烘干。試驗于每日的09:00-16:00在(26±1)℃的室內進行。

表1 果實處理的英文及其簡寫

1.4揮發物收集與鑒定

采用固相微萃取法對果實揮發物進行采集。取蟲傷1 d的番石榴和陽桃果實,將其放入廣口瓶中,錫箔紙和封口膜封口,使瓶內充滿氣體。固相微萃取頭為85 μm Polyacrlate (美國SUPELCO公司),使用前在氣相色譜(Agilent 7890A)中,將萃取針頭插入氣相色譜儀的進樣口進行老化,老化溫度為250℃,載氣流量為0.8 mL/min,分流比 50∶1,老化時間為2 h。老化結束后將固相微萃取頭(PA型白色平頭,85 μm)穿透封口膜(鋁箔)插入瓶內,距離蛹約1~2 cm,固定微萃取手柄,然后小心地推出萃取頭。吸附完成后立即進行氣相色譜-質譜聯用儀(美國Finnigan TRACE)進樣分析。

GC- MS 分析條件:樣品解析時間1 min,氦氣做載氣,流速1.0 mL/min。無分流進樣,分流閥1 min后打開。氣相色譜進樣口溫度280℃,SPME纖維頭在進樣器中停留3 min,進行樣品熱脫附。采用DB-5MS色譜柱(長30 mm, 膜厚0.25 μm);升溫程序:柱溫60℃保持5 min,以 5℃/min速率升到100℃,然后以10℃/min速率升到250℃,保持2 min; 進樣口溫度280℃,載氣為氦氣(1 mL/min);傳輸線溫度250℃; 電離源為EI源(70 eV, 230℃); 四級桿溫度為150℃,掃描質量范圍:30~550 amu。

揮發性物質的鑒定:樣品成分分析根據GC- MS分析得到的總離子流圖中的各峰經質譜掃描后得到質譜圖,通過質譜計算機譜庫檢索(Willey庫和NIST98庫)初步確定化合物,忽略未檢出物質的峰面積。并與文獻比較,通過比對標準樣品的質譜圖、保留時間、考馬斯指數等方法對揮發物進行鑒定,扣除空氣本底后采用面積歸一法計算樣品中不同物質的相對含量,并根據成分的峰面積值相對定量分析。

2 結果與分析

2.13種水果不同處理揮發物在蠅蛹金小蜂寄主搜索中的作用

蠅蛹金小蜂雌蜂對番石榴不同處理揮發物的嗅覺反應結果如圖1所示。健康完好的番石榴和蟲傷1 d的番石榴果實揮發物對蠅蛹金小蜂雌蜂的嗅覺行為與對照相比,其差異均達到了顯著水平(P<0.05)。這表明,健康完好的番石榴和蟲傷1 d的番石榴果實釋放的揮發物對蠅蛹金小蜂雌蜂有顯著的引誘作用,其余番石榴果實處理的揮發物對蠅蛹金小蜂雌蜂的選擇行為沒有顯著影響。

蠅蛹金小蜂對芒果果實不同處理揮發物的趨向反應如圖2所示。結果表明,芒果果實處理揮發物對蠅蛹金小蜂的定向選擇均沒有顯著影響。

圖1 蠅蛹金小蜂雌蜂對不同處理番石榴果實揮發物的行為反應Fig.1 Responses of female Pachycrepoideus vindemmiae to volatiles from guava fruits under different treatments

圖2 蠅蛹金小蜂雌蜂對不同處理芒果果實揮發物的行為反應Fig.2 Responses of female Pachycrepoideus vindemmiae to volatiles from mango fruits under different treatments

蠅蛹金小蜂對陽桃果實不同處理揮發物的趨向反應如圖3所示。蟲傷1 d的陽桃果實釋放的揮發物能顯著引起蠅蛹金小蜂雌蜂的定向選擇,蠅蛹金小蜂雌蜂對蟲傷1 d的陽桃果實和空白對照的選擇率分別為63.16%和46.84%。健康完好的陽桃果實、機械損傷的陽桃果實、蟲傷4 d和8 d的陽桃果實揮發物對蠅蛹金小蜂雌蜂的定向選擇沒有顯著影響。上述結果表明,蟲傷1 d的陽桃果實釋放的揮發物對蠅蛹金小蜂的嗅覺定向反應具有顯著活性。

圖3 蠅蛹金小蜂雌蜂對不同處理陽桃果實揮發物的行為反應Fig.3 Responses of female Pachycrepoideus vindemmiae to volatiles from carambola fruits under different treatments

2.2蟲傷1 d番石榴和陽桃揮發性成分分析

用SPME-GC-MS 法分析了蟲傷1 d番石榴和陽桃的揮發性成分。結果表明,蟲傷1 d番石榴果實共檢測到8種化合物(表2),大多是萜烯類化合物,其中反式-石竹烯的相對含量最高,為53.61%,其次是二十二烷醇相對含量為21.19%,順-去氫白菖烯相對含量最低,為1.14%。收集橘小實蠅蟲傷1 d的陽桃果實的揮發物,共檢測到16種化合物(表2),主要為烷類5種、萜烯類6種、酯類4種及酮類1種質,其相對含量分別為8.17%、16.89%、22.9%和25.71%,其中α-紫羅蘭酮含量最高,其次為11-硬酯炔酸甲酯。

表2 蟲傷1 d的番石榴果實主要揮發性化學物質的GC-MS結果

表3 蟲傷1 d的陽桃果實主要揮發性化學物質的GC-MS結果

3 小結與討論

在植物-害蟲-天敵三級系統中,通過長期的協同進化,彼此之間可通過一些特異性的信息化合物建立聯系,從而相互影響,相互制約。寄生性和捕食性天敵在寄主搜索定位過程所利用的信息化合物可以來自寄主本身、寄主的食料、兩者的互作以及與寄主關聯生物等。植物的揮發性次生化合物在寄主定向過程中起著重要的作用[17]。植物釋放的信息化合物可作為互益素對害蟲的天敵具有引誘作用已有較多報道,如李帥等[18]報道了水稻揮發物對稻虱紅螯蜂雌蜂有顯著的引誘作用;刺桐姬小蜂雌成蟲對刺桐揮發物有顯著的趨性反應[19]。目前多數研究集中在寄主植物不同處理,寄主本身釋放的揮發物對害蟲、捕食性天敵和寄生性天敵寄主定向的影響,而寄主果實對寄生蜂的選擇趨向的影響尚未見報道。本文研究表明,健康番石榴果實揮發物在蠅蛹金小蜂搜索定位寄主的過程中表現出顯著的引誘活性。

植食性昆蟲取食寄主植物后能誘導植物產生更多揮發性物質或特異性的揮發性物質,這為寄生蜂遠距離檢測寄主提供了線索,該揮發物的量一般較大,但準確性較低,不如植食性昆蟲所產生的揮發物可靠。植食性昆蟲誘導被害植物產生揮發性次生物質和昆蟲本身釋放的一些揮發物,為天敵搜尋定位寄主提供了有力的保障。已有的試驗結果表明,昆蟲取食為害后誘導寄主植物產生的揮發物對寄生蜂有明顯的引誘作用。稻虱紅螯蜂雌蜂對白背飛虱危害后的水稻有顯著的趨性[18]。多異瓢蟲對瓜蚜為害后植物揮發物也有顯著的作用[21];Wen等[22]的研究表明,被棉鈴蟲為害的煙草對中紅側溝繭蜂[Microplitismediator(Haliday)]雌蜂的引誘力顯著高于未受害煙草。許寧[23]發現被茶尺蠖(EctropisobliqueProut)取食后的茶樹新梢釋放2種芳樟醇氫化物(呋喃型和吡喃型),這使得其比完整新梢更能有效地吸引茶尺蠖幼蟲寄生蜂單白綿絨繭蜂(Apantelessp.)。本文選取了橘小實蠅為害較嚴重的3種水果:番石榴、芒果和陽桃,測定了不同處理條件下的揮發物對蠅蛹金小蜂寄生搜索定位反應的影響,結果表明,蟲傷1 d的番石榴果實和蟲傷1 d的陽桃果實釋放的揮發物對該蜂有顯著的引誘作用。機械損傷的陽桃果實、蟲傷4 d和8 d的陽桃和番石榴果實及芒果果實的所有處理的揮發物對蠅蛹金小蜂的嗅覺定向反應均沒有顯著的影響。揮發物在橘小實蠅搜尋、識別并確定寄主的過程中起著重要作用。有報道腐爛果實上的果生鏈核盤菌(美澳型核果褐腐菌)[Moniliniafructicola(G.Winter)Honey]產生的乙醇和乙醛對實蠅繭蜂具有明顯的引誘作用[20]。而本試驗表明,腐爛(即,蟲傷8 d的果實)的番石榴、芒果和陽桃果實產生的物質對蠅蛹金小蜂均沒有顯著的引誘作用。蠅蛹金小蜂對芒果果實各處理均沒有明顯的趨向性,可能由于所采取的實驗裝置空間太小,選取的果實較大,果實釋放的揮發物質的量較大造成的;也可能由于芒果不能釋放對蠅蛹金小蜂趨向性有顯著影響的物質,具體原因有待進一步分析。本試驗所用果實均為離體果實,與自然界中果樹上生長的果實相比,揮發物釋放的規律,釋放量及某一時間段釋放的種類可能存在差異,從而導致蠅蛹金小蜂對不同果實的趨向性與本試驗結果存在差異。

植物在自然狀態下會釋放揮發性次生化合物,一般認為這些物質分子量在100~250之間,主要包括烴、醛、醇、酯、酮、有機酸和萜烯類化合物[24-25]。揮發性物質一般分為兩類:一類是一般性氣味組分,通常指含有6個碳原子的直鏈醛、酯和醇類化合物、萜類和不飽和脂肪酸化合物等;另一類為特異性氣體組分,主要指蟲害誘導的植物揮發物,其主要成分可分為4類:萜類化合物、綠葉性氣味、含氮化合物和除綠葉性氣味以外的醛、醇、酮、酯及一些呋喃衍生物[26]。本文采用頂空固相微萃取(HS-SPME)技術結合氣相-質譜法(GC -MS)對蟲傷1 d番石榴和陽桃果實的揮發性成分進行了分析,分別鑒定出8種和16種揮發性化合物,前者主要成分為萜烯類和酮類;后者主要成分為烷類、萜烯類、酯類及酮類。蟲傷陽桃和番石榴果實都釋放萜烯類化合物,這類物質可能對寄生蜂的嗅覺定位產生了影響,也有可能是其他特異性物質種類,具體哪種成分對寄生蜂具有引誘活性,還有待進一步研究。

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(責任編輯:田喆)

Attraction of Pachycrepoideus vindemmiae by herbivore-induced fruit volatiles to and extraction and GC-MS identification of the active components

Zhao Haiyan1,Liang Guangwen2,Lu Yongyue2

(1. Hainan Academy of Agricultural Sciences, Institute of Plant Protection; Hainan Key Laboratory for Control of Plant Diseases and Insect Pests, Haikou571100, China; 2. Department of Entomology, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

In order to understand the roles of fruit volatiles and herbivore-induced fruit volatiles in host searching ofPachycrepoideusvindemmiae(Rondani), the orientation responses ofP.vindemmiaeto the volatiles under different treatments were studied with a “Y”-tube olfactometer. The female adults ofP.vindemmiaewere significantly attracted by the volatiles from guava fruits damaged by larvae for one day (DG-1d) and carambola fruits damaged by larvae for one day (DC-1d). Then, the chemical constituents from the DG-1d and DC-1d were analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) with headspace solid-phase microextraction (SPME). The results showed that eight compounds were obtained and the main compounds were terpenes and sesquiterpenes from the volatiles emitted from LDGF-1D. The relative content of trans-caryophyllene was the highest, followed by 1-docosanol from DG-1d volatiles. In addition, sixteen compounds were identified from the volatiles emitted from DC-1d, including alkanes, terpenes, esters and ketone. The relative content of α-lonone was the highest, followed by 11-octadecynoic acid methyl ester.

herbivore-induction;fruit volatile;Pachycrepoideusvindemmiae

2015-06-27

2015-09-30

海南省自然科學基金(20153065);海南省農業科學院農業科技創新專項經費(CXZX201419)

E-mail: luyongyue@scau.edu.cn

S 476.3

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.04.012

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