免疫熒光法檢測陰道加德納菌的方法學評價

丁亞利，梁晶晶，薛新娜，盧麗娟，曹　婷，莫紹伶

(廣東省東莞市中醫院檢驗科　523000)

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免疫熒光法檢測陰道加德納菌的方法學評價

丁亞利，梁晶晶，薛新娜，盧麗娟，曹婷，莫紹伶

(廣東省東莞市中醫院檢驗科523000)

目的探討運用免疫熒光法檢測陰道加德納菌(GV)的臨床應用價值。方法選取2015年4～12月進行細菌性陰道炎檢測的2 612例患者作為研究對象，每例患者取雙份陰道分泌物標本，分為兩組，觀察組采用免疫熒光法進行檢測，對照組采用分離培養法進行檢測，分析免疫熒光法檢測GV的敏感度、特異度、準確度以及陽性檢出率。結果免疫熒光法檢測GV的敏感度為94.31%，特異度為90.75%，準確度為91.20%；分離培養法陽性檢出率為34.99%，免疫熒光法陽性檢出率為39.01%，兩者比較，差異有統計學意義(P<0.05)。 結論免疫熒光法檢測GV具有靈敏度高、特異性強、陽性檢出率高、診斷時間短的優點，適用于臨床檢測。

陰道加德納菌；免疫熒光法；分離培養法

細菌性陰道病(BV)是育齡婦女最常見的陰道感染性疾病，其發病率約18%[1]。Marrs等[2]研究發現，陰道加德納菌(GV)是引起BV的主要病原體之一。GV感染不僅引起陰道炎、尿道炎，還引起早產、低體質量兒、絨毛膜炎、羊水感染、子宮內膜炎、急性輸卵管炎、手術后感染[3]和男性不育[4]，GV感染還可以通過性活動傳播，被稱為第三代傳染病[5]。GV感染產生的不良后果，已嚴重危害婦女健康，影響家庭和諧，成為嚴重的社會問題。目前GV感染的常規檢測方法有革蘭染色找線索細胞法、分離培養法。因線索細胞的識別受顯微鏡的質量、標本的采集以及操作者的經驗等諸多因素影響，主觀性強，因此革蘭染色法準確率并不高；分離培養法雖作為GV感染檢測的金標準，但GV生長緩慢，24～48 h后見針尖大小菌落，耗時長，目前在臨床較少用；因此有必要對GV感染做出快速、準確、有效的診斷。本研究中采用免疫熒光法與分離培養法進行比較，確定免疫熒光法檢測GV的敏感度、特異度等臨床技術指標，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取本院2015年4～12月在本院進行細菌性陰道炎檢測的2 612例患者作為研究對象。年齡16～71歲，平均(31.5±5.3)歲。用無菌棉拭子取女性陰道后穹隆分泌物兩份，一份采用免疫熒光法檢測，另一份采用分離培養檢測。

1.2儀器與試劑熒光顯微鏡(德國萊卡儀器有限公司)，水浴箱(常州中捷試驗儀器制造有限公司)，GV選擇性平板(江門凱林)，馬尿酸鹽試劑(廣東環凱生物科技有限公司)，茚三酮試劑(廣東環凱生物科技有限公司)，GV免疫熒光法檢測試劑盒(深圳市邁科龍生物技術有限公司，批號20150321)。

1.3方法

1.3.1對照組采用分離培養法將采集的標本直接涂抹接種于GV選擇培養基上，置CO2培養箱培養24～48 h后觀察結果，挑取可疑菌落做革蘭染色及生化鑒定，挑取一接種環實驗菌加入1 mL馬尿酸試劑中，37 ℃ 2 h，滴入5滴茚三酮試劑，10 min內觀察顏色變化，變成藍色為陽性；結合涂片鏡檢找到革蘭小棒狀桿菌，臨床即可報告檢出GV[6-7]。

1.3.2觀察組采用免疫熒光法將標本輕緩涂抹在載玻片上，充分晾干，加50 μL無水乙醇固定10 min，自然晾干，使用移液器及一次性吸嘴汲取5 μLGV免疫熒光試劑，均勻滴加在玻片涂樣處，置于37 ℃水浴箱孵育30 min，用去離子水或蒸餾水緩緩沖洗玻片多次，每次5～10 s，再將玻片自然晾干。用合適的熒光顯微鏡進行閱片，在100×物鏡下尋找發蘋果綠色熒光的典型細桿形GV。發現10個及以上蘋果綠色典型細桿形GV即為陽性。發現完整暗紅色上皮細胞，且未發現可定義為陽性的典型特異性染色即為陰性[8]。

1.4統計學處理所有數據采用SPSS16.0軟件進行分析，計數資料采用率表示，兩組間的比較采用χ2檢驗。計算免疫熒光法檢測GV的敏感度、特異度、準確度和陽性檢出率。P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　　果

2.1兩種方法的檢測結果見表1。免疫熒光法陽性1 019例，假陽性157例；免疫熒光法陰性1 593例，假陰性52例。兩種方法學間差異有統計學意義(P<0.05)。

表1　　兩種方法檢測結果對比(n)

2.2免疫熒光法診斷效能本研究中，免疫熒光法診斷敏感度94.31%(862/914)，特異度90.75%(1 541/1 698)，準確度91.20%(2 403/2 612)，提示此方法具有較好的診斷效能。

2.3兩種方法檢測的陽性率免疫熒光法與分離培養法陽性檢出率分別為39.01%(1 019/2 612)和34.99%(914/2 612)，兩種方法檢測的陽性率差異有統計學意義(P<0.05)，說明免疫熒光法具有更高的陽性檢出率。

3　討　　論

GV是一類革蘭陰性或陽性的短桿菌、厭氧、嗜血、生長緩慢、培養困難、培養環境和設備要求較高，再加上臨床上不正規的應用抗生素，導致細菌的生長受到抑制，分離培養陽性檢出率較低。本次分離培養法陽性檢出率(34.99%)與免疫熒光法陽性檢出率(39.01%)比較，差異有統計學意義(P<0.05)。因此分離培養法臨床一般不采用，主要用于科研和新方法的方法學評價標準。

免疫熒光法是將不影響抗體活性的異硫氰酸熒光素(FITC)標記在GV單克隆抗體上，GV抗原與GV抗體特異性結合，形成抗原-抗體-熒光素結合物，此結合物在熒光顯微鏡495 nm波長激發光照射下發出蘋果綠色熒光，檢測特異的綠色熒光[9]，此標記技術增加了檢測的敏感度，檢測過程只需1 h，且受外界干擾少；而分離培養檢測過程耗時48～72 h，干擾因素較多。本研究選取國際確認的GV檢測金標準——分離培養法作為標準方法，對2 612例患者進行雙份標本平行試驗，研究結果顯示：免疫熒光法敏感度高94.31%、特異度強90.75%、準確度高91.20%。表明免疫熒光法檢測GV敏感度高、特異性強、檢測周期短，外界干擾少。此檢測技術的準確性、快速性和有效性等優點適合臨床診斷，具有極大推廣意義。

本研究中，采用免疫熒光法檢測GV與分離培養法對比，得到了較好的效果：免疫熒光法陽性1 019例，假陽性157例，免疫熒光法陰性1 593例，假陰性52例，陽性檢出率39.01%。Abdelaziz等[10]報道在BV感染患者中GV檢出率為87.45%，健康女性檢出率26.24%。國內黃偉忠等[11]報道680例受檢婦女中，免疫熒光法GV檢出率41.92%；本研究中免疫熒光法GV檢出率39.01%(1.019/2.612)，與該報道基本相符。

總之，本研究采用免疫熒光法和分離培養法對BV病原菌GV進行平行檢測，以分離培養法為標準，驗證了免疫熒光法檢測GV的高敏感度、高特異性強、高準確度，證明了免疫熒光法檢測GV的準確性、快速性和有效性。

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[3]Taylor-Robinson D,Boustouller YL.Damage to oviduct organ culture by Gardnerella vaginalis[J].Int J Exp Pathol,2011,92(4):260-265.

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[9]楊嵐，楊娟，孟西娜，等．免疫熒光法在陰道加德納菌檢測中的臨床應用[J]．南京醫科大學學報(自然科學版)，2012，8(8)：1168-1170．

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.056

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1673-4130(2016)16-2337-02

2016-02-28

2016-07-17)