濰坊地區自然流產的遺傳學病因研究

陶華娟，蔡緒英，路興軍，李　艷，孫立寧

(山東省濰坊市婦幼保健院遺傳科，山東 濰坊 261011)

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濰坊地區自然流產的遺傳學病因研究

陶華娟，蔡緒英，路興軍，李艷，孫立寧

(山東省濰坊市婦幼保健院遺傳科，山東 濰坊 261011)

目的探討濰坊地區自然流產的主要遺傳學因素。方法選取2011年8月至2014年8月在濰坊市婦幼保健院自愿接受檢查的812對自然流產夫婦及其清宮術后的812例流產胚胎進行染色體檢查，同時選取100對至少生育過1胎且生育史正常的夫婦作為對照組，分析流產胚胎染色體異常與雙親染色體、孕婦年齡、自然流產次數和孕周的關系。結果①自然流產胚胎組織812例，其中染色體異常397例，異常率為48.89%；②812對(1 624例)自然流產夫婦存在染色體異常者61例，異常率為3.76%；對照組100對(200例)夫婦存在染色體異常者2例，異常率為1.00%，兩者間比較差異有統計學意義(χ2=4.056，P<0.05)；③61對雙方之一存在染色體異常的夫婦，其流產胚胎存在染色體異常者45例(73.77%)，751對雙方染色體均正常的自然流產夫婦，其流產胚胎染色體異常352例(46.87%)，兩者間比較差異有統計學意義(χ2=16.337，P<0.05)；流產胚胎染色體異常與雙親染色體異常具有相關性(c=0.140，P<0.05)；④812例自然流產胚胎根據孕婦年齡、自然流產發生次數及流產發生的孕周不同分組，其異常率與孕婦年齡、流產發生孕周有關，經比較差異均有統計學意義(χ2值分別為19.044和8.827，P<0.05)。結論①胚胎染色體異常是導致濰坊地區自然流產發生的主要因素；②自然流產夫婦染色體異常率高于正常人群；③胚胎染色體異常與雙親染色體異常有相關性。

濰坊地區；自然流產；染色體異常；熒光原位雜交；核型分析

[Abstract]Objective To investigate the major genetic factors of spontaneous abortion in Weifang area. Methods From August 2011 to August 2014 in WeiFang Maternal and Child Health Hospital 812 couples and their spontaneous abortion tissues were collected for chromosome examination. At the same period 100 normal couples with at least one gravity were collected in control group. The relationship between chromosomal abnormality of spontaneous abortion tissues and their parents’ chromosome, maternal age, times of spontaneous abortion and gestational weeks was analyzed. Results The abnormal rate of chromosome of spontaneous abortion tissues was 48.89% (397/812). That of couples with spontaneous abortion and the controls was 3.76% (61/1624) and 1.00% (2/200), respectively, and the difference was significant (χ2=4.056,P<0.05). Of 61 couples with abnormal chromosome in one part, 45 embryos had abnormal chromosome (73.77%), while 352 (46.87%) abnormal embryos were found in 751 normal couples. The difference between them was significant (χ2=16.377,P<0.05). There was correlation between parents’ chromosomal abnormality and embryos’ chromosomal abnormality (c=0.140,P<0.05). The chromosomal abnormality rate of abortion embryo was correlated with maternal age and miscarriage week based on grouping according to maternal age, loss times and miscarriage weeks (χ2value was 19.044 and 8.827, respectively, bothP<0.05). Conclusion Embryo chromosomal abnormality is the main reason of spontaneous abortion in Weifang area, and it is correlated with parents’ chromosomal abnormality. Chromosome abnormality rate is higher in population suffering spontaneous abortion than in normal people.

[Key words]Weifang area；spontaneous abortion；chromosomal abnormality；fluorescence in situ hybridization (FISH)；karyotype analysis

自然流產是婦產科的一種常見病，胚胎著床后31%發生自然流產，其中80%為早期流產(妊娠在12周前終止者)[1]。導致自然流產的原因眾多，包括遺傳因素、解剖因素、內分泌因素、免疫因素、感染因素、血栓形成傾向、環境因素以及其他未知因素，但約50%及以上的自然流產與胚胎染色體異常有關[2]，包括數目異常和結構異常。

本研究對濰坊地區812對自然流產夫婦及其812例流產胚胎進行染色體檢查，同時選取100對至少生育過1胎且生育史正常的夫婦作為對照組，檢測濰坊地區自然流產胚胎和流產夫婦的染色體異常率，并分析流產胚胎染色體異常與雙親染色體、孕婦年齡、自然流產次數和孕周的關系，為自然流產夫婦提供生育指導，豐富遺傳咨詢臨床資料。

1資料與方法

1.1研究對象

選擇2011年8月至2014年8月在濰坊市婦幼保健院自愿接受染色體檢查的812對自然流產夫婦及其清宮術后的812例流產胚胎進行染色體檢查。孕婦年齡21～40歲，妊娠5～27+6周；同時要求滿足以下條件：①圍孕期夫婦雙方無明顯服藥史及有害物質接觸史；②排除與自然流產相關的男女雙方疾病，且表型及智力正常；③B超提示單胎，胚胎停止發育。同時選擇100對至少生育過1胎且生育史正常的夫婦作為對照組，同時滿足以上條件①和②。

1.2實驗方法

無菌條件下抽取每對自然流產夫婦外周靜脈血2mL，每瓶25滴接種于人體外周血淋巴細胞培養基內，經收獲、制片、顯帶后進行染色體核型分析。核型命名按照人類細胞遺傳學命名國際體制(ISCN2013)執行。

對患者行清宮術后，在無菌條件下，選取生長狀態良好的胚胎組織用無菌生理鹽水清洗2～3遍后剪碎，制成組織懸液，取其中0.3～0.5mL用于細胞培養，0.2mL用于熒光原位雜交(FISH)檢測。

1.3統計學方法

采用SPSS 16.0統計軟件進行分析，染色體結果等定性資料以率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1自然流產胚胎組織染色體檢測情況

2011年8月至2014年8月共收集自然流產胚胎組織812例，全部經FISH檢測成功，成功率為100%；細胞培養成功后行染色體核型分析476例，檢測成功率為58.62%。經兩種方法檢測共發現染色體正常者415例，異常者397例，異常率為48.89%。流產胚胎的染色體異常類型分類見表1。

2.2自然流產夫婦染色體核型檢測情況

在812對(1 624例)自然流產夫婦中，經染色體檢查發現存在染色體異常者61例(平衡易位29例，羅伯遜易位7例，倒位4例，性染色體異常17例，其他異常4例)，染色體異常率為3.76%；在200例正常對照組夫婦中發現染色體平衡易位2例，染色體異常率為1.00%，兩者間比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

2.3雙親染色體異常與胚胎染色體異常的關聯性情況

實際工作中，可以通過多種途徑完成會計核算工作，比如建立賬本，對各類支出收益進行統一記錄和整理；還可以通過填制和審核憑證、成本預估和計算、財產清點以及編寫會計報表等等，都是非常有效的方法。

在61對雙方之一存在染色體異常的自然流產夫婦中，其流產胚胎染色體異常率為73.77%；751對雙方染色體均正常的自然流產夫婦其流產胚胎染色體異常率為46.87%，兩者比較差異有統計學意義(P<0.05)；采用Pearsonχ2獨立性檢驗，結果表明，流產胚胎的染色體異常與雙親染色體異常之間存在相關性，見表3。

表1397例自然流產胚胎染色體異常結果分布

Table 1 Abnormal chromosome of 397 cases of spontaneous abortion

表21 624例自然流產夫婦與200例對照病例染色體比較的結果(n)

Table 2　Comparison of chromosome between 1 624 cases of spontaneous abortion and 200 cases of controls(n)

表3流產胚胎染色體異常與雙親染色體異常的關系

Table 3Correlation between miscarried embryos' chromosomal abnormality and parents’ chromosomal abnormality

雙親染色體結果 流產胚胎染色體結果 正常(n)異常(n)異常率(%)χ2PcP正常(751對)39935246.8716.3370.0000.1400.000異常(61對)164573.77合計(812對)41539748.89

2.4不同年齡組和不同流產次數及不同孕周流產胚胎染色體情況

對812例自然流產組織根據孕婦的年齡分組，<35歲者其流產胚胎染色體異常率為46.29%(337/728)，≥35歲者為71.43%(60/84)，兩者間比較差異有統計學意義(χ2=19.044，P<0.05)，見表4。

根據孕婦曾發生的自然流產次數分組，其中流產≤2次者677例，流產>2次者135例，流產胚胎的染色體異常率分別為49.63%(336/677)和45.18%(61/135)，兩兩比較差異無統計學意義(χ2=0.890，P>0.05)。

根據自然流產發生的孕周不同分組，早期流產(<12周)與晚期流產(≥12周)染色體異常率分別為50.54%和32.43%，兩者間比較差異有統計學意義(χ2=8.827，P<0.05)，見表5。

表4不同年齡組孕婦流產胚胎染色體異常率比較的結果[n(%)]

Table 4　Comparison of chromosomal abnormality rate between groups of different maternal age [n(%)]

表5不同時期流產胚胎的染色體異常率(n)

Table 5 Chromosomal abnormality rate of early and late abortion tissues(n)

3討論

染色體數目或結構的異常改變稱之為染色體畸變，是引起染色體病的原因。具有染色體異常的胚胎，除少數可存活但伴有先天性多發畸形外，大部分發生流產或死亡。

3.1自然流產夫婦及流產胚胎染色體異常結果的分析

2004年Stephenson等報道顯示50%～70%自然流產與胚胎染色體異常有關，染色體異常中約86%為數目異常，結構異常僅占6%，包括嵌合型在內的其他異常占8%。在導致自然流產的三體型中，16三體對人類胚胎發育的影響幾乎是致死性的，主要表現為妊娠流產，是早期自然流產中最常見的染色體異常類型，其次為22三體，迄今國外報道22三體患兒最長存活時間為3年[5]。

3.2自然流產胚胎染色體與雙親染色體相關性分析

夫婦任何一方的染色體易位或倒位、缺失等都可使下一代的遺傳物質發生改變，致使胎兒染色體為部分三體或缺失，發生流產、死胎。

染色體易位是引起自然流產的常見病因之一，包括平衡易位和羅伯遜易位。根據同源染色體相互配對、分離和交換的規律，平衡易位攜帶者可以形成18種類型的配子，僅1種正常，1種為平衡易位型，其余均為異常配子，分別與正常配子結合成合子時，多因染色體不平衡發生流產、死胎等。羅伯遜易位分非同源染色體和同源染色體之間的易位。同源羅伯遜易位攜帶者不能產生正常配子，只能形成三體型或單體型個體，除13三體和21三體可能出現異?；町a兒外，其他妊娠都會以自然流產告終。非同源染色體羅伯遜易位攜帶者與正常染色體配對時，可形成6種不同合子：1/6為正常個體，1/6與親代相同的易位染色體，其余4/6為異常染色體，這些異常染色體主要表現為自然流產。在具有自然流產史的夫婦中，約60%的易位是互換易位，40%是羅伯遜易位。女性平衡易位的發生率是男性的2倍多[6]。

染色體倒位分為臂間倒位和臂內倒位兩種，一般而言，其倒位片段越短則重復和缺失的部分越長，形成正常配子的可能性越小，患者在生育下一代中，導致自然流產、不孕、畸胎或死胎的比例可能越高。

本文研究結果提示流產胚胎的染色體異常與雙親染色體異常之間存在相關性。

3.3胚胎染色體異常與孕婦年齡關系的分析

多數染色體三體與孕婦的年齡有關，但是孕婦高齡對每一對染色體的影響卻未必一致，從細胞學、遺傳學的角度看，常染色體三體更容易受到母親來源細胞減數分裂的影響。目前孕婦年齡與Down氏綜合征的關系已被肯定，發病風險隨孕婦年齡增大而升高。Zimmermann等(1996年)研究報道，孕婦預產期年齡≥30歲，Down氏綜合癥發生率為2‰；預產期年齡≥35歲為6‰；預產期年齡≥40歲為15‰；預產期年齡≥45歲為5%。

然而，孕婦年齡對常染色體三體發生的影響機制還不清楚，可能與生殖細胞老化及合子早期所處的宮內環境有關。卵子老化，在以后的減數分裂過程中容易產生染色體不分離而導致染色體異常，所以高齡是引起流產胚胎染色體數目異常的一個重要原因[7]。

3.4流產次數與異常染色體核型關系的分析

復發性自然流產(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指不足20周孕齡的連續>2次的自然流產。在RSA已知病因中，遺傳學因素約占5%。RSA具有顯著的家族聚積性，具有RSA夫婦遺傳關聯的親屬發生流產的幾率明顯高于普通人群[8]。國內陳雪(2004年)有文獻報道，第1次流產染色體異常率更高，隨著流產次數的增加，染色體異常的頻率呈下降趨勢，與本研究一致，在本研究中有135例反復自然流產病例，其中染色體異常者61例，與<3次自然流產比較染色體異常率略低，但兩者間比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

[1]謝幸,茍文麗.婦產科學[M].北京:人民衛生出版社,2013:47.

[2]鄭雷,何曉春,李巍,等.FISH方法進行孕早期胚胎停育及自然流產的遺傳學因素分析[J].實用婦產科雜志,2013,29(11):863-865.

[3]Desjardins M K, Stephenson M D.“Information-rich” reproductive outcomes in carriers of a structural chromosome rearrangement ascertained on the basis of recurrent pregnancy loss[J]. Fertil Steril,2012,97(4):894-903.

[4]Goncalves R O, Santos W V, Sarno M,etal.Chromosomal abnormalities in couples with recurrent first trimester abortions[J].Rev Bras Ginecol Obstet,2014,36(3):113-117.

[5]Heinrich T, Nanda I, Rehn M,etal.Live-born trisomy 22:patient report and review [J].Mol Syndromol,2013,3(6):262-269.

[6]Ananthapur V, Avvari S, Cingeetham V,etal.A novel chromosomal translocation and heteromorphism in a female with recurrent pregnancy loss-a case study[J].J Assist Reprod Genet,2012,29(7):651-656.

[7]Kroon B, Harrison K, Martin N,etal.Miscarriage karyotype and its relationship with maternal body mass index, age, and mode of conception[J].Fertil Steril,2011,95(5):1827-1829.

[8]Miskovica S, Culica V, Konjevoda P,etal.Positive reproductive family history for spontaneous abortion: predictor for recurrent miscarriage in young couples[J].Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,2012,161(2):182-186.

[專業責任編輯：李春芳]

Genetic etiological analysis of spontaneous abortion in Weifang

TAO Hua-juan, CAI Xu-ying, LU Xing-jun, LI Yan, SUN Li-ning

(Department of Genetics, WeiFang Maternal and Child Health Hospital, Shandong Weifang 261011, China)

2014-12-15

陶華娟(1975-)，女，副主任醫師，碩士，主要從事產前診斷與遺傳咨詢工作。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.02.035

R714.21

A

1673-5293(2016)02-0249-03