酶聯免疫吸附法在水產養殖中的應用

史兆忠

[摘 要] 本文主要介紹了酶聯吸附法（ELISA）的原理，并闡述如何將該原理通過相應的技術運用到水產養殖的實際操作中去，其實際操作主要有將ELISA用于水產品安全監測、可致病的水產動物病原菌檢測等。

[關鍵詞] 酶聯免疫吸附法 水產養殖 實際應用辦法 生物科技

[中圖分類號] S942 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2016）04-0290-01

作為現代化的檢測技術，酶聯免疫吸附法即將酶復合物與抗原（或抗體）有效結合，通過顯色變化測定病原菌。由于抗原（抗體）在結合到固相載體表面后仍具免疫活性，抗體（抗原）與酶的結合物仍能保持二者的活性，結合物與相應抗原（抗體）反應后所結合的酶仍能催化底物生成有色物質其含量根據結合物顏色深淺易于測定，故而使得ELISA具有選擇性優良、高靈敏、數據客觀可靠、結果準確、實用性強的優點。

1 酶聯免疫吸附法

1.1 酶聯免疫吸附法的測定原理

酶聯免疫吸附法基本原理：根據抗原或抗體具有特異性功能，通常選取可溶性抗原或抗體結合到固相載體上，一般采用固苯乙烯作為固相載體，此過程保持抗原抗體具有免疫活性。在固相載體上使抗原或抗體與另外一種酶結合，成功結合的產物即具有酶的活性又具有抗原抗體的免疫性。測定時，將待測物于已經用酶標記好的抗原抗體反應，時間不需要很長，然后將固相載體上的結合物洗滌，主要是將待測物于酶抗原抗體結合的產物分離出來。然后加入酶催化，被酶催化生成有色產物，故而可根據顏色變化情況進行分析，由于酶的催化效率很高，因此酶聯免疫吸附法能夠達到很高的準確率。

1.2 酶聯免疫吸附法的方法及其操作

盡管至今酶聯免疫吸附法的檢測方法的分類仍沒有一個準確權威的定論，但是無論采用怎樣的形式進行檢測，均需要在試劑的幫助下完成，具體為酶反應的底物、免疫吸附劑、被酶標記過的抗體或抗原，其中免疫吸附劑主要是將抗原或抗體與固相載體結合的產物。在確定檢測試劑后，依據檢測樣本性狀差異，選擇不同的檢測方式進行，目前該種檢測技術現存方式較多，其中以下幾點最為常見：其一，雙抗體夾心法。結合特異性抗體與固相載體，形成固相抗體：洗滌未結合抗體及雜質，用BSA進行封閉。洗滌除去多余的BSA，加受檢標本，與固相抗體接觸反應，形成固相抗原復合物，而后洗滌除多余雜質。最后加酶標抗體，使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合并徹底洗滌未結合的酶標抗體并根據顏色深淺進行定量測量；其二，雙位點一步法。該種檢測方法針對抗原檢測，依據抗原分子的決定簇不同，分別對其單克隆抗體進行標記，形成霉變抗體與固相抗體，將兩種抗體同步檢測，通過將其并作一步完成檢測操作；其三，間接法測抗體。該種檢測方式，主要借助抗原的特異性，通過固相抗原的形成，去除檢測物質中的雜物，以及沒有完成結合的抗原。（4）其余的檢測方法還有競爭法、捕獲法測IgM抗體。

1.3 酶聯免疫吸附法的特點

與過去經典的生物化學檢測方法相比較，酶聯免疫吸附法由于其檢測限可達ng甚至pg，故而具有靈敏度高的特點；而且，它還具有特異性很強的抗原抗體免疫反應，這就使得那些結構類似物、有色或熒光物質對檢測的干擾會變得很小，大大提高了結果的準確性；最后，本著綠色實驗思想，這種靈敏度高，可以利用低濃度的標準品和少量的有機溶劑就能得到精準實驗結果的方法，無疑能夠大大減小試劑對環境和實驗人員的污染和危害。

2 水產養殖中的的酶聯養殖吸附法應用

2.1 致病病原菌的檢測

近年來，致病微生物嚴重影響著水產品養殖行業的發展，下面我們就來說一下水產品中致病微生物。水產品的致病微生物無非分為兩種，一種是自身攜帶細菌：溶血性弧菌和甲肝等都是水產品中致病微生物導致的。一種是人為污染導致細菌滋生：通過人體或動物腸道消化產生的糞便排放到水中導致細菌污染。伴隨生物技術的不斷完善，水產品致病微生物的檢測面臨新的發展機遇，生物檢測技術日益準確、快捷、操作簡單，現對當前應用較為廣泛的PCR技術加以分析。

PCR技術：該技術三大核心要素是DNA、四種脫氧核糖核苷酸和引物，在DNA聚合酶的作用下，快速復制翻譯目標DNA，此方法可以在試管中操作，因此操作方便，由于反應速度非?？?，短時間內就能復制數十萬想要的目的基因或DNA片段，無需進行DNA克隆就能達到目的。此項技能已經應用于生物各個領域，比如DNA檢測，基因分離，DNA分析，同樣也應用于水產品中致病微生物的檢查

2.2 水產品安全檢測

我國采用的ELISA氯霉素試劑盒線形范圍在50ng/kg～1350ng/kg，定量檢測下限為100ng/kg，而水產品組胺的FDC和EEC最大允許量為100mg/kg～200mg/kg。ELISA法測定組胺始于1983年，之后方法不斷完善，如Neogen組胺試劑盒，運用該試劑盒檢出速度非?？?，35min快速檢測，且限達2.5mg/kg，檢測結果不受樣品鹽分干擾，且直接用水相進行樣品的前處理，避免有機試劑的污染。

結語

可見ELIS的應用范圍十分廣闊，而其在水產養殖中應用的效果尤為突出，它不僅是革新了傳統的方法，也修正了原有檢測方法耗時長、成本高、環境負擔大的問題。ELISA操作簡捷、快速，低污染、高效率，在水產養殖中大有可施為的地方。

參考文獻

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