不同炮制方法對中藥延胡索中有效成分含量的影響

江國榮　禤雪梅　潘雪蓮　劉少文　何玲玲（.佛山市第一人民醫院（中山大學附屬佛山醫院）藥劑科佛山58000；.佛山市中醫院藥劑科佛山58000）

不同炮制方法對中藥延胡索中有效成分含量的影響

江國榮1禤雪梅1潘雪蓮1劉少文2何玲玲2（1.佛山市第一人民醫院（中山大學附屬佛山醫院）藥劑科佛山528000；2.佛山市中醫院藥劑科佛山528000）

目的：比較醋炙、醋煮、酒炙、醋烘等炮制方法對延胡索中有效成分含量的影響。方法：將延胡索生品分別經醋炙、醋煮、醋烘、酒炙后，以水超聲法對不同炮制品提取，高效液相色譜法測定去氫紫堇堿、延胡索乙素成分的含量，乙腈：0.1％磷酸溶液=72∶28作為試驗的流動相，色譜柱AgilentC18色譜柱，柱溫為室溫，檢測波長為282nm。結果：延胡索經不同炮制后生物堿去氫紫堇堿含量均有所升高，醋烘、醋炙、酒炙延胡索中延胡索乙素的含量有所上升，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：高效液相色譜法測定中藥延胡索不同炮制品中的2種有效成分，操作步驟簡單、重復性好，根據藥材的治療需要，采用醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法可以增加延胡索有效成分的含量。

延胡索 去氫紫堇堿 延胡索乙素 不同炮制 高效液相色譜法

延胡索（Corydalis Rhizoma）為多年生罌粟科草本植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥塊莖[1]，因有活血、止痛、利氣的功效，臨床上多用于治療脘腹疼痛、經閉痛經、產后瘀阻[2]。生物堿是中藥延胡索中的主要有效成分，其中藥材中含有的大部分為結合態的生物堿，只有堿性較弱的成分以游離態的形式存在[3]。延胡索多以炮制后入藥治療疾病，醋煮、醋烘、醋炙、酒炙均為2015年版《中國藥典（一部）》收載的炮制延胡索飲片經典方法[4]，但是國內文獻中對于不同炮制方法對延胡索的有效成分研究報道較少[5]，因此，本文采用了高效液相色譜法（HPLC），以延胡索主要的有效成分去氫紫堇堿、延胡索乙素為參考指標，探討上述四種炮制方法對延胡索有效成分含量的影響，以期為優化延胡索炮制工藝提供參考，實驗研究步驟如下。

1　實驗材料

1.1實驗儀器：日本島津1100高效液相色譜儀（主要包括紫外檢測系統、色譜工作站），電子分析天平（美國梅特勒天平公司，精密度0.0001g），CO2真空干燥箱（北京實驗儀器公司），超聲提取儀器（上海生物科技有限公司）。

1.2實驗藥材與實驗試劑：延胡索生品藥材購于本市中藥材公司（批號為120825）；延胡索乙素對照品（批號：20120323）、去氫紫堇堿對照品（批號：20120620）均購于中國食品藥品生物制品檢定所；陳醋選擇山西老陳醋，黃酒為即墨市生產，乙腈、甲醇溶液均為色譜純，水為三蒸水。

2　方法與結果

2.1延胡索不同炮制品炮制方法

2.1.1醋炙延胡索：將從中藥材公司購買的同一批號的延胡索生品洗凈，晾干，20％的陳醋作為浸泡劑將生品浸泡，醋液被藥材完全吸盡后，生品文火上炒干。

2.1.2醋煮延胡索：20％陳醋將延胡索生品浸潤，浸潤時間以醋液被生品完全吸盡為準，后武火將浸潤完成后的藥材藥液煮沸后，文火將溶液蒸煮，醋液吸收完全后置于CO2烘箱中進行干燥。

2.1.3醋烘延胡索：延胡索生品適量，稱重后20％的陳醋進行浸潤，待藥材中的醋液被藥材吸盡后，置設定溫度為120℃的CO2烘箱中，烘烤40min，取出后在室溫下晾干。

2.1.4酒炙延胡索：中藥延胡索生品適量，20％的黃酒浸潤待浸泡溶劑吸收完全后，文火將浸潤生品炒干。

2.2色譜條件的選擇：AgilentC18（250mm×4.6mm，2.5μm）為實驗過程中的色譜柱，乙腈：0.1％磷酸溶液（三乙胺調節pH為5.2～5.4）=72∶28為流動相，柱溫為室溫，檢測波長為282nm，進樣量為10μL，流速為1.0mL/min。延胡索乙素、去氫紫堇堿有較好的分離，按照延胡索乙素色譜峰進行計算理論塔板數>3000。見圖1、圖2。

2.3供試品溶液的配制：取中藥延胡索生品及不同炮制品，精密稱定后粉碎機打成細粉，分別過40目篩后置于帶瓶塞的三角錐形瓶中，150mL水溶液定量，超聲30min，后靜置到室溫后將上層溶液濾過，按照上述步驟重復操作2次，合并3次超聲濾液后蒸干，殘渣加入50mL水溶解后加入濃氨水10mL，乙醚溶液作為萃取劑連續萃取3次，每次30mL，合并3次萃取液后置于燒杯中，水浴鍋上蒸干，蒸干后的濃縮品適量，精密稱定，置于5mL容量瓶中，甲醇溶液溶解后定溶至刻度，得供試品溶液。

2.4對照品溶液的制備：稱取延胡索乙素、去氫紫堇堿對照品適量，精密稱定，置于10mL容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度，即得對照品溶液。

2.5線性關系考察：精密吸取延胡索乙素、去氫紫堇堿對照品0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0mL置于2mL容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度，按照“2.2”項下的色譜條件進樣，以色譜峰面積作為縱坐標，對照品的含量作為橫坐標，進行回歸處理，得到線性回歸方程分別為：Y=4.12×105-2.52×103（r=0.9998）（去氫紫堇堿在0.345～3.315μg范圍內線性關系良好）；Y=2.43×105-3.12×104（r= 0.9997）（延胡索乙素在0.190～1.359μg范圍內線性關系良好）。

2.6精密度考察：吸取延胡索乙素對照品溶液，按照“2.2”項下的色譜條件重復進樣5次，峰面積的RSD值為0.21％，表明高效液相色譜儀的精密度好。

2.7穩定性考察：取“2.3”項下的供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h按照色譜條件進樣10μL，測定峰面積值，其RSD值為1.95％，表明供試品溶液在24h內有較好的穩定性。

2.8重復性考察：取同一批延胡索樣品分別重復進樣5次，測定延胡索乙素的含量，其RSD值為1.75％，表明該方法的重復性較好。

2.9加樣回收率試驗：取5份已知含量的樣品，延胡索乙素含量為測定參照，將適量的延胡索乙素對照品溶液加入5份樣品，按照色譜條件進樣，以回歸方程進行樣品含量的測定，計算加樣回收率，見表1。

表1　延胡索乙素加樣回收率

2.10樣品含量測定：各炮制品供試品溶液，按照“2.2”項下的色譜條件進樣測定峰面積，按照線性回歸方程對含量進行計算，見表2。

表2　樣品中延胡索乙素、去氫紫堇堿的含量

3　小結

中藥延胡索作為臨床上經常用于治療疾病的藥物，多數均以炮制品的形式應用于臨床，經酒炙后的延胡索有效成分生物堿會生成易溶性的醋酸鹽，提高了溶出率[6]。從上述表格中的數據可見，延胡索生品與延胡索炮制后的水煎液含有的成分性質完全一致，生物堿的含量經醋炙后的延胡索水煎液中含量最高，而不經過任何炮制的延胡索生物堿的含量最低，酒炙品的含量居中。治療疾病的有效成分的增加可以增強藥材在臨床上的療效，進而證實延胡索經醋炙后治療效果的有效性。

由上述可知，幾種延胡索炮制品經比較，延胡索的醋炙品以及酒炙品是臨床上最為常用的藥材炮制品種，本次實驗中采用的超聲提取方法對延胡索各種炮制品，提取方式簡單，容易操作，另HPLC法在檢測延胡索乙素、去氫紫堇堿時精密度高、重復性好，醋炙、酒炙、醋烘等炮制方法均可以增加延胡索有效成分的含量。

[1]徐捷.不同炮制方法對延胡索有效成分影響研究[J].河北醫藥，2013，35（3）：454-456.

[2]沈志沖.元胡不同炮制方法對延胡索乙素含量的影響[J].現代預防醫學，2011，38（21）：4454-4457.

[3]鄭弘，許紅瑋.延胡索不同炮制方法的薄層色譜鑒別對比研究[J].中醫學報，2013，28（5）：695-696.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：121-125.

[5]劉傳統，祁紅.HPLC法測定益氣養陰合劑中厚樸酚和延胡索乙素的含量[J].云南中醫中藥雜志，2015，36（1）：59-61.

[6]李榮，蔡青青，牛彥兵，等.熟延胡索飲片藥理作用的對比研究[J].中國實驗方劑學雜志，2014，20（19）：133-137.

·藥物與臨床·

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A

1672-8351（2016）11-0005-02