聚維酮碘對凡納濱對蝦偷死綜合征的防治研究

吳崗，周啟良，郭秀玲，季晨，莫澤權，但學明

（1.深圳市安多福動物藥業有限公司，廣東深圳 518083；2.華南農業大學海洋學院，廣東廣州 510642）

聚維酮碘對凡納濱對蝦偷死綜合征的防治研究

吳崗1，周啟良2，郭秀玲1，季晨1，莫澤權2，但學明2

（1.深圳市安多福動物藥業有限公司，廣東深圳 518083；2.華南農業大學海洋學院，廣東廣州 510642）

對蝦偷死綜合征對凡納濱對蝦養殖業造成了嚴重危害，但是目前還無有效的防控措施。本實驗開展了聚維酮碘的體外殺菌實驗、生產實驗和生物安全性實驗，對聚維酮碘防控凡納濱對蝦偷死綜合征的作用進行了系統的評估。實驗結果顯示，聚維酮碘能有效殺滅常見水產致病菌如副溶血弧菌、擬態弧菌、無乳鏈球菌；投喂含不同濃度聚維酮碘的飼料均未對凡納濱對蝦肝胰腺造成組織損傷；拌料投喂和全塘潑灑聚維酮碘可以讓偷死病的死亡量明顯下降；全塘潑灑聚維酮碘后水泥養蝦池浮游動物和藻類的密度會顯著升高。

聚維酮碘；凡納濱對蝦；偷死綜合征

凡納濱對蝦因其耐溫、耐鹽廣，生長速度快，含肉率高，肉質鮮美等特點，已逐漸成為我國重要的養殖蝦品種，并與中國對蝦和斑節對蝦一起被列為世界上養殖產量最高的三大蝦類[1]。然而隨著集約化養殖規模越來越大，養殖密度不斷攀升，凡納濱對蝦在養殖過程中也出現了各種疾病，對對蝦養殖產業造成嚴重損失，其中因大部分對蝦死亡前無明顯征兆，且死蝦外表無明顯發病癥狀，故被稱為“偷死綜合征”或“偷死病”[2-7]。

現在對偷死綜合征產生的原因仍存在爭議，顧水江[8]認為偷死病的發生一方面是由于水體中條件性致病菌在水質富營養化和天氣驟變等條件下大量繁殖，使得塘底缺氧，甚至感染健康的對蝦，最終導致大量的死亡；另一方面惡劣的天氣對蝦長期處于應激的狀態，抵抗力下降，既而得病。然而也有報道指出在發生大規模的急性偷死癥的蝦塘并沒有檢出病毒或細菌等病原；另外在一些連續降雨的月份也并未出現大規模的急性死亡現象[9]。而近年來也有學者提出該病主要是由一種偷死野田村病毒（CMNV）所引起的[10]，雖然現在該病的發病原因還沒有定論，但都認為水質惡化是導致該病發生的主要條件。

聚維酮碘是聚乙烯吡咯烷酮與碘的絡合物，對細菌、病毒乃至寄生蟲都有很好的消毒殺菌效果，作為一種高效低毒的消毒劑在水產中已經得到廣泛地使用[11-14]。本實驗選取出現偷死現象的蝦塘，通過拌料投喂和潑灑聚維酮碘進行大塘試驗，研究聚維酮碘能否對該病的防控起到作用，旨在為該病的防治提供對策。此外，筆者對潑灑聚維酮碘的蝦塘水質及浮游生物分別進行了檢測和統計，分析該藥對水質及生物群落產生的影響，有助于進一步闡明聚維酮碘有效防控凡納濱對蝦偷死病的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗所用的凡納濱對蝦購自正大水產（珠海）有限公司斗門蝦苗場，體質量為（6.9±1.2）g，體長為（10.8±0.8）cm。先使用50 mg/L聚維酮碘對蝦消毒0.5 h，然后在循環水系統中暫養7 d，海水鹽度為8，水溫29℃。每天早晚各投喂蝦體質量2%的蝦料，1 h后吸污，每天換20%的海水。

實驗藥物為深圳安多福動物藥業公司生產的“漁多?！本劬S酮碘溶液（口服），有效碘濃度為5%，實驗中將此藥液作為原藥按要求配制成不同的濃度，所有實驗使用的藥液均在使用前配制。

實驗使用的水產動物致病菌包括副溶血弧菌、擬態弧菌和無乳鏈球菌，均為華南農業大學水產動物病害防控實驗室保存菌株。

1.2 方法

1.2.1 聚維酮碘體外殺菌實驗將實驗室保種的副溶血弧菌、擬態弧菌、無乳鏈球菌分別接種于TCBS培養基、lB培養基、BHI培養基上進行劃板，各挑一單菌落于lB液體培養基，30℃，150 rpm培養12 h，混勻后取100 μL菌液梯度稀釋至105cfu/ mL。加入聚維酮碘溶液于上述稀釋后的菌液中，使其終濃度分別為0、2、4、6、8、10、20、50 mg/L，孵育15 min后分別涂布于培養基上，培養12 h后進行菌落計數。

1.2.2 投喂聚維酮碘對凡納濱對蝦肝胰腺的影響使用噴灑的方式配制5種含不同聚維酮碘濃度的飼料：0 mL藥液/kg飼料、2.5 mL藥液/kg飼料、5 mL藥液/kg飼料、10 mL藥液/kg飼料、25 mL藥液/ kg飼料；實驗蝦分為5組，每組30尾蝦，每天早晚分別投喂上述飼料，投喂量為蝦體質量2%，連續投喂15 d，然后取各組對蝦的肝胰腺使用Bouin氏液固定24 h，水洗后經70%、80%、95%、100%酒精逐級脫水各1 h，使用二甲苯透明15 min，浸入熱石蠟2 h后進行包埋，經4 μm切片后使用HE染色，封片觀察。

1.2.3 聚維酮碘拌料投喂和全池潑灑對偷死病的防治實驗于廣州番禺區三民島某凡納濱對蝦養殖場進行，共6個實驗塘，每個塘面積均為667 m2，水深1.2 m，放苗時間為2015年3月31號，于5月8號，出現零星死亡，早期并不嚴重，隨后死亡數量逐漸增加，每天從增氧機下面能撈到2～3 kg的死蝦。對蝦死亡前無明顯征兆，且死蝦外表無明顯發病癥狀，與偷死現象符合。于5月18號開始實驗，6號塘不用藥作為陰性對照，1～5號塘均使用含聚維酮碘藥液10 mL/kg的飼料進行投喂，另外1～3塘每個塘潑灑500 mL聚維酮碘藥液，4～5號塘每個塘潑灑250 mL聚維酮碘藥液，每天1次，連續3 d，然后每天記錄各塘死亡情況。

1.2.4 潑灑聚維酮碘對對蝦養殖水體的影響本實驗分別在養殖凡納濱對蝦的土池和水泥池中進行，面積均為667 m2，水深1.2 m。在潑灑聚維酮碘前，連續5 d于10：00采取水面下40 cm處水樣檢測氨態氮、亞硝酸鹽氮、溶氧、水溫、pH值等水質指標及浮游動植物密度。第6天和第12天土池和水泥池各潑灑500 mL聚維酮碘，潑藥當天分別于潑藥后0、4、8 h采集水樣檢測水質指標和浮游生物密度，其余時間每天10：00采取水樣檢測。

2 結果

2.1 聚維酮碘體外殺菌效果

不同濃度藥物處理后，對每種細菌菌落計數，結果折算為相對存活率（見圖1）。結果顯示聚維酮碘對副溶血弧菌、擬態弧菌和無乳鏈球菌均有顯著的殺菌作用。

2.2 投喂聚維酮碘對凡納濱對蝦肝胰腺的影響

組織切片顯示（見圖2），與空白組相比，投喂不同濃度聚維酮碘的凡納濱對蝦肝胰腺并未出現明顯組織變化。各組的肝胰腺都保持完整的肝小管結構，呈四角或五角星形且輪廓清晰。4種肝胰腺的主要細胞：吸收細胞、分泌細胞、纖維細胞和胚細胞均未見異常。

2.3 拌料和潑灑聚維酮碘對偷死病的防治作用

各拌料和潑灑聚維酮碘組及對照組死亡情況如圖3所示?？梢园l現對照組依然每天有近3 kg的對蝦死亡，而各實驗組對蝦的死亡情況在用藥后2～3天就明顯得到改善，其中1～3號塘效果最為明顯。

2.4 潑灑聚維酮碘對對蝦養殖水體的影響

實驗期間各池均未發現對蝦大量死亡的現象，水泥池水溫29.7～32.2℃，溶氧>4.50 mg/L，pH值6.3～8.7，亞硝酸鹽濃度<0.8 mg/L；土池水溫為29.5～31.7℃，溶氧>4.50 mg/L，pH值6.7～8.4，亞硝酸鹽濃度<0.8 mg/L。實驗結果顯示潑灑聚維酮碘后水泥池藻類和浮游動物的密度顯著升高（見圖4—6）。

3 討論

圖1 聚維酮碘體外殺菌效果

圖2 對蝦肝胰腺切片

圖3 用藥后對蝦的死亡情況

圖4 用藥后亞硝酸鹽含量的變化

圖5 用藥后藻類密度的變化

圖6 用藥后浮游動物密度的變化

聚維酮碘通過緩慢釋放碘離子，可直接作用于病毒、細菌等病原，破壞其蛋白活性達到消毒效果[15-17]。此外，聚維酮碘是一種低毒安全的消毒劑，在水產養殖中得到廣泛的應用。張萍等[18]報道了聚維酮碘對凡納濱對蝦無節幼體急性毒性試驗，認為其24、48 h的半數致死濃度和安全濃度分別為8.737、6.512、和0.650 mg/L。而熊斌[19]則認為聚維酮碘對凡納濱對蝦仔蝦（體質量為7.7 mg）24、48 h的半數致死濃度和安全濃度分別為4.293、3.162、0.515 mg/ L。高曉華[20]也報道了聚維酮碘對凡納濱對蝦成蝦的96的半數致死濃度和安全濃度分別為7.781和0.78 mg/L。綜上所述，聚維酮碘對不同時期對蝦無論是半數致死濃度還是安全濃度都有所差異。本實驗中投喂不同濃度的聚維酮碘并未引起對蝦的死亡，且切片結果顯示投喂不同濃度的聚維酮碘并未引起對蝦肝胰腺的病理變化。因此筆者認為使用深圳安多福動物藥業公司生產的聚維酮碘拌飼投喂凡納濱對蝦成蝦是安全的，該方法可以應用到生產當中。并且該公司的聚維酮碘（口服）已經獲得了國家的新獸藥證書，是目前中國唯一的口服類聚維酮碘。

聚維酮碘對偷死病防治的實驗結果顯示，相對于對照組，5個試驗塘的對蝦死亡量顯著下降，偷死現象得到有效控制。另外，潑灑500 mL聚維酮碘藥液的1—3號塘效果尤為顯著，潑灑250 mL聚維酮碘藥液的4、5號塘也在潑灑后的第3、4天得到控制。因此，本實驗證實拌飼投喂和全池潑灑聚維酮碘相結合的方式可以顯著降低偷死病的病死率。

雖然使用聚維酮碘能一定程度上控制偷死病的發生，但對其產生機制尚未得到充分研究。筆者認為聚維酮碘主要是通過改變水質和直接、持續地殺滅病原來完成的。首先，體外的殺菌結果顯示聚維酮碘能高效殺滅水體的致病菌。其次，高曉華[20]指出在一定濃度下，聚維酮碘可促進小球藻的生長，而益生菌對其的最小耐藥濃度較高；此外聚維酮碘對大型蚤的半數致死濃度也比常用的消毒藥物如溴氯海因、二氯異氰尿酸、三氯異氰尿酸等高23～48倍；最后聚維酮碘還可降低水體氨氮和亞硝酸鹽等有害因子。本實驗結果也證實了聚維酮碘的確不會影響浮游動物和藻類的生長，在水泥池中還能促進浮游生物的繁殖。

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The prevention of povidone iodine to Litopenaeus vannamei AHNS

Wu Gang，Zhou Qiliang，Guo Xiuling1，Ji Chen1，Mo Zequan2，Dan Xueming2
（1.ADF Animal Pharmaceutical Co.ltd.，Shenzhen 518083，China；2.College of Animal Science，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China）

Acute hepatopancreas necrosis syndrome(AHNS)had caused destructive economic losses in the breeding of Litopenaeus vannamei，and there was no effective way to control it so far.In this experiment，we evaluated the disinfectant effect and bio-safety test of povidone iodine(PVP-I).Afterwards，a pond trial was conducted to observe whether the shrimp with AHNS could be controlled by feeding PVP-I feed as well as PVP-I splashing.The results showed that the PVP-I had a strong disinfectant effect and was able to kill the common aquatic pathogenic bacteria such as Vibrio parahaemolyticus，Vibrio mimicus and Streptococcus agalactiae.The different concentrations of PVP-I feed couldn't cause pathological change of the L.vannamei's liver and pancreas.The mortality was significantly decreased after feeding PVP-I feed and PVP-I splashing.The zooplankton and phytoplankton were increased in cement tank after PVP-I splashing.

Povidone iodine；Litopenaeus vannamei；AHNS

10.3969/j.issn.1004-2091.2016.10.005

S948

A

1004-2091（2016）10-0023-06

2016-03-16）

吳崗（1973-），男，研究方向：藥理學.E-mail：45090854@qq.com

但學明（1972－），男，教授，研究方向：水產病害防控.E-mail：dxm72@scau.edu.cn