飼料中添加納米鋅對半滑舌鰨生長、肌肉營養成分及部分血液生化指標的影響

■ 孫學亮 王慶奎 陳成勛 郭永軍 石 慧 邢克智* 戴媛媛 尤宏爭

（1.天津農學院水產學院，天津300384；2.天津市渤海水產研究所，天津 300457；3.天津市水產研究所，天津300042）

半滑舌鰨（Cynoglossussemilaevis）屬于鰈形目，舌鰨科，舌鰨屬。屬于大型近海溫水性底層魚類，主要分布于我國的沿海海域，其中以黃、渤海海域最多，具有高營養價值、較強適應性、生長速度快、耐低氧等特性，成為我國最具工廠化養殖前景的海水魚類[1]。

鋅是魚體中所必需的微量元素之一，也是必需營養物質之一[2-4]。它分布于機體所有組織、器官和體液中[5]。參與機體生化代謝過程（核酸和蛋白質的合成、能量代謝、氧化還原等）、維持動物中樞免疫器官和外周免疫器官的結構和功能起到重要作用[6]。王慶奎等[7]曾研究鋅對點帶石斑魚生長和生理生化指標的影響。張陽[8]對半滑舌鰨的礦物質需求的研究結果表明，當半滑舌鰨的飼料中添加無機鋅含量53.5～89.5 mg/kg時最有利于其生長。

納米礦物質在水產領域應用廣泛。鄧岳松等[9]構建20～60 nm之間粒徑的納米硒，并且研究了納米硒對尼羅羅非魚生長的影響，研究結果表明納米硒不僅能提高尼羅羅非魚生長的速度且毒性較低。陳劍杰等[10]研究表明餌料中添加納米硒可在一定程度上改善氟脅迫所造成的鯉魚抗氧化能力的下降和組織結構的損傷。秦粉菊等[11]研究吉富羅非魚餌料中添加納米硒可在一定程度上改善鎘脅迫所造成的非特異性免疫功能和抗氧化能力的下降，對鎘暴露起到一定保護作用。

納米氧化鋅具有較高的生物活性、吸收率和免疫調節功能，相對較少的納米氧化鋅即可達到促進生物體生長的功效。同時，納米氧化鋅的熱穩定性較好，可與多種有機物包括病毒和細菌發生氧化反應，從而達到殺菌消毒的作用[12]。飼糧中添加納米氧化鋅能提高產蛋雞鋅的沉積、蛋殼厚度、血漿碳酸酐酶活性以及血漿生長激素濃度；相比常規氧化鋅，納米氧化鋅能增強鋅在蛋雞小腸中的吸收[13]。

本試驗以納米鋅(20 nm)為鋅源，添加至基礎飼料中，研究飼料中添加納米鋅對半滑舌鰨生長、肌肉營養成分及部分血液生化指標的影響，為研制配合飼料及優化半滑舌鰨飼料配方、合理開發利用鋅源提供基礎數據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗采用體質量為(52.68±0.13)g的半滑舌鰨作為研究對象，納米鋅由南京先豐納米材料科技有限公司生產。

1.2 試驗方法

試驗開始前將試驗魚馴化7 d，馴化期間飼喂不添加納米鋅的基礎飼料。在基礎飼料中分別添加0、30、60、90、120、180 mg/kg納米鋅（基礎飼料中Zn含量為 53.16 mg/kg）制成含鋅量為 53.16、82.51、111.48、142.16、173.01、232.72 mg/kg 6種飼料，另加一組以無機鋅(含鋅量為112.37 mg/kg，以W60表示）為鋅源飼料用于進行對比，共7個試驗組。每個水平設3個重復，每箱35尾?；A飼料所用的秘魯魚粉、豆粕、酵母、蝦粉等原料均粉碎過60目篩，微量元素的添加采用逐級擴大法，均勻的混入基礎飼料中，混合均勻后，用飼料機制成粒徑為2 mm的顆粒飼料，陰干后置于-20℃冰柜中保存備用，基礎飼料配方和營養水平見表1。試驗開始前對試驗魚進行體重的測量。連續喂食84 d后取樣，測定生長指標、肌肉營養成分及血液生理指標等。

表1 試驗基礎飼料組成及營養水平（風干樣）

表2 水質指標

1.3 試驗管理

試驗采用循環海水進行養殖，養殖系統由21個直徑為1 m的水族箱組成。試驗魚先在微流水養殖系統中馴化7 d，馴養階段飼喂同一種飼料，以便使魚體內含有的微量物質處于同一起點。每日投喂2次（8：00、16：00），投喂量占魚體重量的1%左右。每天觀察試驗魚狀況，記錄死魚數目與攝食情況，依據攝食情況及時調節飼料投喂量。每天監測水質指標（水溫、鹽度、溶氧、pH值、硝態氮、氨態氮），見表2。

1.4 樣品采集

連續喂食84 d后，將試驗魚饑餓24 h后稱重取樣，每箱分別隨機取9尾魚，MS-222麻醉后測量體長、體重。用無菌注射器從尾柄動/靜脈采血，一部分用肝素鈉（50 U/ml）抗凝，用于血液指標測定，一部分不抗凝，室溫靜置4 h后，離心（4℃，3 500 r/min，10 min），收集血清，-80℃冷凍保存。

1.5 測定指標

1.5.1 生長指標

1.5.2 試驗魚、飼料營養組分測定

常壓恒溫干燥法（GB/T6435—2006）測定水分；凱氏定氮法（GB/T6432—86）測定粗蛋白；馬弗爐高溫灼燒法（GB/T6538—86）測定粗灰分（550℃）；索氏抽提法（GB/T6433—86）測定粗脂肪（無水乙醚為溶劑）。

1.5.3 血液生理指標測定

血紅蛋白含量采用氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）法測定，用氰化血紅蛋白標準液做標準曲線。血液NBT陽性細胞：取50 μl抗凝血加到等體積的NBT應用液中混勻，28℃孵育30 min（每10 min混勻一次）。取75 μl的混合物加入1.5 ml二甲基甲酰胺（DMF）中，3 000 r/min離心5 min。吸取上清液在540 nm處測OD值，用DMF調零。

血清中蛋白、白蛋白、膽固醇、甘油三酯含量、谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶活力測定采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒測定。

1.6 數據分析

試驗所得數據均采用“平均值±標準誤（Mean±SE）”表示，用SPSS 19.0軟件對數據進行統計學分析，先將數據進行單因素方差分析(one-way ANOVA，LSD)，差異顯著(P＜0.05)的用Duncan's法做多重比較。

2 結果

2.1 納米鋅對半滑舌鰨生長指標的影響(見表3、表4)

表3 飼喂84 d后納米鋅對半滑舌鰨末重、存活率和肥滿度的影響

表4 飼喂84 d后納米鋅對半滑舌鰨增重率、飼料效率、特定生長率和蛋白質效率的影響

由表3可知，納米鋅對半滑舌鰨存活率、肥滿度的影響均不顯著(P＞0.05)。飼養84 d后，試驗魚的末體重在73.06～85.84 g之間。隨著納米鋅的添加量增大，試驗魚的末重呈先上升后下降的趨勢。90 mg/kg組末重達到最大值，且顯著高于0、30、120、180 mg/kg組和W60組(P＜0.05)，但和60 mg/kg組無顯著性差異(P＞0.05)。

由表4可知，隨著納米鋅的添加量增大，對增重率、飼料效率、特定生長率及蛋白質效率的影響均呈先上升后下降趨勢；特定生長率各組間無顯著性影響(P＞0.05)。90 mg/kg組增重率、飼料效率及蛋白質效率均達到最大值，且顯著高于0、30、120、180 mg/kg組和W60組(P＜0.05)，但與60 mg/kg無顯著性差異(P＞0.05)。

2.2 納米鋅對半滑舌鰨營養組分的影響(見表5)

表5 飼喂84 d后納米鋅對半滑舌鰨營養組分的影響(%)

由表5可知，添加納米鋅的半滑舌鰨魚體水分75.08%～75.19%之間，粗蛋白在20.33%～21.27%之間，粗脂肪在8.22%～8.47%之間，而粗灰分在3.04%～3.24%之間，但各試驗組并無顯著性差異（P＞0.05）。

2.3 納米鋅對半滑舌鰨血液生理指標的影響(見表6)

由表6可知，添加納米鋅對血紅蛋白含量影響呈先下降后上升的趨勢。120 mg/kg組、180 mg/kg組以及W60組的血紅蛋白含量顯著高于除對照組之外其他各組(P＜0.05)；納米鋅添加量為0～90 mg/kg時NBT顯著高于其他組別(P＜0.05)；對A/G的影響也呈現先下降后上升的趨勢，最低值出現在90 mg/kg組，W60組也出現較低數值且兩組均顯著低于其他各組。

表6 飼喂84 d后納米鋅對半滑舌鰨血液生理指標的影響

2.4 添加納米鋅對半滑舌鰨血清及肝胰臟GOT、GPT的影響(見圖1、圖2)

圖1 飼喂納米鋅84 d后對半滑舌鰨GOT活力的影響

圖2 飼喂納米鋅84 d后對半滑舌鰨GPT活力的影響

由圖1可知，血清GOT活力呈現先下降后上升的趨勢，最大值出現在W60組且顯著高于除對照組之外其余各組；而肝胰臟GOT活力在30 mg/kg、90 mg/kg組呈現較大值且顯著高于其他各組(P＜0.05)，但兩組之間無顯著性差異。

由圖2可知，血清GPT活力在90 mg/kg組出現最大值且顯著高于除W60組外其他各組；肝胰臟GPT活力在對照組出現最大值且顯著高于除180 mg/kg組外其他各組(P＜0.05)，而最小值出現在90 mg/kg組且顯著低于各組(P＜0.05)。

2.5 納米鋅對半滑舌鰨血清CHO、TG的影響(見圖3)

圖3 飼喂納米鋅84 d后對半滑舌鰨CHO、TG含量的影響

由圖3可知，CHO含量在120 mg/kg及W60組呈現較大值且顯著高于對照組及30 mg/kg組，與其他各組并無顯著性差異(P＞0.05)；TG含量在90 mg/kg組出現最大值且顯著高于其他納米鋅組(P＜0.05)。

3 討論

3.1 納米硒鋅對半滑舌鰨生長性能的影響

鋅是水產動物生長發育所必需的微量元素之一，缺鋅會導致魚體出現生長發育緩慢、體型短小、死亡率上升及白內障等癥狀。而適量的鋅則會促進魚體的生長。譚麗娜[14]研究結果表明，鋅極顯著地提高幼建鯉特異性生長速率、攝餌量、飼料利用率、蛋白質效率；畢惠[15]研究結果表明，鋅對泥鰍的增重有顯著作用；孫蓬[16]研究甘氨酸鋅對點帶石斑魚末重、增重率及特定生長率均有顯著影響；蕭培珍[17]日糧鋅補充量對異育銀鯽增重率、體重特定生長率、飼料系數、蛋白質效率有一定的影響，各試驗組間存在顯著性差異。

本試驗研究結果顯示，在基礎飼料中添加納米鋅及無機鋅對半滑舌鰨存活率、肥滿度及特定生長率無顯著性影響，而對末重、增重率、飼料效率及蛋白質效率有不同程度的影響，均為當納米鋅添加量為90 mg/kg出現最大值且顯著高于除納米鋅60 mg/kg外其余各組，與崔立嬌等[18]對星斑川鰈幼魚研究結果類似（鋅的總添加量為150 mg/kg）；周立斌等[19]對花鱸生長的研究表明，當添加量為159.9 mg/kg時，花鱸的增重率達到最大值。

3.2 納米鋅對半滑舌鰨肌肉營養成分的影響

本試驗測定的營養組分包括水分、粗蛋白、粗脂肪及粗灰分，粗蛋白是飼料中含氮化合物的總稱，既包括真蛋白又包括非蛋白含氮化合物；粗脂肪是飼料中的一個重要組成部分，雖然各種動物對它的需要量不大，但是不能缺少，它在動物營養中起著很重要的作用；粗灰分是魚體樣品在550～600℃高溫爐中將所有有機物質氧化后剩余的殘渣，主要為礦物質氧化物或鹽類等無機物質。結果顯示在基礎飼料中添加納米鋅及無機鋅對半滑舌鰨水分、粗灰分、粗蛋白及粗脂肪均無顯著性影響，這與張佳明[20]研究結果相一致；葉超霞等[21]對斜帶石斑魚飼料中添加鋅的研究發現鋅對肌肉水分、脂肪無顯著影響。

3.3 納米鋅對半滑舌鰨血液生化指標的影響

魚類的血細胞是反映魚體免疫能力的一個重要指標，具有吞噬、分泌等功能，可參與機體的傷口修復、防御等生理機制，因此血液指標可以為檢驗機體的生理狀態健康提供一定的依據[22]。本試驗研究結果顯示，隨著納米鋅含量的增加半滑舌鰨Hb呈先下降后上升的趨勢，且60、90 mg/kg組顯著低于對照組及W60組，說明添加低濃度納米鋅可能對半滑舌鰨Hb產生抑制作用，影響其攜氧能力。NBT陽性細胞是吞噬細胞、中性粒細胞和巨噬細胞的總稱，它是研究細胞數量和吞噬能力的極好指標，通過提高NBT陽性細胞數來提高魚類非特異性免疫功能[23]。本試驗中，NBT陽性細胞總體呈下降趨勢，其中120、180 mg/kg組及W60組顯著低于其余各組，這說明大劑量的納米鋅對NBT陽性細胞具有抑制作用。王鏡巖等[24]認為血清中有兩種蛋白質，一種是白蛋白，可以修補組織，還可以維持血漿滲透壓；另一種是球蛋白，參與機體非特異性免疫。血漿A/G值是反映魚類非特異性免疫力的重要指標，A/G值越低說明免疫球蛋白含量越高，免疫力越高[25]。本試驗中，A/G比值在90 mg/kg組出現最低值且顯著低于納米鋅其余各組，但與W60組無顯著性差異。

3.4 納米鋅對半滑舌鰨GOT和GPT的影響

GPT和GOT廣泛存在于動物線粒體中，是對調節蛋白質代謝起重要作用的氨基酸轉氨酶[26]。轉氨酶是反映魚體肝胰臟是否正常的一項重要指標。在通常情況下，機體內血清中是一直維持一定的GPT活性，只有當肝胰臟、腎臟等出現異常時才會引起GPT活性顯著升高[27]。本試驗中，血清GOT最大值出現在無機鋅組且顯著高于除對照組之外其余各組；而肝胰臟GOT活力在30、90 mg/kg組呈現較大值且顯著高于其他各組，血清GPT活力在90 mg/kg組出現最大值且與無機鋅組差異不顯著，說明飼料中添加適量納米鋅沒有對肝臟造成損傷。

3.5 納米鋅對半滑舌鰨CHO和TG的影響

動物血清中包括四大脂類，它們分別為膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、磷脂以及非脂化脂肪酸，其中CHO和TG能夠反映魚體內脂類代謝吸收情況[28]。CHO是動物機體組織細胞中不可缺少的重要物質，它的作用是參與形成細胞膜，同時也是某些酶及激素合成原料，CHO過低或過高都會對機體產生不利影響[29]。TG是生物體內含量最多的一種脂類，它能夠被大部分組織所利用產生各種能量，能夠間接反映機體生長狀況。本試驗結果顯示，半滑舌鰨在飼喂84 d后，CHO在無機鋅組出現最大值，但除顯著高于對照組及30 mg/kg組外與其它各組無顯著性差異；而TG最大值出現在90 mg/kg且顯著高于其它各組；飼料中脂類的吸收、轉運及貯存場所，一般是以TG結合蛋白質形成乳糜微粒的形式完成的[30]。說明添加量為90 mg/kg時，半滑舌鰨對飼料中脂類的吸收、轉運能力最強。

4 結論

綜上所述，在基礎飼料中納米鋅添加量為90 mg/kg時，既可以提高半滑舌鰨的生長性能，又可以提高其免疫力，同時對其肝臟影響較小。