MiR—208在急性冠脈綜合征患者血清中的表達及與炎性因子的相關性研究

呂晉琳+尹雪艷+吳新華+李利華+董榆+張雷+羅文娟

[摘要] 目的 探討急性冠脈綜合征患者外周血微小RNA-208（miR-208）的表達及其與炎性因子表達水平的關系。方法 整群選取2014年4月—2015年5月大理大學附屬醫院心血管內科收治的138例ACS患者血清臨床資料，以 52名健康體檢者為對照組。分析miR-208在ACS患者血清中的表達及其與炎性因子TNF-α、CRP、IL -6的關系。結果 與對照組相比，miR-208在ACS患者血清中的表達升高2-ΔΔCt：（24.28±3.85） vs （7.83±1.54） P<0.001，并且miRNA-208表達的升高和炎癥因子分泌呈明顯正相關TNF-α （r=0.612）、CRP （r=0.443），IL -6 （r=0.543） P<0.05。 結論MiR-208表達在AMI患者血清中上調，并與炎癥相關，其可能成為ACS新的潛在診療靶點。

[關鍵詞] 急性冠脈綜合征；miR-208；炎性因子

[中圖分類號] R541 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2016）11（a）-0008-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of RNA-208 （miR-208） in peripheral blood of patients with acute coronary syndrome and its relationship with the expression of inflammatory cytokines. Methods Group selection the clinical data of patients with ACS admitted to Department of Cardiovascular Medicine，The Affiliated Hospital of Dali University from April 2014 to May 2015 were enrolled.138 ACS patients and 52 healthy persons with matched age and gender served as healthy control group. The levels of serum miRNA-208， IL-6， CRP， TNF-αin all the subjects were recorded. The correlation between serum miR-208 and the inflammatory cytokines was analyzed. Results Compared with control group， miR-208 expression in ACS patients was higher （2-ΔΔCt （24.28±3.85） vs （7.83±1.54）， P<0.001. MiR-208 expression was associated with inflammation factorsTNF-α （r=0.612），CRP （r=0.443），IL -6 （r=0.543）， P<0.05. Conclusion Upregulated serum miR-208 is involved in the pathophysiology of ACS. MiR-208 may be used as a reference to predict， diagnosis and treat ACS.

[Key words] Acute coronary syndrome ； miRNA-208； Inflammatory factor

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，As）引起的心腦血管疾病發病率漸呈上升趨勢，已成為危害人類健康的主要殺手[1]。對其發病機制，多數學者支持炎癥反應學說，認為血管壁的慢性炎癥是導致As發生發展的重要因素。在動脈粥樣硬化性疾病中，急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome， ACS）是一組由急性心肌缺血引起的綜合征，炎癥因子激活在其中發揮重要的作用[2]。MiRNAs是一類內源性、非編碼小RNA序列。MiRNA基因先在細胞核內轉錄出初始miRNA，再經Drosha- DGCR8復合物剪切為60～80堿基長度帶有莖-環結構的miRNA[3]。它們主要通過與蛋白編碼基因外顯子區或基因信使RNA（mRNA）的種子序列互補結合，致靶基因降解和/或翻譯抑制[4]。近年來，隨著分子生物學及高通量技術的發展，miRNA 在As中的作用逐漸引起人們重視。該研究通過檢測2014 年4 月—2015年5月大理大學附屬醫院心血管內科收治的138 例ACS患者血清miR-208表達水平，探討其與炎癥因子相互關系，以期為ACS診療提供新的靶點，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

整群選取大理大學附屬醫院心血管內科收治的138 例ACS患者，其中急性心肌梗死（AMI）42例，不穩定型心絞痛（UA）96例，所有患者均行冠狀動脈造影檢查，以 52名健康體檢者為對照組。排除其他心臟疾病，合并嚴重的肝腎功能不全，其他慢性炎癥，卒中，惡性腫瘤，風濕性疾病，近期應用抑炎癥藥物。該研究共納入42例AMI患者，其中男性34例，女性8例。96例UA患者，其中男性67例，女性27例。ACS組年齡（57.1±16.2）歲。52名健康體檢者作為對照組，其中男性38名，女性14名，年齡（59.7±12.4）歲。各組患者性別、年齡差異無統計學意義。

1.2 研究方法

1.2.1 血樣采集和qRT-PCR ACS患者在發病24 h內從前臂靜脈采取空腹血標本，對照組于空腹體檢時采血3 mL，肝素鈉抗凝。利用EastepTM試劑盒提取血清總RNA。用Hairpin-itTMmiRNA qRT-PCR試劑盒，按說明書步驟進行qRT-PCR反應。ABI7 500實時定量PCR儀測定并用2-ΔΔCt計算其相對表達量。

1.2.3 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清炎癥因子水平 ELISA試劑盒用于腫瘤壞死因子（TNF-α）、C反應蛋白（CRP）、白介素6（IL -6）檢測，按說明書進行操作。

1.3 統計方法

用SPSS 17.0 統計學軟件進行統計學分析， 計量資料均以均數±標準差（x±s）表示，均數比較用t檢驗或單因素方差分析，用線性相關分析炎癥因子與miRNA-208的關系，計數資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床特征

該研究共納入42例AMI患者，其中男性34例，女性8例。96例UA患者，其中男性67例，女性27例。52名健康體檢者作為對照組，其中男性38例，女性14例。各組患者性別、年齡及甘油三酯（TG）水平差異無統計學意義（P>0.05）。與對照組相比，AMI組血糖、收縮壓、舒張壓、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（HDL-C）及低密度脂蛋白（LDL-C），UA組收縮壓、HDL-C及LDL-C水平差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 外周血miR-208 的表達水平分析

如圖1所示，AMI及UA患者外周血miR-208水平均較健康對照組（CTL）升高，見圖1。

2.3 miR-208 與炎性因子的相關分析

與對照組相比，ACS組血清TNF-α、CRP、IL -6水平升高。MiR-208與TNF-α （r=0.612）、CRP （r=0.443），IL -6 （r=0.543）呈顯著正相關，詳見表2。

3 討論

ACS 是由于動脈粥樣硬化斑塊破裂或糜爛，伴有不同程度血栓形成、血管痙攣及栓塞引起心肌急性缺血所導致的一組綜合征。諸多研究證明炎癥是ACS的關鍵，IL、TNF、CRP等因子均參與了ACS 的病理過程。炎性因子水平升高，可促進炎癥反應及As斑塊形成，與病情嚴重程度明顯相關。近年來研究發現，miRNAs在調控心血管系統發育和功能上起重要作用，As患者血管中有44種miRNAs上調57種miRNAs下調[5]，并且miRNAs可調控As進程中的炎癥通路。例如，保護性的載脂蛋白apoE的作用機制之一即增加單核-巨噬細胞內miR-146水平而抑制NF-κB炎癥通路，miR-155可抑制了TNF-α刺激內皮細胞中NF-κB的表達，對炎性反應進行負向調控[6]。大鼠頸動脈球囊損傷模型中，在血管細胞中檢測了140種miRNA，損傷后約有110種miRNA發生異常表達，其中miR-208上調高達40多倍[7]。MiR-208在損傷管壁中表達升高，敲除miR-208可抑制血管平滑肌細胞增生、促進細胞凋亡，由此顯著抑制新生內膜形成[8]。既往研究認為miR-208可能參與了動脈粥樣硬化的進程，但對其作用機制仍缺乏相關報道[9]。該研究表明，與對照組相比miR-208在ACS患者血清中表達增加超過20倍。在ACS患者血漿中炎性因子的表達分別為TNF-α（37.2±4.3）ng/L，CRP（17.6±4.3）mg/L ，IL-6（25.6±5.7）ng/L，均較對照組明顯升高，并且與miR-208水平呈正相關。上述實驗與Huang X等[9]的體外研究結果相符，并且進一步從臨床角度證明了血清miR-208 可能作用于炎癥信號通路的關鍵環節， 調控炎癥因子的表達，其可能作為ACS的一種潛在生物學標志物用于臨床診斷和病情判斷。

作為新的特異性基因調節小分子，miRNA不僅有助闡明疾病病理生理過程及發病機制，在臨床診療中無疑也具有重要的應用前景。MiR- 208其對心肌缺血損傷反應的敏感性及特異性可能成為利于早期及時診斷AMI 的生物學標志物及新的治療靶點。

[參考文獻]

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（收稿日期：2016-08-05）