青鵬膏劑穴位貼敷對大鼠肥大細胞數量和脫顆粒率的影響*

屈敬陽，劉丁丁，安 娜，許 倩，陳 龍，楊志新△

（1.承德醫學院，河北承德 067000；2.華北理工大學中醫學院）

青鵬膏劑穴位貼敷對大鼠肥大細胞數量和脫顆粒率的影響*

屈敬陽1，劉丁丁2，安 娜1，許 倩1，陳 龍1，楊志新1△

（1.承德醫學院，河北承德 067000；2.華北理工大學中醫學院）

目的:觀察青鵬膏劑大椎穴貼敷對大鼠穴區組織肥大細胞（MC）數量和脫顆粒率的影響。方法：雄性Wistar大鼠30只隨機分為青鵬膏劑穴位貼敷組、電針組和空白對照組，每組10只。青鵬膏劑組大鼠大椎穴穴區局部剃毛后涂抹青鵬膏劑（約25mg，2次/天，每次20min），電針組大鼠大椎穴給予電針刺激。采用甲苯胺藍染色觀察MC的形態、數量和脫顆粒率。結果：青鵬膏劑組和電針組大鼠穴區組織內MC細胞數量增多、體積增大，細胞膜破裂，細胞輪廓不規則，MC脫顆?，F象明顯，且MC多沿神經或血管分布。青鵬膏劑組和電針組大鼠穴區組織MC數量比較差異無統計意義（P＞0.05），但均明顯高于空白對照組（P＜0.05）。三組大鼠穴區組織脫顆粒的MC個數和MC脫顆粒率由高到低依次為青鵬膏劑組、電針組、對照組，兩兩比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。結論：青鵬膏劑穴位貼敷可激活MC，出現數量增多及募集和脫顆?，F象。

青鵬膏劑；穴位貼敷；大椎；肥大細胞；脫顆粒

青鵬膏劑[1]為藏傳經典外用方劑，具有清熱解毒、活血化瘀、祛風除濕、消腫止痛的功效，可用于治療痛風、風濕、類風濕關節炎、熱性“岡巴”、“黃水”等病變引起的關節腫痛、扭挫傷腫痛、皮膚瘙癢、濕疹等。以往對青鵬膏劑的研究多側重于臨床應用[2-3]。本研究選取大椎穴進行穴區局部青鵬膏劑貼敷，觀察大鼠局部組織內肥大細胞（MC）數量的變化和脫顆粒情況，探索青鵬膏劑穴位貼敷的藥理作用機制。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑 電針治療儀G6805-Ⅱ型，青島鑫升實業有限公司；硫代乙酰膽堿，日本TCI公司；恒冷箱切片機，英國Thermo Fisher Scientific公司；Multiskan MK3酶聯

儀（芬蘭Thermo公司）；甲苯胺藍（Tolurdine Blue O)，美國Amresco公司。

1.2 實驗動物分組與處理 SPF級Wistar雄性大鼠30只，

北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號：scxk(京) 2012-0001。大鼠適應性飼養一周后隨機分為青鵬膏劑穴位貼敷組、電針組和空白對照組，每組10只。大鼠固定后，根據郭義主編的《實驗針灸學》大鼠常用針灸穴位，選取大椎穴為中心、直徑為1.5cm的區域，穴區局部剃毛，青鵬膏劑組大鼠每次于穴區局部均勻涂抹青鵬膏劑（約25mg[4]），2次/天，每次20min。電針組在大椎穴給予電針刺激，用毫針針刺，得氣后針柄接電針治療儀G6805-Ⅱ型，刺激參數為2/15Hz、1mA，2次/天，每次20min。對照組大鼠相同時間和方法固定，但不給予涂藥和針刺刺激。3組大鼠均于第7天干預后2小時取材。

1.3 組織切片染色方法 以大鼠大椎穴為中心，穴區局部剃毛。3.5%水合氯醛（1ml/100g）腹腔注射麻醉大鼠，快速剪取大椎穴區皮膚組織塊（包括皮膚、皮下組織和少量肌肉，約1cm×1cm×0.4cm），-80℃冰箱保存。組織塊恒冷箱切片機切片，厚度15μm，乙酰膽堿酯酶染色后甲苯胺藍復染[5]，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。光學顯微鏡下，每只大鼠選取4張切片，每張切片觀察3個視野（×100），分別記錄每個視野內的MC個數和脫顆粒的MC個數，并計算MC脫顆粒率。脫顆粒率=脫顆粒MC數/MC總

數×100%

1.4 統計分析 采用SPSS 19.0統計軟件進行統計處理，組間比較采用單因素方差分析。若方差齊，兩兩比較采用LSD法；若方差不齊，兩兩比較采用Tamhane法。

2 結果

2.1 染色結果 各組穴區組織真皮、皮下組織和肌肉組織中都分布著大小、數量不等的MC。對照組大鼠穴區組織內MC細胞膜完整，細胞形狀規則，多呈圓形、卵圓形，胞質內充滿異染性顆粒，細胞周圍少見散在藍色顆粒，脫顆?，F象不明顯。青鵬膏劑組和電針組大鼠穴區組織內MC數量增多、體積增大，且多沿神經或血管周圍分布，MC細胞膜破裂，細胞輪廓不規則，細胞周圍分布大量藍紫色顆粒，脫顆?，F象明顯（見附圖）。

附圖 染色結果

2.2 MC數、MC脫顆粒數和脫顆粒率 青鵬膏劑組和電針組大鼠穴區組織MC數量比較差異無統計意義（P＞0.05），但均明顯高于空白對照組（P＜0.05）。三組大鼠穴區組織脫顆粒的MC數量和MC脫顆粒率由高到低依次為青鵬膏劑組、電針組、對照組，兩兩比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。見附表：

附表 各組大鼠穴區組織MC數、脫顆粒MC數和MC脫顆粒率（±s，n=10）

附表 各組大鼠穴區組織MC數、脫顆粒MC數和MC脫顆粒率（±s，n=10）

與青鵬膏劑組比較：aP＜0.05；與電針組比較：bP＜0.05

組別 MC數（個） MC脫顆粒數（個） 脫顆粒率（%）青鵬膏劑組 37.80±5.18 25.00±3.53 64.60±3.41電針組 37.13±2.53 21.00±1.85a 56.88±5.92a空白對照組 26.60±2.07ab 8.40±0.89ab 31.40±1.52ab

3 討論

穴位貼敷療法是以中醫經絡學說和中藥學為理論依據，屬于針灸療法中的“天灸”類，又稱敷灸法或藥物灸法，是中醫的治療手段之一。穴位貼敷是通過藥物對穴區皮膚直接或間接作用而達到治療目的的一種給藥方法，可以繞過肝臟的首過效應及胃腸道消化酶的破壞，并降低藥物毒性和副作用，操作簡單，療效明確[6]。

研究表明[7-8]，MC聚集和脫顆粒反應是其參與機體生理病理反應的關鍵步驟。本研究發現，青鵬膏劑穴位貼敷組穴區皮膚組織MC數量明顯增多，脫顆粒率顯著高于電針組和對照組，說明針灸對穴區局部組織內MC的影響不如青鵬膏劑穴位貼敷，與以往研究報道一致[4]。本研究提示，青鵬膏劑穴位貼敷可激活穴區組織內的MC，使MC出現數量增多以及脫顆粒明顯增多等變化，且MC多沿神經或血管聚集，說明MC數量和脫顆粒情況的變化是青鵬膏劑穴位貼敷顯效的有關結果之一。有研究發現[9]，MC是針灸效應信號傳導放大的關鍵因素之一，其形態結構和所釋放的多種活性物質的變化，如組織胺、緩激肽、前列腺素、P物

質等，與人體的經絡現象有關，但本研究尚未觀察MC釋放

的多種活性物質的含量變化，為深入探討青鵬膏劑穴位貼

敷的藥理作用機制，有待進一步的研究。

[1]鐘世紅，古銳，王文.奇正青鵬膏治療骨關節疼痛方解及有效成分介紹[J].西南軍醫，2007，9(1)：88-90.

[2]賴少波，劉晉閩.損傷洗劑熱敷配合青鵬膏治療氣滯血瘀型頸椎病臨床觀察[J].黑龍江中醫藥，2014（，4）：17-18.

[3]唐蘇為,謝韶瓊,宋勛,等.青鵬膏劑封包治療慢性濕疹療效觀察[J].世界臨床藥物,2016,37(1)：38-41.

[4]羅明富，李翠紅，張棟，等.青鵬軟膏貼敷裸鼠穴區對皮膚內血管和肥大細胞的影響[J].中國中藥雜志，2008，33(7)：816-818.

[5]羅明富，宋曉晶.報告一種同時顯示肥大細胞、血管、神經等組織成分的新染色方法[J].中國組織化學與細胞化學雜志，2012，21(5)：499-500.

[6]劉西建，韓濤.中藥穴位貼敷研究現狀及思路[J].中醫藥信息，2014，31(5)：130-132.

[7]羅明富，何俊娜，郭瑩，等.電針和懸灸對大椎穴區MCs脫顆粒不同影響的研究[J].針刺研究，2007，32(5)：327-329.

[8]張迪，丁光宏，沈雪勇，等.肥大細胞功能對針刺大鼠“足三里”鎮痛效應的影響[J].針刺研究，2007，32(3)：147-152.

[9]潘萍，郭義.肥大細胞是針刺效應信號放大的關鍵因素之一[J].遼寧中醫雜志，2009，36(12)：2066-2068.

EFFECTS OF QINGPENG UNGUENTUM ACUPOINT STICKER ON NUMBER AND DEGRANULATION RATE OF RATS’ MASTOCYTE

QU Jing-yang, LIU Ding-ding, AN Na, et al
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To observe the effects of Qingpeng Unguentum Dazhui point sticker on number and degranulation rate of mastocyte in rats.Methods:30 male Wistar rats were randomly divided into blank control group, electroacupuncture group and Qingpeng Unguentum group with 10 rats in each group. The Dazhui point of rats in Qingpeng Unguentum group were stuck with 25mg Qingpeng Unguentum for 2 times a day; The Dazhui point of rats in electroacupuncture group were stimulated with electroacupuncture. Toluidine blue staining was used to observe the morphology, number and degranulation of mastocyte.Results:In Dazhui point area, the number and volume of mastocytes of rats in electroacupuncture group and Qingpeng Unguentum group increased; The cell membrane ruptured and mastocytes showed obviously degranulation; Moreover, the mastocytes distributed along nerves or blood vessels. The number of mastocytes in Dazhui point area of rats in electroacupuncture group and Qingpeng Unguentum group were obviously more than control group (P＜0.05). The quantity and ratio of degranulated mastocytes from high to low were Qingpeng Unguentum group, electroacupuncture group and control group, there had statistically signif i cant differences between every 2 groups (P＜0.05).Conclusions:Qingpeng Unguentum acupoint sticker can activate mastocyte, which show number increasing and degranulation.

Qingpeng Unguentum; Acupoint sticker; Dazhui point; Mastocytes; Degranulation

R285.5

A

1004-6879（2017）02-0093-03

2016-07-22）