雞沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗

強會萍 童江濱 江蘇省揚州市江都區仙女鎮畜牧獸醫站 225200

雞沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗

強會萍 童江濱 江蘇省揚州市江都區仙女鎮畜牧獸醫站 225200

為了了解江蘇省揚州地區雞沙門氏菌的感染和耐藥情況，采取對該地區5個雞場98份病雞組織進行細菌分離，并進行了藥敏試驗、血凝試驗和致病性試驗。經過分離，得到24株沙門氏菌，血凝鑒定表明，有18株呈陽性，其中5株均能使雛雞致死。藥敏試驗結果表明，這5株沙門氏菌對甲硝唑、青霉素、替米考星和氨芐西林有高耐藥性；對慶大霉素比較敏感。沙門氏菌不僅耐藥性特別嚴重，而且是危害該地禽類養殖場的主要病原菌。

沙門氏菌；分離鑒定；藥敏試驗

沙門氏菌病是一種由沙門氏菌屬細菌引起的一種人畜共患病。而沙門氏菌對于食品安全構成嚴重威脅，我國規?；B雞產業不斷發展，在帶來巨大經濟效益的同時，也產生了難以避免的危害?？股氐氖褂?，使得部分細菌產生極強的耐藥性，如沙門氏菌。針對這一要點，有關部門對江蘇省揚州地區雞沙門氏菌病原進行了分離鑒定和藥敏試驗，希望對今后防治該病提供扎實的理論依據。

1 材料

（1）病料來源。收集的98份來自江蘇省揚州地區5個雞場，從2016年3月至2016年5月疑患沙門氏菌病的病料組織。

（2）培養基。三糖鐵瓊脂（TSI）、SS 營養瓊脂培養基和HE營養瓊脂培養基，南京某技術有限公司。

（3）沙門氏菌屬診斷血清。沙門氏菌A～F群“O”多價診斷血清,中國生物技術集團公司江蘇生物制品研究所。

（4）試驗藥物。痢菌凈、替米考星、青霉素、甲硝唑、氨芐西林，江蘇南京動物藥業有限公司，批號：20150114；慶大霉素、頭孢拉定、頭孢唑啉，蘇州微生物試劑有限公司，批號：20151335[2]。

（5）試驗動物。1日齡健康雛雞,揚州某雞場。

2 方法

（1）病料采集。于發病地區采集病雞，臨床癥狀表現為怕冷，減食或廢食，排乳白色稀薄黏膩糞便，肛門周圍污穢，閉目呆立。致死，剖檢取其心、肝、脾、肺和腸于-20℃保存備用。

（2）沙門氏菌的分離鑒定。實驗室無菌，將病料組織劃線接種于HE營養瓊脂培養基和SS營養瓊脂培養基，37℃培養18h后觀察，挑取直徑約0.5mm的菌落進行革蘭氏染色，將革蘭氏陰性短桿菌接種于TSI中。

（3）血清型鑒定。挑取TSI中呈陽性的菌落進行沙門氏菌A～F群“O”多價診斷血清玻片凝集試驗，設生理鹽水為對照組。在平板上將瓊脂培養的細菌與少量生理鹽水混勻，再加入1滴沙門氏菌多價“O”抗血清，搖晃，觀察是否凝集。

（4）致病性試驗。取5株沙門氏菌接種于培養液中，37℃恒溫培養24h，取0.5mL菌液滴口于10只雛雞；設對照雞10只，滴口營養培養液。將雛雞隔離飼養，觀察發病和死亡情況。對死亡雞進行剖檢，觀察其病理變化。

（5）藥敏試驗。用Kirby-Bauer紙片法挑取單個菌落，分別接種在營養培養液中，37℃培養24h。用無菌生理鹽水制成0.5麥氏標準的菌懸液，吸取適量菌液在營養瓊脂平板內，表面均勻涂抹，蓋上平板，室溫放置幾分鐘，用小鑷子夾取藥敏紙片，貼于瓊脂表面，倒置，37℃培養16～18h。最后，觀察藥敏紙片周圍有無抑菌圈，并測量直徑（d）大小。結果判定標準d＞15mm為高度敏感；10.1＜d≤15mm為中度敏感；d≤10mm為耐藥。

3 結果

（1）病理變化。剖檢病雞的病理變化主要表現為肝臟土黃色、腎臟腫大、纖維素性心包炎和肝周炎。

（2）分離結果。在SS瓊脂平板上有透明或有黑色中心的菌落，HE瓊脂平板上有灰綠色、圓形、黑色中心的菌落；取單個菌落涂片，革蘭氏染色，在油鏡下觀察，發現大量單個存在小短、兩端鈍圓的革蘭陰性桿菌；接種于TSI表現為斜面變紅，底層反應呈陽性，產硫化氫和產酸，結果表明此分離菌疑似為沙門氏菌。玻片凝集試驗結果：共有18個菌株呈陽性，其中5株呈強陽性，命名為 SH-1、SH-2、SL-3、SL-4 和 SI-5。

（3）致病性試驗結果。雛雞接種強陽性的5株沙門氏菌，雛雞接種5h后開始死亡。病雞臨床表現為精神萎頓、呆立不動、怕冷、食欲廢絕，最后死亡。剖檢結果顯示，病雞腸出血，腎腫大，肝呈土黃色。

（4）藥敏試驗結果。5株沙門氏菌敏試驗的結果，沙門氏菌菌株對慶大霉素比較敏感；對甲硝唑、青霉素、替米考星和氨芐西林等有較高的耐藥性；而對痢菌凈、頭孢唑啉、頭孢拉定等有不同程度的耐藥性。

4 小結與討論

（1）此次試驗結果顯示，經過分離鑒定得到的5株沙門氏菌，對大部分抗生素都具有不同程度的耐藥性。而且當地雞沙門氏菌的耐藥性比較嚴重[3]。

（2）產生耐藥性的原因是長期盲目用藥和喂以抗生素含量高的飼料。鑒于病原菌容易產生耐藥性的這一特點，建議各地養殖場在治療該病時，盡量先進行藥敏試驗。臨床治療沙門氏菌病時應根據本地區藥敏結果合理選用抗生素。為了防止盲目用藥造成的損失，應當先選出敏感藥物再進行適當、有效的治療措施。此外，在使用抗菌藥物來預防治療的基礎上，也要考慮用一些合適的生物制劑。

（3）檢疫并淘汰帶菌雞，建立好無菌雞群，從源頭上阻斷傳染源，斷開其傳播途徑，這些場是徹底凈化該病的科學選擇。

[1]楊曉輝，楊增岐．陜西關中地區雞白痢現狀調查［J］．動物醫學進展，2008,29（9）：103-108．

[2]趙興緒，王雯慧，伏小平等．畜禽疾病診斷指南［M］．北京：中國農業出版社，2010．

[3]中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二部(M).農業出版社，2000：256.