酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中藥對對氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠睡眠作用的影響*

李峰杰，何 萍，趙 樂，郝 偉，李貽奎

（中國中醫科學院西苑醫院李連達院士研究室，北京 100091）

·實驗研究·

酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中藥對對氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠睡眠作用的影響*

李峰杰，何 萍，趙 樂，郝 偉，李貽奎△

（中國中醫科學院西苑醫院李連達院士研究室，北京 100091）

目的觀察酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中藥對失眠模型大鼠睡眠作用的影響。方法 大鼠腹腔注射對氯苯丙氨酸（PCPA）混懸液制備大鼠失眠模型。將造模成功大鼠隨機分為模型對照組、地西泮組、酸棗仁組、石菖蒲組、夜交藤組、百合組、郁金組，另設空白對照組。地西泮組（1 g／kg）、酸棗仁組（18 g／kg）、石菖蒲組（12 g／kg）、夜交藤組（18 g／kg）、百合組（14.4 g／kg）、郁金組（12 g／kg）大鼠連續7 d給予相應濃度藥液，模型對照組和空白對照組連續7 d給予生理鹽水灌胃。給藥期間，觀察大鼠一般狀態；給藥結束后，觀察大鼠體質量變化、睡眠潛伏期、總睡眠時間。結果 地西泮組、酸棗仁組、夜交藤組、百合組、郁金組、石菖蒲組大鼠的睡眠潛伏期明顯短于模型對照組，其中地西泮組、酸棗仁組、夜交藤組、百合組大鼠的睡眠潛伏期有顯著性縮短（P＜0.01）；地西泮組、酸棗仁組、百合組、郁金組大鼠的睡眠持續時間明顯長于模型對照組，其中地西泮組大鼠的睡眠持續時間延長最顯著（P＜0.01），酸棗仁組、百合組、郁金組有延長趨勢。結論 酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金單味藥對改善失眠大鼠模型睡眠作用具有一定效果，但尚需進一步深入研究。

失眠；大鼠；酸棗仁；石菖蒲；夜交藤；百合；郁金；對氯苯丙氨酸

失眠有3個癥狀特點，即入睡困難，睡眠不深且易驚醒，早醒且醒后疲乏或缺乏清醒感。西醫主要依靠化學藥物進行治療，如苯二氮 類、抗抑郁藥、巴比妥類等，雖有一定療效，但易成癮，產生依賴性，長期應用還會產生一定的耐藥性或不良反應，出現健忘、注意力不集中、無力、情緒低落等現象。目前研究表明，中藥治療失眠不良反應小，無藥物依賴性和成癮性。本研究中選擇臨床常用的具有失眠治療作用的5種單味中藥——酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金對失眠模型大鼠睡眠的作用進行實驗研究，旨在為臨床中醫藥治療失眠提供科學參考。

1 材料與方法

1.1 動物與試藥

1.1.1 動物

Wistar大鼠，雄性，清潔級，100只，體質量為150～170 g，購于京華阜康科技股份有限公司，大鼠飼養于中國中醫科學院西苑醫院普通動物房。實驗動物使用許可證號為SYXK（京）2009-0001。飼養溫度21～26℃，相對濕度40%～70%，10／14 h明暗交替照明。

1.1.2 試藥及制備

對氯苯丙氨酸（PCPA，美國 Sigma公司，批號為SHBG8045V）。

地西泮（北京益民藥業有限公司，批號為20150903），取8片地西泮（20 mg），加入200 mL生理鹽水，制備質量濃度為0.1 g／L的水溶液。

酸棗仁（河北百草康神藥業有限公司，批號為1606011），精密稱取酸棗仁378 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.8 g／mL。

石菖蒲（河北百草康神藥業有限公司，批號為1601012），精密稱取石菖蒲252 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.2 g／mL。

夜交藤（河北百草康神藥業有限公司，批號為1605021），精密稱取夜交藤378 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.8 g／mL。

百合（河北百草康神藥業有限公司，批號為1606011），精密稱取百合302.4 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.44 g／mL。

郁金（河北百草康神藥業有限公司，批號為1601012），精密稱取郁金252 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.2 g／mL。

1.2 造模

1.2.1 造模方法

將大鼠適應性喂養3 d，大鼠自由進食飼料和水。3 d后稱定體質量，隨機分成空白對照組和造模組。造模組腹腔注射PCPA混懸液，連續注射2 d，PCPA臨用前按大鼠體質量，用量350 mg／kg，用弱堿性生理鹽水配置成混懸液備用，空白對照組腹腔注射等體積弱堿性生理鹽水，第1次腹腔注射36 h后，大鼠出現晝夜節律缺失，日間與夜晚皆活動不斷。戊巴比妥鈉翻正試驗，空白對照組與造模組睡眠潛伏期、總睡眠時間差異有統計學意義，提示造模成功。

1.2.2 造模成功的判定

第1次腹腔注造模藥36 h后，空白對照組和造模組均腹腔注射戊巴比妥鈉50 mg／kg（預試驗測得引起100.00%大鼠睡眠的最小閾劑量），提起大鼠尾巴，將大鼠腹部朝上放在墊塊上。記錄大鼠的睡眠潛伏期及睡眠持續時間，以翻正反射消失為發生睡眠，以翻正反射恢復為覺醒。如果懷疑翻正反射是否確定復原，于第1次翻正后馬上重新背位平躺，如在1 min之內又自動翻過來則前1次的時間即為復原時間，否則以第2次翻過來的時間為準?？瞻讓φ战M與造模組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），表示造模成功。詳見表1和圖1。

表1 兩組大鼠造模結束時戊巴比妥鈉翻正試驗結果比較（±s，min）

表1 兩組大鼠造模結束時戊巴比妥鈉翻正試驗結果比較（±s，min）

注：與空白對照組比較，*P＜0.01。表2同。

組別空白對照組（n＝11）造模組（n＝75）睡眠潛伏期3.27±0.65 5.48±1.02*睡眠持續時間89.45±11.69 72.08±7.25*

圖1 大鼠造模結構戊巴比妥鈉翻正試驗柱狀圖

1.3 動物分組及給藥

空白對照組(11只)大鼠連續7 d給予生理鹽水灌胃。將造模成功的大鼠分為7組，其中模型對照組、地西泮組各10只，酸棗仁組、石菖蒲組、夜交藤組、百合組、郁金組各11只。模型對照組大鼠腹腔注射PCPA后，連續7 d給予生理鹽水灌胃；地西泮組(1 g／kg)、酸棗仁組(18 g／kg)、石菖蒲組(12 g／kg)、夜交藤組(18 g／kg)、百合組(14.4 g／kg)、郁金組(12 g／kg)，大鼠腹腔注射PCPA后，分別連續7 d灌胃相應藥液。

1.4 觀察指標

1.4.1 一般狀態

觀察大鼠的一般情況，包括精神狀態、皮毛顏色、取食量、飲水量、對外界刺激的反應、死亡情況等。

體質量變化：分別于分組給藥前和試驗結束時稱定體質量，觀察其增加量。

1.4.2 睡眠潛伏期、總睡眠時間

第1次腹腔注射造模藥36 h后，各組均腹腔注射戊巴比妥鈉50 mg／kg（預試驗測得引起100.00%大鼠睡眠的最小閾劑量），提起大鼠尾巴，將大鼠腹部朝上放在墊塊上。記錄大鼠的睡眠潛伏期及睡眠持續時間，以翻正反射消失為發生睡眠，以翻正反射恢復為覺醒。如懷疑翻正反射是否真正復原，于第1次翻正后立即重新背位平躺，如在1 min內又自動翻過來則前1次的時間即為恢復時間，否則以第2次翻過來的時間為準。從給藥到翻正反射消失的時間為睡眠潛伏期，從翻正反射消失到恢復的時間為總的睡眠時間。

1.5 統計學處理

采用SPSS 16.0統計學軟件進行分析。數據用均值±標準差（±s）表示，組間比較采用獨立樣本 t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般狀態

空白對照組大鼠精神狀態良好，活動機靈，反應敏捷，毛發有光澤，體質量明顯增加；模型對照組大鼠精神亢奮，毛硬粗糙且豎起無光澤，易激惹，飲食量有所減少，消瘦；各中藥組和陽性藥組大鼠精神狀態、活動及反應情況不如空白對照組大鼠。

在給藥結束后，進行戊巴比妥翻正試驗注射戊巴比妥后，部分組別出現大鼠死亡和翻正反射未消失，具體為：空白對照組死亡1只，1只翻正反射未消失；模型對照組死亡1只；地西泮組1只翻正反射未消失；夜交藤組死亡1只，1只翻正反射未消失；郁金組死亡1只，2只翻正反射未消失；石菖蒲組死亡1只，1只翻正反射未消失。以上大鼠均不計入試驗結果。

2.2 體質量增加量

結果顯示，與空白對照組比較，模型組和各給藥組大鼠體質量增加量均低于空白對照組，其中模型對照組與空白對照組差異顯著(P＜0.01)；與模型組比較，各給藥組大鼠體質量增加量均高于模型組，但差異無統計學意義。詳見表2和圖2。

表2 各組大鼠試驗結束時體質量增加情況（±s，g）

表2 各組大鼠試驗結束時體質量增加情況（±s，g）

組別空白對照組（n＝9）模型對照組（n＝9）地西泮組（n＝9）酸棗仁組（n＝11）夜交藤組（n＝9）百合組（n＝11）郁金組（n＝8）石菖蒲組（n＝9）體質量增加量59.89±5.78 38.33±8.35*48.56±15.11 47.36±12.67 51.33±14.15 41.73±21.74 42.50±23.54 53.22±18.55

2.3 睡眠潛伏期、總睡眠時間

結果表明，與模型對照組比較，地西泮組、酸棗仁組、夜交藤組、百合組、郁金組、石菖蒲組的睡眠潛伏期均縮短，其中地西泮組、酸棗仁組、夜交藤組、百合組有顯著性縮短（P＜0.01）；與模型對照組比較，地西泮組、酸棗仁組、百合組、郁金組的睡眠持續時間均延長，其中地西泮組延長最顯著（P＜0.01）。詳見表3和圖3。

表3 各組大鼠給藥結束后戊巴比妥鈉翻正試驗結果比較（±s，min）

表3 各組大鼠給藥結束后戊巴比妥鈉翻正試驗結果比較（±s，min）

注：與空白對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組相比，＃P＜0.01。

組別空白對照組（n＝9）模型對照組（n＝9）地西泮組（n＝9）酸棗仁組（n＝11）夜交藤組（n＝9）百合組（n＝11）郁金組（n＝8）石菖蒲組（n＝9）睡眠潛伏期2.67±0.71 3.67±1.23**2.44±0.53＃2.36±0.51＃2.56±0.53＃2.45±0.69＃3.25±0.89 3.11±0.78睡眠持續時間106.89±12.23 81.44±13.22*115.89±13.72＃109.00±48.21 83.00±14.90*107.09±28.08 102.88±31.17 76.56±7.54**

3 討論

對氯苯丙氨酸大鼠失眠模型是目前公認的經典動物失眠模型。造模過程主要是給大鼠連續2 d腹腔注射一定量的PCPA混懸液，PCPA為5-羥色胺(5-HT)合成抑制劑，可選擇性地作用于色氨酸羥化酶，抑制酶活性，足量給予時所致失眠可持續2周之久[1]。因此，PCPA混懸液的制備決定造模的成敗。

有研究顯示，用弱堿性生理鹽水溶解PCPA可得PCPA混懸液[2]。但本課題組在試驗過程中發現，用弱堿性生理鹽水溶解PCPA后，PCPA完全浮在生理鹽水上層，生理鹽水中只有極少量的PCPA懸浮，達不到腹腔注射要求。分析原因，可能是在本研究條件下，PCPA在弱堿性生理鹽水溶解性不夠，需添加助溶劑幫助溶解PCPA。因此，本課題組先用二甲基亞砜（DMSO）溶解PCPA，后用生理鹽水溶解，得到了PCPA懸浮液，達到了腹腔注射的要求。

圖2 各組大鼠試驗結束時體質量增加量

圖3 各組大鼠給藥結束后戊巴比妥鈉翻正試驗柱狀圖

本研究中，預試驗測得引起100.00%大鼠睡眠的最小閾劑量為50 mg／kg，但給藥結束后進行戊巴比妥翻正試驗時，部分組別大鼠出現翻正反射未消失及死亡現象。通過注射預試驗測定的戊巴比妥劑量(50 mg／kg)，仍有部分大鼠翻正反射未消失，可能與大鼠第1次注射戊巴比妥后出現戊巴比妥耐藥有關；部分大鼠出現死亡現象，可能與大鼠個體差異相關。因此，以后再進行此類研究時，最好將每組大鼠預設只數多出幾只，以免樣本數量達不到預先設定數量，導致因樣本量較少而產生試驗誤差。

酸棗仁，味甘、酸，性平，歸心、肝、膽經，有養心益肝、安神、斂汗之功效[3]，屬于養心安神藥。在治療失眠的中藥中排名第一，其用藥頻次和頻率遠高于其他中藥，是失眠治療的代表中藥，為多數醫家在處方時選用[4]。本研究結果顯示，酸棗仁可顯著縮短睡眠潛伏期（P＜0.01），且有延長睡眠持續時間趨勢。

夜交藤，也叫首烏藤，味甘、微苦，性平，歸心、肝經，有養血安神、祛風通絡之功效[3]，屬于養心安神藥。因為夜交藤善于養血，故最宜于血虛所致失眠。國醫大師朱良春認為，安神中藥以夜交藤的催眠作用最佳[5]。本研究中，夜交藤可顯著縮短睡眠潛伏期（P＜0.01）。

百合，味甘，性微寒，歸肺、心、胃經，具有養陰潤肺、清心安神之功效[3]。百合臨床常作為主要藥物組方治療各種類型的失眠癥狀[6-8]。本研究結果顯示，百合可顯著縮短睡眠潛伏期（P＜0.01），且有延長睡眠持續時間趨勢。

郁金，味辛、苦，性寒，歸肝、膽、心經，有活血止痛、行氣解郁、清心涼血之功效[3]。有醫師將郁金作為主藥進行組方治療失眠[9-10]，效果明顯。本研究中，郁金對睡眠潛伏期無明顯作用，但有延長睡眠持續時間趨勢。

石菖蒲，味辛、苦，性溫，歸心、胃經，有開竅醒神、化濕和胃、寧神益志之功效[3]。有學者選取失眠作為研究病種，利用“中醫臨床科研信息共享系統”數據倉庫存儲的辨證論治失眠實際診療數據，采用復雜網絡等數據挖掘方法，開展多醫師辨證論治失眠的有效治療中藥的研究，發現失眠有效核心藥物的主體構成有酸棗仁、石菖蒲等[11]。本研究中，郁金對睡眠潛伏期和睡眠持續時間均無顯著作用，可能與本試驗條件、試驗樣本數量較少及試驗誤差有關。

綜上所述，酸棗仁、夜交藤、百合、郁金等單味藥對改善失眠模型大鼠的睡眠作用具有一定效果，或可縮短睡眠潛伏期或延長睡眠持續時間，對治療失眠有一定效果，尚需進一步深入研究。

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Effect of Semen Ziziphi Spinosae，Acorus Tatarinowii，Caulis Ploygoni Multiflori，Bulbus Lilii，Radix Curcumae on the Sleeping of Insomnia Rat M odels

Li Fengjie，He Ping，Zhao Le，Hao Wei，Li Yikui
（The Academician Research Laboratory of Li Lianda，Xiyuan Hospital CACMS，Beijing，China 100091）

Objective To explore the effect of Semen Ziziphi Spinosae，Acorus Tatarinowii，Caulis Ploygoni Multiflori，Bulbus Lilii，Radix Curcumae on the sleeping of insomnia rat models.M ethods Intraperitoneal injection of PCPA was applied to establish the model of insomnia rats.The successful model rats were randomly divided into the model control group，the positive control group，the Diazepam group（1 g／kg），the Ziziphi Spinosae group（18 g／kg），the Acorus Tatarinowii group（12 g／kg），the Caulis Ploygoni Multiflori group （18 g／kg），the Bulbus Lilii group（14.4 g／kg），and the Radix Curcumae group（12 g／kg）.In addition，a blank control group was set.The rats of Diazepam group，Ziziphi Spinosae group，Acorus Tatarinowii group，Caulis Ploygoni Multiflori group，Bulbus Lilii group，Radix Curcumae group were given corresponding concentration solution for 7 d，and the blank control group and the model control group were given normal saline for 7 d.During the administration period，the rats were observed.After the administration，the changes of body weight，sleep latency and total sleep time were observed.Results Compared with the model control group，the sleep latency of every drug administration group reduced；and the sleeplatency of Diazepam group，Ziziphi Spinosae group，Acorus Tatarinowii group，Caulis Ploygoni Multiflori group reduced obviously（P＜0.01）.The total sleep time of Diazepam group，Ziziphi Spinosae group，Caulis Ploygoni Multiflori group，Bulbus Lilii group increased.And tatarinowii group increased obviously（P＜0.01）.Conclusion Single medication of Semen Ziziphi Spinosae，Acorus Tatarinowii，Caulis Ploygoni Multiflori，Bulbus Lilii，Radix Curcumae has a certain effect on improving sleep function in insomnia rats，but further study is sill needed.

insomnia；rat；Semen Ziziphi Spinosae；Acorus Tatarinowii；Caulis Ploygoni Multiflori；Bulbus Lilii；Radix Curcumae；PCPA

R285.5；R282.71

A

1006-4931(2017)06-0001-04

2017-01-08)

10.3969／j.issn.1006-4931.2017.06.001

國家自然科學基金面上項目[81573958]。

李峰杰，男，博士研究生，助理研究員，研究方向為中藥藥理學，（電子信箱）lfj1210＠126.com?！?/p>

李貽奎，男，研究員，主任醫師，研究方向為中藥藥理學，（電子信箱）lyikui＠163.com。