一種制劑中中藥材原料質量控制研究

賈福懷 涂建飛 涂宏建 王俊 陶剛

摘要[目的]研究不同產地藥材的質量指標，建立制劑及其原料的質量標準。[方法]利用2015年版《中國藥典》方法和高效液相法測定不同產地藥材的各項指標，采用水提醇沉法測定原料和制劑中多糖的含量。[結果]得到了5個不同產地藥材及其制劑的各種指標含量，考察了不同產地中藥材原料的質量指標。[結論]建立了中藥材原料和制劑產品的部分質量標準。

關鍵詞制劑；原料；產地；水提醇沉；質量標準

中圖分類號R286文獻標識碼A文章編號0517-6611（2017）05-0114-04

Study on Quality Control of Chinese Herbal Medicines in One Preparation

JIA Fuhuai， TU Jianfei， TU Hongjian et al

（Ningbo Yufangtang Biological Technology Co.， Ltd.， Ningbo， Zhejiang 315012）

Abstract[Objective] To study the quality index of the medicinal materials in different areas and establish the quality standard of the preparation and raw materials. [Method] Various indexes of medicinal materials in different areas were determined by HPLC and method of Chinese Pharmacopoeia 2015. The content of polysaccharides in raw materials and preparations was determined by water extraction and alcohol precipitation. [Result] The content of each index of five herbs and their preparations were obtained，the quality indexes of raw materials of Chinese herbal medicines in different areas were investigated. [Conclusion] The quality standards of the Chinese herbal medicine raw materials and preparations were established.

Key wordsPreparation；Raw material；Producing area；Water extraction and alcohol precipitation；Quality standard

作者簡介賈福懷（1963—），男，浙江寧波人，高級工程師，從事健康產品開發研究。

收稿日期2016-02-14

早在《神農本草經》中，對于中藥材的產地選擇就有“土地所生，真偽陳新”的論述，因此，中藥材產地的適宜性對藥材質量的影響是至關重要的[1]。我國古代醫藥學家經過長期使用、探索、觀察和比較，發現不同產地其質量優劣也不同，而且也逐漸形成了“道地藥材”的概念[2-3]。藥材由于溫度、土壤、光照、氣候等生態因子的不同，而導致品質上的差異[4]。益智和山藥藥材，藥典中缺少有效成分和多糖等常規檢查項目，難以控制藥材質量[5-6]。研究發現，益智溫腎縮尿物質基礎是石油醚部位，其主要化學成分為圓柚酮[7]，山藥的藥理活性成分為薯蕷皂苷[8]。為更好地開展項目，對制劑中主要藥材益智、山藥藥材進行產地、質量、成分等研究，精選道地藥材，確保藥材活性成分含量，保證臨床療效。筆者通過測定不同產地中藥材的成分含量，并進行對比，研究不同產地藥材的質量指標，建立制劑及其原料的質量標準。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1

試材。益智、山藥為不同產地的樣品，通過一定的生產工藝得到制劑樣品。

1.1.2

儀器。紫外分光光度計（TU-1800，北京普析通用儀器有限責任公司）；電子分析天平（ME204/02，METTLER TOLEDO）；電熱恒溫水浴鍋（HH-4，國華電器有限公司）；超聲波清洗器（KH-250DB，昆山禾創超聲儀器有限公司）；電熱鼓風干燥箱（DHG-9140A，上海一恒科學儀器有限公司）。

1.1.3

試劑與藥品。甲醇、濃硫酸、苯酚、無水乙醇均為分析純；葡聚糖標準品（批號110833-201508，中國食品藥品檢定研究院）；圓柚酮標準品（批號101123-201509，中國食品藥品檢定研究院）；薯蕷皂苷標準品（批號111707-201506，中國藥品生物制品檢定所）；蒸餾水。

1.2方法

1.2.1益智原料的測定。

1.2.1.1

水分、灰分、揮發油的測定。水分測定參照2015年版《中國藥典》四部（通則0832第四法）水分測定法（甲苯法）；灰分測定參照2015年版《中國藥典》四部（通則2302）灰分測定法；揮發油含量測定參照2015年版《中國藥典》四部（通則2204）揮發油測定法。

1.2.1.2

多糖含量的測定。

（1）樣品溶液的制備。精密稱取樣品2.0 g，置于100 mL容量瓶中，加入蒸餾水80 mL，放在沸水浴上加熱2 h，冷卻至室溫，加蒸餾水補足至刻度，混勻、過濾，收集濾液；精密移取濾液5.0 mL，置于50 mL離心管中，加入無水乙醇20 mL，混勻，以3 000 r/min的離心機上離心5 min，棄去上清液，剩余殘渣用5.0 mL熱水溶解、冷卻，加入20 mL無水乙醇，離心，棄去上清液，重復2次。殘渣用熱水溶解后，轉移至10 mL容量瓶，冷卻至室溫后定容，混勻；精密移取此溶液4 mL置于20 mL離心管中，加入100 g/L氫氧化鈉溶液2.0 mL、銅試劑溶液2.0 mL，在沸水浴中煮沸20 min，冷卻后以3 000 r/min轉速離心5 min，棄去上清液。剩余殘渣用數毫升洗滌液洗滌，經過離心后棄去上清液，反復操作3次，剩余殘渣用硫酸溶液2.0 mL溶解并且轉移至50 mL容量瓶中，管壁用水清洗一起轉移至容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度、混勻，作為樣品測定液[9-10]。

（2）標準溶液的制備。精密稱取在105 ℃干燥至恒重的葡聚糖標準品0.5 g，加蒸餾水水溶解，并定容至50 mL，混勻，置于冰箱中保存，即得溶液濃度為10.0 mg/mL的葡聚糖，精密吸取此濃度溶液1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混勻，得到標準溶液，置于冰箱中保存。

（3）標準曲線的繪制。精密吸取葡聚糖標準溶液0、01、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL分別置于25 mL比色管中，補水至2.0 mL，加入50 g/L苯酚溶液1.0 mL，小心加入濃硫酸10.0 mL，置于旋轉混合器上小心混勻，混勻后放置在水浴中煮沸2 min，冷卻后以空白試劑作為參比溶液，用紫外分光光度計在485 nm波長條件下測定吸光度。以葡聚糖濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為y=10136x-0.002（R2=0.999 3），表明葡聚糖濃度在0.01～010 mg/mL與吸光度呈良好的線性關系。

（4）精密度試驗。精密移取標準溶液6份，每份取0.2 mL，按“1.2.1.2”標準曲線繪制中方法進行顯色，測定，計算RSD值。

（5）重復性試驗。取同一份樣品6份，每份約2.0 g，按“1.2.1.2”標準曲線繪制中方法進行制樣、顯色，測定，計算RSD值。

（6）穩定性試驗。取同一供試品溶液，按“1.2.1.2”標準曲線繪制中方法進行顯色，分別在0、1、2、4、6、8 h后測定吸光度，計算RSD值。

（7）回收率試驗。精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的對照品溶液，按“1.2.1.2”標準曲線繪制中方法進行顯色，測定吸光度，計算回收率。

1.2.1.3圓柚酮含量的測定。

（1）色譜分析條件。ZORBAX SB-C18 柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相采用乙腈〖DK〗∶水（65〖DK〗∶35）；檢測波長為235 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫35 ℃。

（2）樣品溶液的制備。精密稱取益智粗粉約1.0 g，置于具塞的錐形瓶中，加入甲醇100 mL，稱重，超聲30 min，放冷至室溫，再次稱重，用甲醇補足重量，搖勻，過濾，取續濾液，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，即得。

（3）標準溶液的制備。精密稱取圓柚酮對照品適量，用甲醇稀釋制成濃度為1 mg/mL對照品溶液。

（4）標準曲線的繪制。精密移取圓柚酮的對照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，分別定容于100 mL容量瓶中，搖勻，過濾，取續濾液，用濾膜（0.45 μm）過濾，即得。以對照品濃度為橫坐標、峰面積值為縱坐標繪制標準曲線，得到回歸方程為Y=321 931X +42.164（R2=0.999 8），表明圓柚酮濃度在001～0.10 mg/mL與峰面積呈良好的線性關系。

（5）精密度試驗。精密移取濃度為0.02 mg/mL的標準溶液6份，重復進樣6次，計算峰面積RSD值。

（6）重復性試驗。取同一份樣品6份，分別按“1.2.1.3”樣品溶液的制備方法進行制備，進樣，測定，計算RSD值。

（7）穩定性試驗。取同一益智樣品的供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8 h后進樣，測定峰面積，計算RSD值。

（8）回收率試驗。精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入濃度為0.02 mg/mL的圓柚酮對照品溶液1 mL，按“1.2.1.3”樣品溶液制備方法進行制備，進樣，測定峰面積，計算回收率。

1.2.2山藥原料的測定。

1.2.2.1

水分、總灰分、水溶性浸出物、二氧化硫的測定。水分測定參照2015年版《中國藥典》四部（通則0832第二法）烘干法；總灰分測定參照2015年版《中國藥典》四部（通則2302）灰分測定法；水溶性浸出物測定參照2015年版《中國藥典》四部（通則2201）冷浸法；二氧化硫測定參照2015年版《中國藥典》四部（通則2331）酸堿滴定法。

1.2.2.2

多糖含量的測定。取不同產地的山藥樣品粉末，按“1.2.1.2”中樣品溶液制備方法進行制備，按照標準曲線的繪制方法進行顯色，測定。

1.2.2.3

薯蕷皂苷含量的測定。

（1）色譜分析條件。ZORBAX SB-C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為甲醇〖DK〗∶水（90〖DK〗∶10）；流速為1.0 mL/min；柱溫35 ℃；檢測波長210 nm。

（2）樣品溶液的制備。精密稱取山藥粉末1.0 g，置于具塞的錐形瓶中，加入甲醇100 mL，稱重，超聲30 min，放冷至室溫，再次稱重，用甲醇補足重量，搖勻，過濾，取續濾液，用微孔濾膜（045 μm）過濾，即得。

（3）標準溶液的制備。取薯蕷皂苷標準品15.1 mg，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇使其溶解至刻度，搖勻，得到標準品溶液。

（4）標準曲線的繪制。精密量取標準溶液1、2、4、6、8 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，過濾，取續濾液，用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，即得對照品工作液。以對照品濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得到回歸方程Y=3 477 878.25X-12 833.72（R2=0.999 2），表明薯蕷皂苷濃度在0.06～0.48 mg/mL與峰面積具有良好的線性關系。

（5）精密度試驗。精密移取濃度為0.12 mg/mL的標準品溶液6份，進樣，計算峰面積的RSD值。

（6）重復性試驗。取同一份樣品6份，分別按“1.2.2.3”中樣品溶液制備方法進行制備，進樣，測定其峰面積，計算RSD值。

（7）穩定性試驗。取同一山藥樣品的供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8 h后進樣，測定其峰面積，計算RSD值。

（8）回收率試驗。精密稱取已測知含量的樣品6份，分別加入薯蕷皂苷的標準溶液0.4 mL，按“1.2.2.3”中樣品溶液制備方法進行制備，進樣，測定其峰面積，計算回收率。

1.2.3制劑的測定。

1.2.3.1水分測定。參照食品安全國家標準GB 5009.3 食品中水分的測定第1法。

1.2.3.2多糖含量測定。取不同批次制劑樣品粉末，按“12.1.2”中樣品溶液制備方法進行制備，按照標準曲線的繪制方法進行顯色，進行測定。

2結果與分析

2.1益智原料的測定

2.1.1

水分、灰分、揮發油。由表1可知，海南產地的益智綜合質量較好，以海南瓊中的成分指標較高，廣東和福建產地益智的揮發油和圓柚酮含量較低，而且福建平和產地的益智水分含量太高，不適合采購使用，故以后選擇益智原料時盡量選擇產地為海南瓊中。

2.1.2

多糖含量。方法學考察結果顯示，精密度試驗計算的RSD為1.03%，表明儀器的精密度良好；重復性試驗計算的RSD為1.97%，表明重復性良好；穩定性試驗計算的RSD為2.36%，表明該供試品溶液在8 h內穩定。在加樣回收率試驗中（表2），平均回收率為99.81%，RSD為1.71%，均符合相關要求，表明測定方法可靠，準確性較好。

2.1.3

圓柚酮含量。由圖2可知，圓柚酮的標準品色譜峰基本沒有雜峰，益智樣品中圓柚酮的色譜峰沒有其他雜峰干擾，與其他雜峰分離度良好。方法學考察結果顯示，精密度試驗計算的RSD為0.20%，表明儀器的精密度良好；重復性試驗計算的RSD為1.20%，表明該方法重復性良好；穩定性試驗計算的RSD為0.32%，表明供試品溶液在8 h內穩定。在加樣回收率試驗中（表3），平均回收率為98.87%，RSD為1.01%，均符合相關要求，表明該方法測定益智中圓柚酮含量準確性好。

2.2山藥原料的測定

由表4可知，河南沁陽的山藥中薯蕷皂苷的含量最高，山東菏澤的含量最低，河南產地的山藥整體質量較好，山東菏澤產地的山藥多糖過低，不宜作為采購的原料產地，故選擇山藥時應該盡量選擇產地為河南沁陽，其次再選擇河南溫縣和武陟。

從圖3可以看出，薯蕷皂苷色譜峰濃度較高，分離度良好，且樣品中薯蕷皂苷的色譜峰附近基本沒有雜峰干擾，分離度良好，符合測定要求。薯蕷皂苷方法學考察結果顯示，精密度試驗計算的RSD為0.31%，表明儀器的精密度良好；重復性試驗計算的RSD為2.45%，表明該方法重復性良好；穩定性試驗計算的RSD為2.39%，表明供試品溶液在8 h內穩定。在加樣回收率試驗中（表5），平均回收率為10034%，RSD為1.41%，均符合測定要求，表明該方法測定薯蕷皂苷含量準確性較好。

2.3制劑中水分、多糖含量的測定

由原藥材加工成制劑之后，生產出來的制劑成品經包裝后為食品，要符合食品要求，在此由于篇幅有限，主要測定了制劑中多糖和水分指標。結果發現（表6），在5批產品中，水分平均值為5.89%，多糖含量平均值為0.73%，均符合標準。

3結論與討論

根據試驗結果經過各種影響因素綜合考慮，益智藥材的質量標準中水分不得超過12.0%，總灰分不得超過10.0%，酸不溶性灰分不得超過1.0%，揮發油成分不得低于1.0%，多糖成分不得低于5.0%，圓柚酮成分不得低于0.15%；山藥質量標準為水分不得超過12.0%，總灰分不得超過2.0%，水溶性浸出物不得低于4.0%，二氧化硫殘留量不得超過100 mg/kg，多糖成分不得低于10.0%，薯蕷皂苷成分不得低于10.0 mg/g，制劑中水分不得超過10.0%，多糖成分不得低于0.2%。

該試驗為制劑的原料益智和山藥及制劑產品本身建立了質量控制標準，由于文章篇幅限制，沒有對制劑中其他原料的質量控制進行討論。制劑的質量標準是根據原料的應用而定，原料的質量直接影響制劑產品的質量，該試驗研究了不同產地的原料對制劑產品的影響。

在企業生產過程中使用的原料，要從多個方面進行考察，而不是把原料歸屬到中藥還是食品等其他類別，然后再去找到相應的標準進行檢驗，應該建立適合自己本身產品的原料質量標準和質量驗收標準，對于制劑中其他原料的質量標準還需進一步研究。

參考文獻

[1] 陳德煜.淺析中藥材產地對質量影響[J].中國中醫藥現代遠程教育，2012，10（1）：80-81.

[2] 陳勇，楊敏，閔志強，等.中藥學基本概念辨析[J].四川中醫，2015，33（8）：24-27.

[3] 吳普等述，孫星衍，孫馮翼輯.神農本草經[M].北京：科學技術文獻出版社，2003：172.

[4] 陳士林.地道藥材與生態型的相關性[J].中草藥，1988，10（8）：2.

[5] 李文兵，胡昌江，龍蘭艷，等.鹽益智仁飲片的質量控制研究[J].中國中藥雜志，2010，35（24）：3278-3281.

[6] 張敏，杜琳，黃桂東，等.山藥總皂甙的提取研究[J].中藥材，2007，30（7）：854-857.

[7] 黃勤挽，胡昌江，李興迎，等.中藥益智仁鹽炙前后揮發油成分的對比研究[J].中國藥業，2008，17（5）：3-4.

[8] 劉影，史姍姍，汪財生.浙江紫山藥營養成分及薯蕷皂苷元含量測定[J].安徽農業科學，2010，38（9）：4563-4564，4567.

[9] 王光亞.保健食品功效成分檢測方法[M].北京：中國輕工業出版社，2002：9-20.

[10] 李棣華，劉俊紅，伍孝先.紫外可見分光光度法測定不同產地柴胡中多糖含量[J].天津中醫藥，2010，27（4）：342-343.