艾灸對亞急性衰老大鼠胸腺CD4+T細胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB和I-κB蛋白表達的影響

崔云華 沈文賓 吳煥淦 周次利 雷 菲 黃立師 趙 琛 李 璟

(1 上海中醫藥大學上海市針灸經絡研究所,上海,200030; 2 上海中醫藥大學,上海,201203; 3 上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院,上海,200437)

實驗研究

艾灸對亞急性衰老大鼠胸腺CD4+T細胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB和I-κB蛋白表達的影響

崔云華1沈文賓1吳煥淦1周次利1雷 菲1黃立師1趙 琛2李 璟3

(1 上海中醫藥大學上海市針灸經絡研究所,上海,200030; 2 上海中醫藥大學,上海,201203; 3 上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院,上海,200437)

目的:通過觀察IL-2及相關受體蛋白水平的變化情況,探討艾灸對亞急性衰老大鼠胸腺CD4+T細胞的影響。方法:采用D-半乳糖致亞急性衰老大鼠模型。24只清潔級雄性SD大鼠隨機分為:正常組,模型組和艾灸組。艾灸組溫和灸雙側腎俞穴5 min/次,共計40 d。采用免疫磁珠法分離胸腺CD4+T細胞,并再用Western Blot方法檢測各組大鼠胸腺CD4+T細胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB和I-κB的蛋白表達量。結果:模型組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2、IL-2Rα、NF-κB、I-κB蛋白的表達量較正常組降低,差異有統計學意義(P<0.05);艾灸組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2、IL-2Rα、NF-κB、I-κB蛋白表達量升高,與模型組比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論:艾灸腎俞穴可上調胸腺CD4+T細胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB、I-κB的表達。

亞急性衰老；IL-2；IL-2Rα；NF-κB；I-κB；艾灸

衰老是自然界中廣泛發生的一種自然規律,是生命體伴隨年齡增長整個機體的形態、結構和功能逐步衰退的總現象[1]。隨著社會的發展,生活水平得以提高,醫療條件大有改善,人類的平均壽命不斷延長,老年人口所占的比例也隨之擴大。目前,我國已經步入了老齡化社會[2],據國家統計局于2016年2月29日發布的《2015年國民經濟和社會發展統計公報》數據顯示截至2015年底,中國60歲及以上人口數為22 200萬人,占全國總人口的16.1%;65周歲及以上人口數為14 386萬人,占比10.5%。衰老及衰老相關的疾病成為了全世界范圍內越來越重視的問題,因此研究衰老機制,探討有效延緩衰老的方法成為了國內外研究的熱點。

Walford于1969年提出免疫系統功能衰退是導致衰老的重要因素,免疫系統在機體的衰老中起著根本性的作用[3]。免疫系統功能衰退包括胸腺增齡性退化,T細胞表型和功能改變及細胞因子分泌改變等。

中醫學認為腎為先天之本,與人體的生長、發育、衰老密切相關,《素問·上古天真論》認為人體整個生命過程其實是腎氣逐漸充盛、衰減、枯竭的過程。腎氣有余,則能體健長壽,腎氣不足,則發生衰老,從而確立了“腎”在中醫衰老學說中的地位。正如《醫學正傳·命門主壽夭》中所說:“人之壽夭不齊,何輿？……是故腎元盛則壽延,腎元衰則壽夭”。因此,通過補腎達到延年益壽的目的成為了歷代醫家的首要選擇。

艾灸療法是中醫學中固本培元,保健延年的重要方法之一。艾灸療法在古人預防保健的方法中占有非常重要的地位,例如在《扁鵲心書·住世之法》中就有“保命之法,灼艾第一,丹藥第二,附子第三”之說,《醫學入門》則認為“凡一年四季各要熏一次,元氣堅固,百病不生”。有研究表明艾灸腎俞穴可以提高免疫系統功能[4],起到延年益壽的作用。

CD4+T細胞是免疫系統中一類重要的免疫細胞,根據表面標志的不同可分為不同亞群,各個亞群均能分泌多種細胞因子,參與細胞免疫。正常情況下,各個亞群之間分化狀態保持動態平衡。研究表明白細胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是調控CD4+T細胞分化平衡狀態的關鍵因子之一[5]。T細胞只有在活化后才能合成并分泌IL-2,分泌的IL-2能夠誘導白細胞介素2受體(Interleukin-2 receptor,IL-2R)α鏈的表達,而IL-2/IL-2R信號環路可以進一步活化T細胞,促進T細胞的增殖,進而增加IL-2表達?？梢奍L-2的表達調控可決定T細胞活化程度,影響CD4+T細胞分化,進而影響機體免疫功能。

核因子-κB(Nuclear Factor Kappa B,NF-κB)是一種能夠調控基因轉錄的核因子,在細胞內廣泛存在,參與多種基因的轉錄調控。當NF-κB被激活后,發生核易位,與IL-2基因的啟動子區結合,IL-2基因的轉錄表達得以啟動。有研究顯示,糖皮質激素(Glucocorticoid,GC)可引發CD4+T細胞亞群極化分布,CD4+T細胞亞群極化分布又反饋性引起下丘腦-垂體-腎上腺軸(Hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA)功能的異常[6]。其機制可能是糖皮質激素與糖皮質激素受體結合后,通過蛋白-蛋白相互作用直接結合NF-κB,或通過調節NF-κB抑制蛋白κB(Inhibitor Protein κB,I-κB)表達,NF-κB入核受阻[7],活性抑制,下調IL-2基因表達。

本實驗擬通過觀察IL-2及其受體蛋白水平的變化情況,研究艾灸對亞急性衰老大鼠免疫功能的調節。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 24只清潔級雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠(合格證編號:2008001635133),體質量(200±20)g,由上海中醫藥大學實驗動物中心(動物使用許可證號:SYXK(滬)2009-0069)提供。飼養環境為12 h晝夜節律交替,室溫保持在18～22 ℃,相對濕度55%～65%。24只大鼠分裝于6只等大(50 cm×35 cm×20 cm)動物籠中,每周消毒籠具及房間1次。給予自由進食,進水。適應性飼養1周后開始實驗,本研究的動物實驗倫理審查由上海中醫藥大學動物實驗倫理委員會批準及監督。

1.1.2 試劑與儀器 RPMI-1640培養基,Hyclone;Running buffer,Miltenyi Biotec,德國;LS柱,Miltenyi Biotec,德國;CD4 MicroBeads,Miltenyi Biotec,德國;淋巴細胞分離液,北京達科為生物技術有限公司;BCA蛋白濃度測定試劑盒,上海碧云天生物技術有限公司;IL-2Rα Antibody,Abcam,英國;IL-2 Antibody,Santa Cruz,美國;Phospho-NF-κB p65 Antibody,Cell Signaling Technology;Phospho-IκBα Antibody,Cell Signaling Technology。QuadroMACS磁珠分選器,Miltenyi Biotec,德國;通用臺式高速冷凍離心機,ST16R,Thermo Fisher,美國;通用臺式離心機,ST16,Thermo Fisher,美國;漩渦振蕩器,Scientic Industries,美國。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 SD大鼠購回后適應性飼養1周,無不良反應,飲食飲水正常者,即納入實驗。采用SPSS 18.0 for Windows軟件生成隨機數字表,完全隨機分成3個組:正常組,模型組和艾灸組,每組8只。本研究采用D-半乳糖致亞急性衰老模型,按125 mg/(kg·次)的劑量每天在大鼠頸背部皮下注射,正常組大鼠注射等量生理鹽水,連續注射40 d。

1.2.2 干預方法 采用特制艾條(直徑0.3 cm,長20 cm),點燃艾條一端,燃端距離穴位的垂直高度約3～5 cm(根據大鼠是否掙扎調整高度),1次/d,雙側腎俞穴同時艾灸,灸5 min/次,連續治療40 d。艾灸組進行艾灸治療,正常組和模型組只做相同的抓取固定動作,不做艾灸。

1.2.3 標本采集與處理 實驗結束后取胸腺,去除結締組織,制備胸腺單細胞懸液,免疫磁珠法分離純化CD4+T細胞,待測。

1.2.4 檢測指標與方法 蛋白質免疫印跡法(Western Blot)檢測胸腺CD4+T細胞中IL-2、IL-2Rα、NF-κB和I-κB蛋白表達量。

2 結果

2.1 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2蛋白表達量 與正常組比較,模型組大鼠IL-2蛋白的表達量降低,差異有統計學意義(P<0.01);而艾灸組大鼠IL-2蛋白的表達量較模型組升高,差異有統計學意義(P<0.01)。

圖1 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2蛋白表達量

表1 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2蛋白表達量的比較

注:與正常組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.01。

2.2 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2Rα蛋白表達量 與正常組比較,模型組大鼠IL-2Rα蛋白的表達量降低,差異有統計學意義(P<0.05);而艾灸組大鼠IL-2Rα蛋白的表達量較模型組升高,差異有統計學意義(P<0.05)。

2.3 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中NF-κB蛋白表達量 與正常組比較,模型組大鼠NF-κB蛋白的表達量顯著降低,差異有統計學意義(P<0.01);而艾灸組大鼠NF-κB蛋白的表達量較模型組升高,差異有統計學意義(P<0.05)。

圖2 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2蛋白表達量

注：與正常組比較，#P<0.01;與模型組比較，▲P<0.01。

圖3 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2Rα蛋白表達量

表2 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2Rα蛋白表達量的比較

注:與正常組比較，*P<0.05;與模型組比較，△P<0.05。

圖4 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中IL-2Rα蛋白表達量

注：與正常組比較,*P<0.05;與模型組比較,▲P<0.05。

圖5 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中NF-κB蛋白表達量

表3 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中NF-κB蛋白表達量的比較

注:與正常組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.05。

圖6 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中NF-κB蛋白表達量

注：與正常組比較,#P<0.01;與模型組比較,▲P<0.05。

圖7 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中I-κB蛋白表達量

表4 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中I-κB蛋白表達量的比較

注:與正常組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.05。

圖8 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中I-κB蛋白表達量

注：與正常組比較，#P<0.01;與模型組比較，▲P<0.05。

2.4 各組大鼠胸腺CD4+T細胞中I-κB蛋白表達量 與正常組比較,模型組大鼠I-κB蛋白的表達量降低,差異有統計學意義(P<0.01);而艾灸組大鼠I-κB蛋白的表達量較模型組升高,差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

3.1 D-半乳糖致衰老模型 D-半乳糖致衰老動物模型制備方法是短時間內將大劑量的D-半乳糖連續注射到動物體內,加速動物衰老,最終形成與自然衰老相似的動物模型,通過此種方法制備的衰老動物模型是目前使用最為廣泛的[8]。D-半乳糖是體內的一種正常代謝產物,正常情況下可以轉變為葡萄糖參與體內糖代謝的過程,但在過量的情況下能夠引起機體代謝紊亂[9]。D-半乳糖致衰老動物模型正是利用了這一點,具體機制可能是動物體內的D-半乳糖短期內大量快速累積,在醛糖還原酶的催化作用下,D-半乳糖大量轉變成半乳糖醇,但此種物質不能被細胞繼續代謝,故而堆積在細胞內,影響細胞的正常滲透壓,導致細胞出現腫脹并喪失原有的功能,最終使機體出現衰老[10]。這種方法能夠引起與自然衰老相似的生化改變、免疫功能低下、基因表達與調控異常、細胞生長繁殖能力下降、細胞退行性變及認知障礙等表現[11]。劉克明[12]等比較了D-半乳糖致衰老模型鼠和自然衰老鼠的多種衰老指標的不同,發現自然衰老小鼠和D-半乳糖模型小鼠抗體生成細胞數低于正常對照組,D-半乳糖模型小鼠體液免疫功能較正常對照組有所降低,自然衰老組和D-半乳糖模型組SOD活性均低于對照組(P<0.01)。自然衰老組和D-半乳糖模型組MDA含量均高于其對照組(P<0.05)。張常娥[13]等發現D-半乳糖致衰老模型大鼠的一般情況同自然衰老大鼠癥狀相似,提示半乳糖組大鼠出現明顯的衰老體征,D-半乳糖組雄性大鼠體重比青年對照組的體重顯著性減輕(P<0.05),D-半乳糖組大鼠的空間學習和記憶能力比青年對照組顯著降低(P<0.05),且與老年組差異無統計學意義(P>0.05)。D-半乳糖注射組大鼠的胸腺指數較青年對照組有非常顯著的降低(P<0.05),而脾臟指數差異無統計學意義(P>0.05)。高希言[14]等證實D-半乳糖致衰老模型小鼠的CD3+T細胞、CD4+T細胞和CD4+/CD8+的比值較空白組均降低,CD8+T細胞的比例上升,且差異有統計學意義(P<0.01),提示D-半乳糖致衰老模型小鼠的T細胞亞群比例失調。

本課題所采用的衰老動物模型即是在大鼠頸背部皮下連續注射D-半乳糖所造成的亞急性衰老模型,實驗結果表明模型組大鼠的空間學習記憶能力較正常組大鼠顯著降低,模型組大鼠的一般情況不如正常組,且體重增長速度較慢,脾臟指數和胸腺指數較正常組也有所降低,提示本次實驗所造成的亞急性衰老大鼠模型是成功的。

3.2 艾灸改善免疫功能延緩衰老 艾灸療法具有簡便易行、經濟實用、無不良反應、不易產生耐受性等優點,應用于延緩衰老具有其獨特的優勢。研究發現,艾灸延緩衰老是通過艾灸的溫熱作用、藥物作用與腧穴的特殊作用相結合而產生一種“綜合效應”起作用的[15]。

免疫系統的功能會隨著年齡的增長逐漸衰退,從而使老年人比年輕人更容易遭受疾病的侵襲,尤其是一些免疫缺陷性疾病,例如流感,肺炎,系統性紅斑狼瘡,類風濕性關節炎,惡性腫瘤,老年癡呆和帕金森病等[16-19]。免疫系統的功能狀態和衰老的關系密切,故而改善免疫系統功能可以有效的延緩衰老。高希言等對不同強壯要穴施灸,可以使衰老小鼠的免疫器官萎縮退化速度顯著降低,失衡的T淋巴細胞亞群分布恢復正常,同時可以調節sIL-2R的含量,達到改善免疫系統功能的目的,從而延緩衰老[20-21]。IL-2是機體內重要的細胞因子,不僅能誘導T細胞活化,還能刺激B細胞產生抗體,對免疫系統功能影響巨大。而IL-6的主要作用是加速胸腺萎縮,誘導自身抗體產生,增強炎性反應,造成骨質疏松等,是導致機體衰老的重要因子。艾灸能使衰老大鼠血清IL-2水平顯著升高的同時降低血清IL-6的水平,使衰老引起的免疫功能衰退得以改善[22]。趙粹英[23]等采用隔藥餅灸治療了223例老年人,與治療前比較,治療后細胞免疫功能明顯增強,T淋巴細胞的總數有所增加,CD4+/CD8+的比值上升至正常?？梢?艾灸能明顯改善免疫系統功能延緩衰老。

3.3 艾灸調節衰老機體IL-2及其受體延緩衰老的機制探討

隨著年齡的增長,機體的免疫功能逐漸衰退,表現為免疫器官萎縮退化,免疫細胞數量減少及功能受損和細胞因子分泌紊亂等。IL-2主要是由T細胞(特別是CD4+T細胞)在受到抗原或絲裂原刺激后合成分泌的,是一種具有多種生物學功能的細胞因子,在調節機體免疫功能中起著非常重要的作用。多項研究證實,IL-2及其受體的表達能力隨著機體衰老逐漸下降[24-25]。用艾灸進行保健強身,延年益壽的方法古已有之,現代研究也發現,艾灸可以顯著升高伴隨衰老而降低的IL-2及其受體的表達能力。

3.3.1 IL-2和IL-2R系統 IL-2是一種具有多向性作用的細胞因子,不僅可刺激輔助性T細胞增殖,還能誘導細胞毒性T淋巴細胞(Cytotoxic Lymphocyte,CTL)增殖,對機體的免疫應答和抗病毒感染等有重要作用。此外,IL-2還參與了抗體反應、造血和腫瘤監視。IL-2的靶細胞包括T細胞、NK細胞、B細胞及單核-巨噬細胞等,這些細胞表面均可表達IL-2R,IL-2通過作用于細胞膜上的IL-2R來發揮其生物活性。IL-2R包含3條多肽鏈:1條為α鏈,分子量55KD;1條為β鏈,分子量75KD;另1條為γ鏈,分子量64KD[26]。3種肽鏈單獨與IL-2結合親和力較低,只有同時表達才能產生高度親和力,只表達α鏈的細胞以低親和力與IL-2結合,且無法進行細胞內信號轉導,當α鏈與β鏈和γ鏈共同構成三聚體型IL-2R時,可以將IL-2R與IL-2結合的親和力提高10～100倍,β和γ都屬于I型細胞因子受體超家族,γ亞基不單獨與IL-2結合,但與β亞基結合可構成低親和力二聚體型IL-2R,共同成為IL-2R信號的組成部分[27-28]。β和γ亞基在它們胞質內的尾部都攜帶信號序列,其信號轉導通過多種細胞內通路,如酪氨酸蛋白激酶-信號轉導和轉錄因子激活通路(JAK/STAT)、磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B通路(PI3K/Akt)及絲裂原活化蛋白激酶通路(MAPKs)[29],γ鏈不僅對IL-2有應答,對IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、IL-21也有應答[30],因此IL-2及其受體信號系統介導的生物學效應,隨細胞表面表達IL-2受體構型和數量的不同產生明顯差異,并與周圍環境IL-2的濃度、持續作用的時間、有無其他相關細胞因子的參與等多種因素密切相關[31-32]。

IL-2通過與IL-2R的結合產生多種生物學功能:1)刺激T細胞增殖:各種刺激物活化的T細胞一般不能在體外培養中長期存活,加入IL-2則能其長期持續增殖。靜止的T細胞表面不表達IL-2R,對IL-2沒有反應;受絲裂原或其他刺激活化后T細胞才能表達IL-2R,成為IL-2的靶細胞;而IL-2又可誘導靶細胞增加IL-2R的表達。在活體內,IL-2對CD4+T細胞的作用是通過自分泌途徑實現的,因為活化的CD4+T細胞能夠產生大量的IL-2;而CD8+T細胞則通過旁分泌途徑來維持細胞的生長。2)誘導細胞毒作用:a.接受了預刺激信號的CD8+T細胞可以受IL-2的作用活化為CTL,發揮細胞毒作用;在一定條件下,CD4+T細胞也可被IL-2誘導為具有殺傷作用的細胞。b.NK細胞是唯一正常情況下表達IL-2R的淋巴樣細胞,因此始終對IL-2保持反應性。然而靜止的NK細胞上只表達IL-2R的β鏈和γ鏈,對IL-2的親和力低,只能對高濃度的IL-2發生反應。一旦NK細胞活化,就表達IL-2R的α鏈,成為高親和力的受體;因此,大劑量的IL-2誘導的淋巴因子激活的殺傷細胞(Lymphokine Activated Killer Cells,LAK)主要為NK細胞。c.使T細胞作NK細胞產生γ干擾素(Interferon-γ,IFN-γ)、腫瘤壞死因子β(Tumor Necrosis Factor-β,TNF-β)和轉化生長因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)等因子,促進非特異性細胞毒素的合成和分泌;還可誘導產生某些B細胞生長因子以及造血生長因子等,從而發揮相應的生物學作用。3)對B細胞的作用:IL-2對B細胞的生長及分化均有一定的促進作用?；罨幕驉鹤兊腂細胞表面表達高親和力的IL-2R,但密度較低;較高濃度的IL-2可誘導B細胞生長繁殖,促進抗體分泌,并誘使B細胞由分泌IgM向著分泌IgG2轉換。

3.3.2 衰老對機體IL-2及其受體的影響 IL-2和IL-2R在調節機體免疫反應中起著非常重要的作用,其與衰老之間的關系已有大量的研究報道。王敏[33]等采用放射免疫法測定了D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠脾細胞培養上清中的IL-2含量,流式細胞術測定了脾淋巴細胞膜IL-2R的表達,結果表明與正常對照組比較,模型對照組脾淋巴細胞培養上清中IL-2表達和脾淋巴細胞膜IL-2R陽性細胞數明顯降低,差異均有統計學意義(P<0.05)。而另一項研究則證實亞急性衰老模型大鼠血清IL-2含量明顯低于青年對照組(P<0.01)。謝紅林等的研究也得出了同樣的結論。在自然衰老動物模型中也出現了類似的表現,吳志奎[34]等比較了自然衰老小鼠和D-半乳糖致衰老小鼠2種模型,發現2種模型小鼠的脾淋巴細胞增殖能力和產生IL-2的能力下降,同時IL-2R表達能力亦出現下降。

臨床實驗也有同樣的報道,趙粹英[35]等報道了223例老年人外周血IL-2的活性較青年組明顯下降,淋巴細胞表面IL-2R百分率增加。另一項研究[36]選取了18名健康老年人和12名青年人,抽取外周血后經PHA刺激,采用MTT法測定IL-2活性和流式細胞術檢測IL-2R,結果表明老年組的IL-2活性比青年組下降了48.0%,IL-2R陽性細胞數也下降了28.6%。王舒[37]等分析了17名健康老年人和7名健康青年人的外周血淋巴細胞增殖能力和IL-2Rγ鏈的表達,結果顯示青年組的淋巴細胞增殖能力平均為(0.279±0.054),老年組平均為(0.199±0.055),差異有統計學意義(P<0.01);老年組IL-2Rγ鏈陽性的細胞百分比明顯低于青年組(P<0.001);且老年人淋巴細胞活化后IL-2Rγ鏈mRNA的表達低于青年人。

3.3.3 艾灸對衰老機體IL-2及其受體的調節機制 艾灸能夠對衰老機體受影響的IL-2及IL-2R信號系統起到改善作用。唐志勇等比較了溫和灸足三里、腎俞穴一段時間后中老年人和青年人外周血中IL-2的含量,在針灸前老年組IL-2含量明顯低于青年組,針灸后老年組的IL-2含量明顯上調。另一項以隔藥餅灸為治療手段的研究也證實艾灸可以顯著提高老年人外周血中IL-2活性[38]。大量的動物實驗研究也證實了艾灸的這一作用,趙偉康[39]等對自然衰老大鼠關元穴進行艾灸治療,治療結束后測定脾臟IL-2活性,結果表明艾灸可明顯提高老年大鼠脾臟IL-2活性。李麗紅等的研究采用的是D-半乳糖致衰老大鼠模型,選取“足三里”“腎俞”和“關元”溫和灸20次,治療后測定大鼠血清IL-2含量,結果顯示艾灸組大鼠血清IL-2含量明顯高于模型組。另一項研究[40]則選取小鼠在頸背部皮下注射D-半乳糖造成亞急性衰老模型,并對關元、足三里穴進行艾灸,隔日1次,共進行六周,治療結束后比較各組大鼠血清IL-2含量,與模型組比較,艾灸組血清IL-2含量明顯升高(P<0.05)。詹睿[41]的研究則發現逆灸關元穴可顯著升高更年期大鼠血清和子宮IL-2的含量,且脾臟和子宮IL-2RmRNA的表達也呈增高趨勢。

衰老機體IL-2含量降低的原因之一是消耗過多,血清中的可溶性IL-2受體(sIL-2R)能與IL-2結合加速廓清IL-2,使激活的T細胞復原為靜息狀態,從而使IL-2R的表達也出現下降,有研究發現亞急性衰老小鼠模型的sIL-2R含量較對照組明顯升高;另一個原因是產生減少,抑制IL-2產生的其中一個因素是糖皮質激素(大鼠為皮質酮),研究發現老年大鼠的血清皮質酮含量較青年對照組明顯升高[42],高濃度的糖皮質激素與靶器官糖皮質激素受體結合形成GC-R復合物,該復合物可通過蛋白-蛋白相互作用直接與NF-κB等轉錄調節因子結合,影響I-κB的磷酸化和降解,使NF-κB的磷酸化過程受到抑制,從而阻礙其向核內轉移[43],抑制轉錄活性,下調IL-2基因的表達。

本課題組前期研究結果表明,與正常組大鼠比較,D-半乳糖所致的亞急性衰老模型大鼠血清皮質酮含量升高,胸腺糖皮質激素受體表達降低[44]。本次研究進一步表明胸腺CD4+T細胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB和I-κB蛋白表達量均下降;而艾灸組大鼠血清皮質酮含量較模型組降低,胸腺糖皮質激素受體表達及胸腺CD4+T細胞IL-2、IL-2Rα、NF-κB和I-κB蛋白表達量較模型組明顯升高,說明艾灸可能是通過降低血清中的皮質酮含量,減少胸腺淋巴細胞中GC-R復合物的形成,降低其與NF-κB的結合幾率,促進NF-κB向核內轉移,提高轉錄活性,上調IL-2基因的表達,使淋巴細胞激活,IL-2R的表達增多。

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(2017-04-19收稿 責任編輯：王明)

Effects of Moxibustion on the Expression of IL-2, IL-2Rα, NF-κB and I-κB in Thymus CD4+T Cells of Subacute Aging Rats

Cui Yunhua1, Shen Wenbin1, Wu Huangan1, Zhou Cili1, Lei Fei1, Huang Lishi1, Zhao Chen2, Li Jing3

(1ShanghaiResearchInstituteofAcupunctureandMeridan,ShanghaiUniversityOfTraditionalChineseMedicine,Shanghai200030,China; 2ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai201203,China; 3DepartmentofAcupuncture,YueyangHospitalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai200437,China)

Objective:To observe the effect of moxibustion on CD4+T cells of thymus in subacute aging rats by recording the changes of IL-2 and related receptor protein levels. Methods:Use D-galactose induced subacute aging rat model. Twenty-four male SD rats were randomly divided into normal group, model group and moxibustion group. In moxibustion group, use mild moxibustion on Shenshu Point(BL23) bilateral for 40 days, 5 minutes each day each time. To separate CD4+T cells by MACS method, and access the expression of IL-2, IL-2Rα, NF-κB and I-κB in CD4+T cell by Western Blot. Results:Western Blot assay shows that comparing to the control group, the expression of IL-2, IL-2Rα, NF-κB and I-κB in CD4+T cell of model group significantly decreased (P<0.05). However, in the moxibustion group, those increased with significant difference (P<0.05). Conclusion:In subacute aging rats, moxibustion on BL23 can improve the expression of IL-2, IL-2Rα, NF-κB and I-κB in thymic CD4+T cell.

Subacute aging; IL-2; IL-2Rα; NF-κB; I-κB; Moxibustion

國家重點基礎研究發展計劃(“973”計劃)資助項目(編號:2009CB522900;2015CB554501);國家自然科學基金項目(編號:81303029;81373752)

吳煥淦(1956.11—),男,博士,上海中醫藥大學首席教授,博士研究生導師,研究方向:針灸作用的基本原理與應用規律研究,E-mail:wuhuangan@126.com;李璟(1968.03—),女,博士,主任醫師,碩士研究生導師,研究方向:針灸胃腸疾病的臨床與基礎研究,E-mial:1971921250@qq.com

R245.81

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.05.036