兒童急性淋巴細胞白血病患者細胞因子IL—2和IL—10水平變化的臨床研究

唐會濤+郝國平

摘要：目的 探討兒童急性淋巴細胞白血?。ˋLL）患者初步診斷時和化療完全緩解（CR）后血清中IL-2、IL-10水平的變化。方法 收集確診為ALL且經過化療獲得完全緩解的患兒30例及健康兒童20例，采用流式細胞術（FCM）測量初診組、完全緩解組（CR）、健康對照組血清中IL-2、IL-10的水平，比較化療前后這兩種細胞因子含量的變化，并分別與健康對照組做對比。結果 初診組患兒IL-2水平（ 3.59±1.18）pg/ml與正常對照組兒童IL-2水平（6.22±2.03）pg/ml相比較明顯下降（ P<0.001），初診組IL-10的水平（15.88±4.73）pg/ml與正常兒童IL-10的水平（ 5.69±3.44 ）pg/ml相比較則顯著升高（P<0.001）。隨著化療的進行IL-2水平（ 4.78±1.57 ）pg/ml明顯上升，（P=0.005），IL-10水平（ 8.14±2.82 ）pg/ml顯著下降（ P<0.001），都未達到正常兒童水平（P= 0.034和P=0.036）。但是差異均有統計學意義（P<0.05）。結論 細胞因子IL-2和IL-10可能在兒童ALL的發生、發展過程中發揮了免疫調節功能，其含量的變化在一定程度上能夠反應兒童ALL患兒體內的免疫功能狀態的好壞。

關鍵詞：兒童；急性淋巴細胞白血??；IL-2IL-10；流式細胞術

Abstract：Objective To investigate the children with acute lymphoblastic leukemia（ALL）patients at initial diagnosis and chemotherapy complete remission（CR）after IL-2 in serum，the change of IL-10 level.Methods Diagnosed with ALL after chemotherapy and 20 cases of complete remission in 30 cases of children and healthy children by flow cytometry（FCM）measurement diagnosis group，complete remission group（CR），healthy control group serum IL-2，IL-10 level changes of these two cytokines were compared before and after chemotherapy，and compared with the healthy control group respectively.Results The level of IL-2（3.59±1.18） pg/ml in the newly diagnosed group was significantly lower than that in the normal control group （6.22±2.03） pg/ml（P<0.001）.The level of IL-10 in the first visit group（15.88±4.73）pg/ml was significantly higher than that of the normal children （5.69±3.44），IL-10（P<0.001），compared with the normal children.With chemotherapy were IL-2 level （4.78±1.57）pg/ml significantly increased（P=0.005），IL-10（8.14±2.82）pg/ml decreased significantly（P<0.001），has not reached the level of normal children（P= 0.034 and P=0.036）.But the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion The cytokines IL-2 and IL-10 may play an immunoregulatory function in the development and progression of ALL in children.The changes of their contents can reflect the immune function in children with ALL.

Key words：Children；Acute lymphoblastic leukemia；IL-2IL-10；Flow cytometry

近年來，有許多關于白血病患者體內細胞因子變化的研究，但大多數實驗的對象以成人為主，也有部分實驗的對象包括成人和兒童，并且兒童的平均年齡偏大，很少完全以兒童為主要對象的實驗研究。兒童急性白血病尤其是低年齡段的患者數量呈逐年增加趨勢，且兒童免疫功能尚未完善，因此，了解兒童免疫功能狀態十分必要。兒童急性淋巴細胞白血?。ˋLL）是兒童惡性腫瘤中最常見的疾病，以骨髓中白血病細胞克隆性增生為主，抑制了正常造血細胞的產生，并侵犯其他組織和器官，從而使患兒表現出貧血、出血、感染、骨痛、關節浸潤等一系列臨床癥狀，且起病急，病情進展快，病程短，易復發，給家庭帶來了巨大的經濟負擔。目前白血病的發病機理尚不十分明確，可能與染色體異常、化工燃料、病毒感染、輻射、遺傳易感性等因素相關。有研究[1]證實細胞因子的分泌和調節異常能使腫瘤細胞逃脫機體的免疫監視，細胞因子的網絡失衡可能為急性白血病的發病提供機會[2]?，F采用流式細胞術對我院30名ALL患兒化療前及完全緩解后血清中細胞因子IL-2和IL-10的含量進行測定，探討這兩種細胞因子水平的變化與兒童ALL患者體內免疫功能狀態的關系。

1資料與方法

1.1一般資料 收集山西省兒童醫院血液科2015年7月～2016到2月依據臨床癥狀、體征及相關輔助檢查確診為急性淋巴細胞白血病，且經過化療6個月后得到完全緩解的患兒30例作為實驗組，男19例，女11例，年齡1～15歲，平均年齡5.72歲，其中28例T型ALL，2例B型ALL。同期門診兒童保健科體檢健康的兒童20例作為對照組，男12例，女8例，年齡2～13歲，平均年齡6.73歲。

1.2標本采集 分別抽取初診組、完全緩解組（CR）、健康對照組兒童清晨空腹靜脈血2 ml，離心后取上清液，放置于-80℃冰箱待檢。

1.3檢測方法 采用流式細胞術（FCM） 進行測定，流式細胞儀由美國BD公司生產，試劑購買于北京礦博生物技術股份有限公司，嚴格按照試劑公司提供的細胞因子檢測使用手冊進行操作。

1.4統計學分析 通過SPSS17.0軟件，采用單因素方差分析中Dunnett T3檢驗進行統計學分析，以P<0.05為差異有顯著性。

2結果

兒童急性淋巴細胞白血?。ˋLL）患者化療前和完全緩解后體內IL-2和IL-10水平的變化值如下，見表1。

初診組IL-2水平（3.59±1.18）pg/ml與正常組兒童IL-2水平（6.22±2.03）pg/ml相比較明顯下降（P<0.001），初診組IL-10的水平（ 15.88±4.73）pg/ml與正常兒童IL-10的水平（ 5.69±3.44）pg/ml相比較則顯著升高（P<0.001）。隨著化療的進行IL-2水平（4.78±1.57）pg/ml明顯上升（P=0.005），IL-10水平（8.14±2.82）pg/ml顯著下降（P<0.001），都未達到正常兒童水平（P=0.034和P=0.036）。差異均有統計學意義（P<0.05）。

3討論

人體內的細胞因子主要是由輔助性T淋巴細胞1（Th1）型和輔助性T淋巴細胞2（Th2）型細胞分泌而來，其中Th1型細胞分泌的細胞因子主要有INF-r、IL-2等，Th2型細胞分泌的細胞因子主要有IL-4、IL-10等。Th1型細胞所產生的細胞因子主要在細胞免疫中發揮效能，而機體抗腫瘤機制的重要形式是由細胞免疫介導的；Th2型細胞所分泌的細胞因子主要在機體的免疫系統中發揮負調控作用。因此這兩種細胞所分泌的細胞因子在人體的免疫應答反應中保持動態平衡是十分重要的，一旦其中一類細胞因子在機體的免疫應答中處于明顯優勢位置，人體的機能就會發生免疫功能紊亂，造成各種疾病的發生。如果Th1/Th2之間的平衡被打破，并向Th2漂移，機體免疫功能受到抑制，抗腫瘤能力下降[3]，而最嚴重的后果是可能使人患上惡性腫瘤。

IL-2是人體發揮免疫功能過程中起關鍵作用的細胞免疫最主要的細胞調節因子，IL-2主要由活化的Th1細胞分泌，其他與免疫相關的細胞也能分泌少量的IL-2，如：B淋巴細胞、樹突狀細胞（DC）、CD8+T淋巴細胞（CTL）、NKT細胞和肥大細胞等。IL-2主要的免疫調節作用包括：①促使T、B淋巴細胞增殖、分化及抗體的分泌；②增強淋巴細胞表面黏附分子（AM）的表達，誘導殺傷細胞殺傷靶細胞[4]；③促進CD8+細胞的產生；④促進干擾素、腫瘤壞死因子等細胞因子的分泌，增強抗白血病作用[5]；⑤能夠誘導產生NK細胞并促進其增殖，增強活化NK細胞的自然殺傷能力[6]；⑥激活巨噬細胞及增強其吞噬及抗原提呈功能，在機體的抗腫瘤過程中發揮一定的免疫功效[7]；⑦活化淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK），誘導腫瘤細胞的死亡；⑧能促使抗原已致敏的CD4+Th細胞（Th0）向Th1型細胞方向分化。IL-2水平在白血病患者血清中均有不同程度的降低[8-9]，有兩種主要的原因可能與之相關，一方面可能由于白血病細胞分泌大量sIL-2R，與效用性淋巴細胞表面表達的IL-2R競爭性的結合IL-2，從而使血清中IL-2的含量明顯減少[10]；另一方面考慮是IL-2主要來源細胞Th1型細胞數量的減少和其分泌IL-2能力的下降造成的。這次實驗結果顯示ALL患兒化療前血清中IL-2的含量較正常對照組明顯下降，從而使得Th1型細胞介導的細胞免疫應答反應能力顯著減弱，這可能是造成白血病細胞惡性克隆性增生的主要原因之一。

IL-10是機體免疫過程中的起主要負向調控作用的細胞因子，具有十分顯著的抑制免疫的功能[11]。主要Th2分泌而來，腫瘤細胞、調節性T細胞（Treg細胞）及單核巨噬細胞也是IL-10的重要來源之一，樹突狀細胞（DC）、中性粒細胞、Kupffer細胞、上皮細胞也能分泌少量。IL-10的免疫抑制能力主要體現在以下幾個方面：①抑制Th0型細胞向Thl型細胞方向增殖、分化，促進Th0型細胞向Th2型細胞方向增殖、分化，并且能使Th1型細胞分泌細胞因子的能力減弱，從而使機體的免疫功能處于抑制狀態，易于腫瘤細胞的免疫逃逸，最終導致腫瘤性疾病的形成。②阻礙樹突狀細胞（DC）、吞噬細胞等抗原提呈細胞（APC）在免疫過程中發揮遞呈抗原的功效，使細胞毒性 T 淋巴細胞（CTL）處于免疫無應答狀態，容易造成免疫功能缺陷，為腫瘤的產生創造便利的環境。③抑制炎癥反應，缺乏可導致自身免疫性疾病。④抑制NK細胞的活化，減低IL-2活化NK細胞分泌IFN-γ和TNF-α的能力，使機體的抗腫瘤活性下降。當人體發生惡性病變時，體內的Treg細胞明顯增多，而腫瘤細胞和Treg細胞可大量分泌IL-10，腫瘤患者體內 Th2型細胞占據優勢狀態[12]，而Th2是IL-10的主要分泌源，從而使得腫瘤患者血清中的IL-10水平升高顯著。本次實驗結果顯示：患兒血清中的IL-10含量明顯增多，嚴重抑制了機體的免疫功能，使得免疫監視能力嚴重下降，從而有利于白血病細胞的免疫逃逸，促進了白血病的發生，與Douillard等[13]的研究結果一致。

患兒治療前血清中IL-2的含量與對照組正常兒童相比較明顯降低，IL-10含量顯著升高，和一些學者[14-16]的結論相同，說明Th1型和Th2型細胞因子異常表達。Th2 型細胞因子在急性白血病患兒體內占據優勢地位[11]，可使患兒CTL細胞、NK細胞和DC細胞數量的急劇減少和功能的明顯減低，分泌抗體能力下降，造成細胞免疫和體液免疫應答顯著降低，使機體的免疫功能受抑，從而導致了急性白血病患兒體內免疫功能發生嚴重紊亂。隨著化療的進行，完全緩解后患兒血清中IL-2的含量明顯升高，IL-10的含量則急劇下降，與文獻[14，16]結果一致，這可能是由于緩解后患兒體內免疫功能有所提高，參與免疫應答的效應淋巴細胞數目上升，分泌IL-2增多，經化療作用患兒體內腫瘤負荷明顯降低，使得IL-10的分泌量顯著減少。然而IL-2和IL-10的含量都未達到對照組正常兒童水平，考慮與長期化療形成的免疫抑制作用有密切關系；且患兒年齡小，免疫功能尚未成熟，完全緩解后患兒機體的免疫功能正處于逐漸恢復中，所以機體的免疫功能重建需要一定時間。所以。有科研人員[17-19]研究證明急性白血病患者血清中IL-10含量的顯著升高是疾病預后不佳的主要因素之一，如果化療后患兒體內IL-10的含量仍然很高，可能預示著疾病的惡化[20]。

由此可見，細胞因子IL-2和IL-10在兒童ALL的發生、發展過程中可能發揮了免疫調節功能，其含量的變化在一定程度上能夠反應ALL患兒體內的免疫功能狀態的好壞，通過動態監測急性白血病患兒血清中IL-2、IL-10含量的變化了解患兒體內的免疫功能情況，可作為判斷病情嚴重程度、評價療效和預測疾病預后的指標之一，也為兒童ALL患者的治療奠定理論基礎。

近年來，IL-2作為一種免疫治療藥物已經應用于許多腫瘤性疾?。ㄈ纾悍伟?、腎癌、直腸癌、黑色素瘤等）的臨床治療，其中對腎癌[21]、黑色素瘤最有效，IL-2聯合化療在急性白血病患者的治療中也取得了不錯的療效，但是大多數治療用于成人患者，較少用于兒童患者，因此，可以開展IL-2聯合化療用于兒童ALL患者的臨床試驗以提高患兒的長期生存時間和質量。

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編輯/高章利