宮血寧膠囊引起大鼠子宮平滑肌收縮及其初步影響機制研究

傅 濤，王麗梅，趙振虎，善亞軍，柳曉蘭，從玉文

?

宮血寧膠囊引起大鼠子宮平滑肌收縮及其初步影響機制研究

傅 濤1，王麗梅2，趙振虎2，善亞軍2，柳曉蘭2，從玉文2

目的 初步了解宮血寧縮宮膠囊作用的影響機制，為合理應用宮血寧膠囊治療婦科出血癥提供理論指導。方法 Wistar大鼠隨機分為宮血寧對照組和宮血寧加相應對比藥物組，共9組，每組10只。應用離體子宮張力測定法，測定各組大鼠離體子宮平滑肌收縮活性。結果 0.001 μg/ml腎上腺素可完全抑制50 μg/ml宮血寧引起的大鼠子宮平滑肌收縮，而腎上腺素β1受體拮抗藥阿替洛爾和美托洛爾可完全逆轉腎上腺素的抑制作用。腎上腺素α受體拮抗藥酚妥拉明雖能抑制α受體激動劑甲氧明引起的大鼠子宮平滑肌的收縮，但不能逆轉腎上腺素對宮血寧引起大鼠子宮平滑肌收縮的抑制作用。結論 宮血寧膠囊引起的大鼠子宮平滑肌收縮的可能影響機制是通過抑制腎上腺素β受體激活發揮作用。

宮血寧膠囊；子宮平滑肌收縮；腎上腺素；腎上腺素受體

宮血寧膠囊是由滇重樓總甾體皂苷組成的單方制劑，為國家中藥保護品種，具有縮宮止血、消炎鎮痛等功效, 尤其對子宮功能性出血、大小產后出血、月經過多等癥有顯著療效，被國內婦科專家推薦為治療流產后止血的首選中成藥制劑[1, 2]。腎上腺素受體又可分為α和β腎上腺素能受體(α-AR和β-AR)，在子宮發育不同時期及懷孕過程中，腎上腺素受體表達及功能也發生相應的變化[3]。腎上腺素通過激活興奮性α-AR或抑制性β-AR調節子宮平滑肌的收縮活性[4]。

筆者前期研究發現，宮血寧在體內和體外均能引起子宮平滑肌節律收縮，平滑肌收縮依賴于細胞外鈣內流和細胞內鈣釋放，并受到PLC(磷脂酶C)/IP3(1,4,5-三磷酸肌醇)、PLA2(磷脂酶A2)/AA(花生四烯酸)等多條信號轉導通路的調控[5-9]。本研究觀察了宮血寧引起大鼠子宮平滑肌收縮的機制，以及與腎上腺素受體激活/抑制的關系，旨在指導臨床上合理應用宮血寧膠囊治療不同類型的婦科出血。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑與設備 宮血寧膠囊(云南白藥制藥股份有限公司)，腎上腺素(北京永康制藥廠)，Methoxamine-α受體激動劑(SIGMA公司)，高特靈(英國雅培制藥有限分司)，阿替洛爾(北京益民制藥廠)，美托洛爾(廣州市醫藥工業研究所)，酚妥拉明(上海醫科大學紅旗制藥廠)。CS502-3C數字超級恒溫器(購自重慶四達實驗儀器有限公司，溫度波動度≤±0.5 ℃)；GTS生物信號傳感器(北京微信斯達科技發展有限責任公司)；JZ101型肌肉張力換能器(高碑店市新航機電設備有限公司)。

1.2 實驗動物模型及分組 Wistar大鼠，雌性，體重230～270 g，由軍事醫學科學院實驗動物中心提供(醫動字D01-3039)，適應性飼養2周。隨機分為宮血寧對照組和宮血寧加相應對比藥物組，共9組，每組10只。實驗中使用到的藥品試劑濃度分別為：宮血寧對照組(50 μg/ml)、腎上腺素(0.001 μg/ml)、阿替洛爾(4 μg/ml)、美托洛爾(4 μg/ml)、甲氧明(20 μg/ml)、高特靈(2 μg/ml，5 μg/ml，10 μg/ml)、酚妥拉明(4 μg/ml)。采用累計加藥法，宮血寧及其他藥物依次由低濃度加到高濃度，藥物終濃度是指藥物溶于麥氏管中12 ml臺氏液后的濃度[5, 6]。

1.3 觀察指標及方法

1.3.1 離體子宮肌條制備 Wistar雌性大鼠在實驗前2 d給予己烯雌酚懸濁液腹腔內注射0.1 mg/kg一次，造成人工動情期。用頸椎脫臼法處死大鼠，剖腹取出子宮，立即置于盛有臺氏液的玻璃平皿中。小心剝離附于子宮壁上的結締組織和脂肪組織。將一側子宮角的兩端分別用線結扎，轉移通入有氧氣、盛有12 ml臺氏液并已被預溫至37 ℃的營養管中，下端固定，上端與張力傳感器的掛鉤相連。靜息20～30 min，換液2～3次。

1.3.2 大鼠離體子宮平滑肌收縮活性測定方法 前期研究發現，宮血寧(25～100 μg/ml)均能引起離體子宮平滑肌節律收縮，且隨著給藥時間的延長，子宮收縮的張力和頻率均有降低，在給藥后40 min內，子宮收縮張力可降到初始效應的95%，頻率則降到初始效應的90%，據此，觀察藥物對宮血寧縮宮作用的影響均在宮血寧給藥后40 min內完成[5, 6]。采用GTS生物信號傳感器生物機能實驗系統，利用肌肉張力換能器測定平滑肌收縮情況。在實驗過程中臺氏液的工作溫度始終保持在(37±0.5) ℃。營養管中持續通入氧氣，每秒1～2個氣泡。給予子宮負荷1 g，待子宮穩定后，開始給藥并觀察10 min內的波譜變化，由計算機記錄并處理數據。

2 結 果

2.1 腎上腺素β1受體拮抗藥對宮血寧引起的子宮平滑肌收縮的影響 如表1所示，宮血寧50 μg/ml可引起離體子宮的節律收縮，加入腎上腺素0.001 μg/ml可完全抑制宮血寧引起的子宮平滑肌收縮；加入4 μg/ml的阿替洛爾和美托洛爾后，子宮收縮的張力和頻率基本恢復到初始狀態，說明宮血寧引起的子宮平滑肌收縮可能與抑制腎上腺素β1受體信號傳導正相關。

2.2 腎上腺素α受體激動藥/拮抗藥對宮血寧引起的子宮平滑肌收縮的影響 甲氧明20 μg/ml可引起大鼠離體子宮節律性收縮，加入高特靈2 μg/ml即能完全拮抗甲氧明的作用，表明激活腎上腺素α受體可引起大鼠離體子宮的節律收縮。宮血寧50 μg/ml可引起離體大鼠子宮的節律收縮，加入高特靈至5 μg/ml和10 μg/ml，宮血寧收縮的張力和頻率均沒有明顯降低，說明宮血寧不是通過激活腎上腺素α受體起作用。腎上腺素0.001 μg/ml可完全抑制宮血寧引起的子宮收縮，而酚妥拉明4 μg/ml不能逆轉腎上腺素的抑制作用，說明腎上腺素抑制宮血寧引起的子宮平滑肌收縮與腎上腺素α受體激活無關(表1)。

表1 腎上腺素β1拮抗藥和α受體拮抗藥對宮血寧引起的大鼠子宮平滑肌收縮的影響 (n=10；

注：與宮血寧對照組比較，①P<0.05；與甲氧明對照組比較，②P<0.05

3 討 論

本研究發現，腎上腺素本身不能引起子宮節律收縮，但可抑制宮血寧引起的子宮收縮，加入一定濃度的β受體拮抗藥可基本消除腎上腺素對子宮收縮的抑制作用，而加入α受體拮抗藥對子宮收縮沒有影響，說明宮血寧引起的子宮收縮可能與抑制腎上腺素β受體信號通路有關。

腎上腺素受體(adrenergic receptor，AR) 為G蛋白偶聯受體，根據其對擬腎上腺素類藥物敏感性的不同及阻斷藥的不同，可分為α-AR和β-AR兩種，其中α-AR分為α1和α2兩種亞型，β-AR可分為β1、β2和β3三種亞型。腎上腺素受體在子宮發育不同時期及妊娠不同孕期，其表達及功能也發生相應的變化[3, 4,11]。妊娠期孕酮占優勢，去甲腎上腺素刺激β-AR和α2-AR，激活腺苷酸環化酶，通過抑制細胞內鈣升高的通路，引起子宮平滑肌舒張；而在分娩期，雌二醇升高，β-AR脫敏，去甲腎上腺素作用于α2-AR 和α1-AR，抑制腺苷酸環化酶，激活Gq/PLCγ通路，引起細胞內鈣升高和子宮平滑肌收縮[3]。配基結合實驗顯示，人子宮平滑肌β2-AR占82%，β1-AR占18%，妊娠末期β3-AR表達增加[12]。三種亞型β-AR均能激活腺苷酸環化酶，升高細胞內cAMP濃度，引起子宮平滑肌舒張[4]。本研究發現，β1-AR選擇性拮抗藥阿替洛爾和美托洛爾均能完全逆轉腎上腺素對宮血寧引起子宮平滑肌收縮的抑制作用，說明腎上腺素通過激活β1受體抑制宮血寧引起的子宮平滑肌收縮。下一步研究需評價β2-AR和β3-AR在腎上腺素抑制宮血寧引起子宮平滑肌收縮中的作用。

腎上腺素是腎上腺髓質分泌的主要激素，當人經歷某些刺激時，如興奮、恐懼、緊張、運動等，體內腎上腺素分泌增加[13]。因此，在宮血寧服藥期間，盡量減少這些刺激，以免影響藥物療效。同時，當宮血寧與腎上腺素類或多巴胺類藥物合用時，應考慮藥物之間的相互影響。本研究的成果對于宮血寧膠囊在婦科出血癥狀中的合理應用提供了參考價值。

[1] 范光升,莊留琪.宮血寧膠囊減少藥物流產后陰道出血的有效性和安全性研究[J].中國婦幼保健, 2010, 25(35): 5225-5226.

[2] 張勝利, 吳尚純. 宮血寧治療置宮內節育器后異常出血療效的Meta分析 [J]. 中國計劃生育學雜志, 2010, 18(8): 458-459.

[3] Dupuis M, Lévy A, Mhaouty-Kodja S. Functional coupling of rat myometrial alpha 1-adrenergic receptors to Gh alpha/tissue transglutaminase 2 during pregnancy [J]. J Biol Chem, 2004, 279(18): 19257-19263.

[4] Tanaka Y, Horinouchi T, Koike K. New insights into beta-adrenoceptors in smooth muscle: distribution of receptor subtypes and molecular mechanisms triggering muscle relaxation [J]. Clin Exp Pharmacol Physiol, 2005,32(7):503-14.

[5] 趙振虎,李建勇,善亞軍,等.宮血寧對大鼠離體子宮的節律收縮作用 [J]. 解放軍藥學學報,2004,20(2):93-95.

[6] 趙振虎,李建勇,苑曉玲, 等. 皂苷提取物宮血寧縮宮作用與細胞外鈣內流關系的研究[J].中國藥物與臨床, 2005, 5(6): 415-417.

[7] 蘇 佳,劉澤源,趙振虎,等.PLA2 /AA信號途徑與重樓皂苷誘導大鼠子宮平滑肌收縮活動的關系研究[J]. 軍事醫學科學院院刊, 2008, 32(3): 264-268.

[8] Guo L, Su J, Deng B W,etal. Active pharmaceutical ingredients and mechanisms underlying phasic myometrial contractions stimulated with the saponin extract from Paris polyphylla Sm. var. yunnanensis used for abnormal uterine bleeding [J]. Hum Reprod,2008,23(4):964-971.

[9] Wang L, Jia C, Yu Z,etal. Pennogenin tetraglycoside induces rat myometrial contraction and MLC20 phosphorylation via PLC-IP(3) and RhoA/Rho kinase signaling pathways [J]. PLoS One, 2012, 7(12):e51536.

[10] Martínez M I, EstaL, Morales-Olivas F J,etal. Effect of histamine and histamine analogues on human isolated myometrial strips [J]. Br J Pharmacol, 1992 , 107(2): 528-531.

[11] Darios E S, Seitz B, Watts S W.Smooth muscle pharmacology in the isolated virgin and pregnant rat uterus and cervix [J]. J Pharmacol Exp Ther,2012,341(3):587-596.

[12] Liu Y L, Nwosu U C, Rice P J. Relaxation of isolated human myometrial muscle by beta2-adrenergic receptors but not beta1-adrenergic receptors [J]. Am J Obstet Gynecol, 1998, 179(4): 895-898.

[13] Jovanovic P, Stefanovic B, Spasojevic N,etal. Effects of oxytocin on adreno-medullary catecholamine synthesis, uptake and storage in rats exposed to chronic isolation stress [J]. Endocr Res, 2016, 41(2): 124-131.

(2017-02-13收稿 2017-03-21修回)

(責任編輯 尤偉杰)

Inhibitory effect of Gongxuening on myometrial contractions and mechanisms

FU Tao1, WANG Limei2, ZHAO Zhenhu2, SHAN Yajun2, LIU Xiaolan2, and CONG Yuwen2.
1.Department of Cardiology, the Affiliated Hospital of Institute of Aviation Medicine of Air Force, Beijing 100089, China; 2. Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China

Objective To investigate the mechanism underlying myometrial contraction stimulated by Gongxuening, and to provide reference for rational use of Gongxuening in the treatment of abnormal uterine bleeding.Methods The contraction of the uterus in vitro induced by Gongxuening in rats was observed using isolated uterine tension measurement, and the influence of such potential factors as epinephrine and its receptor modulators on the contraction was studied.Results It was found that epinephrine at the dose of 0.001μg/ml completely inhibited rat myometrial contractions induced by 50 μg/ml Gongxuening, while β1adrenergic receptor (β1-AR) antagonists atenolol and metoprolol both completely reversed the inhibition by epinephrine. α-AR antagonist phentolamine could not reverse the inhibition by epinephrine during rat myometrial contractions induced by Gongxuening, although it completely inhibited myometrial contractions induced by α-AR agonist methoamine.Conclusions The possible mechanism of rat myometrial contractions induced by Gongxuening may be through inhibition of epinephrine β- AR activation.

Gongxuening; myometrial contractions; epinephrine; adrenergic receptor

國家自然科學基金-云南聯合基金重點資助項目(U1032601)

傅 濤，本科學歷，副主任醫師。

1.100089 北京， 空軍航空醫學研究所附屬醫院心內科； 2.100850 北京,軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所

從玉文，E-mail：congyw@nic.bmi.com

R711.52