水產品中副溶血性弧菌計數的不確定度評定

□ 姚 瑤 鹽城市食品藥品監督檢驗中心

水產品中副溶血性弧菌計數的不確定度評定

□ 姚 瑤 鹽城市食品藥品監督檢驗中心

目的建立水產品中副溶血性弧菌MPN法計數結果的不確定度評定方法。方法依據JJF1059.1-2012測量不確定度評定與表示和SN/T4091–2015食品微生物學測量不確定度評估指南，分析檢測過程中不確定度主要來源，計算合成不確定度和擴展不確定度。結果顯示樣品制備、遞增稀釋和加樣過程引起的不確定度所占分量較小，屬于B類不確定度，重復性試驗引起的不確定度屬A類不確定度。計算得出95%的置信水平的擴展不確定度為0.082，檢驗結果為81 MPN/g時，取值范圍為（81±7） MPN/g。結論本文采用的評定方法，可以對水產品副溶血性弧菌MPN法計數結果的不確定度做出估計，用于水產品副溶血性弧菌污染的安全性評估。

水產品；副溶血性弧菌；MPN；不確定度

副溶血性弧菌（VibrioParahemol yticus）是一種嗜鹽性弧菌，存在于近海的海水與海底沉積物、魚類和貝殼等海產品中，食用未煮熟的海產品或污染的鹽腌制品容易引起食物中毒，是我國沿海地區食物中毒中最常見的一種[1]。近年，江蘇各地的水產品中均有陽性菌的檢出[2-3]。2013年，食品國家安全標準規定了水產品中副溶血性弧菌的限量要求，所以準確評估生制水產品中副溶血性弧菌的污染數量尤為重要。我們參照JJF1059.1-2012測量不確定度評定與表示[4]和SN/T4091–2015食品微生物學測量不確定度評估指南[5]，以鹽城特產醉螺為對象，醉螺屬于即食生制水產品，通過分析其檢驗過程的不確定度分量，計算合成不確定度和擴展不確定度來描述副溶血性弧菌計數結果的不確定度，建立水產品中副溶血性弧菌檢測結果不確定度的評定方法。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

醉螺（鹽城合成昌食品有限公司）。

1.2 試驗方法

瓶裝醉螺中加入副溶血性弧菌標準菌株ATCC17802菌懸液，用拍擊式均質器均質2 min后，按照《GB4789.7-2013食品安全國家標準食品微生物學檢驗副溶血性弧菌檢驗中銅綠假單胞菌檢驗》[6]的方法進行檢驗，步驟如下：稱取樣品25 g，加入225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水，均質2 min后制備成1∶10的樣品勻液，用無菌吸管吸取1∶10的樣品勻液1 mL，注入含有9 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內，振搖試管混勻，制備1∶100的樣品勻液，同理制備1∶1000的樣品勻液。將這3個連續稀釋度接種3支含有9 mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種1 mL，置（36±1）℃恒溫箱內，培養8～18 h。挑取顯示生長的增菌液，于TCBS平板或弧菌顯色培養基平板上劃線分離，一支試管劃線一塊平板，于（36±1）℃培養18～24 h。挑取3個以上可疑菌落進行生化鑒定，查MPN表，報告結果。

1.3 不確定度分量的來源

此檢驗過程由一人在20 ℃標準溫度的環境下操作，所有操作嚴格按照標準執行，所以可以忽略人員和環境造成的不確定度分量，且實驗加入標準菌株，檢出的可疑菌落經鑒定符合副溶血性弧菌的生化特性。所以我們僅分析以下幾個分量：（1）樣品制備過程中引入的不確定度U(樣品制備)；（2）遞增稀釋引入的不確定度U(遞增稀釋)；（3）向培養基加樣引入的不確定度U(加樣)；（4）重復檢測結果引起的不確定度U(重復檢測)。

2 各不確定度分量的評定

2.1 樣品制備過程中引入的不確定度評定

樣品制備過程主要含有兩個分量：①稱量25 g樣品時電子天平引入的不確定度。②用250 mL量筒量取225 mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水時量筒引入的不確定度。

用精度為0.1 g的電子天平稱取25 g樣品，天平的最大允差為±0.1 g，所以天平的相對標準不確定度為：

量筒按JJG196-2006常用玻璃量器[7]的容量允差為±2.0 mL，所以量筒的相對標準不確定度為：

則

2.2 遞增稀釋引入的不確定度評定

樣品稀釋采用1 mL和10 mL刻度吸管，按照JJG196-2006常用玻璃量器規定，1 mL和10 mL刻度吸管的容量允差分別為±0.008 mL和±0.05 mL，所以1 mL刻度吸管的相對標準不確定度為：

10 mL刻度吸管的相對標準不確定度為：

在本實驗中，遞增稀釋兩次，得到1∶100、1∶1000的樣品勻液，所以在此遞增稀釋過程中的相對標準不確定度為：

2.3 向培養基加樣引入的不確定度評定

用1 mL刻度吸管吸取樣品勻液，加入到9 mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管中。按照JJG196-2006常用玻璃量器規定，1 mL刻度吸管的容量允差分別為±0.008 mL，所以加樣過程中引入的相對標準不確定度為：

Urel(加樣)=Urel(1mL)=0.00462

2.4 重復檢測結果引起的不確定度評定

同一樣品重復檢測10次，結果見表1。

由表1可以得出：

3 醉螺中副溶血性弧菌計數的合成不確定度和擴展不確定度

綜合上述幾個分量的不確定度結果，樣品中銅綠假單胞菌計數的合成不確定度為：

包含因子k=2（大約對應95%的置信水平），擴展不確定度為：

所以副溶血性弧菌計數結果平均值為81時，可以計算其相應的擴展不確定度為：

U=81MPN/g×0.082≈7MPN/g

4 結論

“黑匣子”系統顯示了食品微生物不確定度的主要來源，包括取樣、稀釋、操作者、時間、設備、培養基和試劑等[4]，在本實驗中，都是采用同一批次、經驗證的培養基和試劑，且由同一人操作，環境溫度控制在20℃，嚴格按照標準執行，所以忽略了環境、操作者、培養基和試劑等不確定度，主要考慮了樣品制備、遞增稀釋、加樣及重復性檢測引起的不確定度。其中樣品制備、遞增稀釋和加樣體積引起的不確定度所占分量較小，屬于B類不確定度，以重復性實驗引起的不確定度占主要部分，屬于A類不確定度。

表1 樣品檢驗結果

食品檢驗結果的質量往往會直接影響國家和企業的經濟利益，例如，對食品衛生指標若測量不準，使本來合格的產品判為不合格，造成企業的損失，或者使本來不合格的產品判為合格，會影響人體的健康，測量不確定度就是對測量結果質量的定量表征[8]，可見食品檢測中測量不確定度的重要意義。GB29921-2013《食品安全國家標準食品中致病菌限量》[9]中規定了水產品中副溶血性弧菌的限量，即同一批次的5份樣品中最多僅能有1份樣品超出可接受水平的限量值，在100～1000 MPN/g之間。當檢驗結果為邊緣數據時，結合不確定度評定才能更加準確地評估產品合格與否。以2號實驗結果為例，副溶血性弧菌計數結果為93 MPN/g，其相應的擴展不確定度為8 MPN/g，取值范圍為85～101 MPN/g，此時判定結果時就應當慎重。所以通過不確定度的評定，可以保證檢測結果的準確性、可靠性。

[1]盤箐,曾雪芳.病原生物與免疫學[M].長沙:中南大學出版社,2015.

[2]王燕梅,唐震,喬昕,等.江蘇省水產及其制品中副溶血性弧菌污染情況調查[J].中國衛生檢驗雜志,2016,26(19):2846-848.

[3]張周建,張衛兵,羌校君,等.江蘇省南通市餐飲業即食生食動物性水產品微生物監測結果分析[J].中國食物與營養,2014,20(8):17-19.

[4] 中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.測量不確定度評定與表示JJF1059.1—2012 [S].北京:中國計量出版社,2012.

[5]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.食品微生物學測量不確定度評估指SN/T4091—2015[S].北京:中國標準出版社,2015.

[6]中華人民共和國國家和計劃生育委員會.食品安全國家標準食品微生物學檢驗副溶血性弧菌檢驗GB4789.7-2013[S].北京:中國標準出版社,2013.

[7]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.中華人民共和國計量檢定規程常用玻璃量器 JJG196-2006[S].北京:中國計量出版社,2007.

[8]王叔淳.食品分析質量保證與實驗室認可[M].北京:化學工業出版社,2004.

[9]中華人民共和國國家和計劃生育委員會.食品安全國家標準食品中致病菌限量GB29921-2013[S].北京:中國標準出版社,2013.

姚瑤（1987-），女，江蘇鹽城人，碩士。研究方向：食品檢驗。