HPLC測定消炎利膽沖劑中黃芩苷的含量
2017-07-10 00:51白梓靜高鵬
當代化工 2017年1期
白梓靜 高鵬
摘要：建立高效液相色譜法測定消炎利膽沖劑中黃芩苷含量的方法。色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18（250mm×4.6mm，5μm），流動相為0.2%磷酸溶液-甲醇（52：48），流速1.0mL·min-1，檢測波長276nm，柱溫28℃。黃芩苷在0.476～476μg·mL-1范圍內與其峰面積線性關系呈良好，其平均回收率為101.9%，RSD為1.31%。本法準確、易于操作，重現性與穩定性較好，可用于消炎利膽制劑中主要有效成分黃芩苷的含量測定。
關鍵詞：消炎利膽沖劑；黃芩苷；HPLC
中圖分類號：O 657 文獻標識碼：A 文章編號：1671-0460（2017）01-0177-03
消炎利膽沖劑主要是由黃芩、白芍、厚樸、金錢草、五味子等18味中藥提取加工成的復方制劑，具有消炎利膽，活血行氣止痛，排石的作用。方中主藥一黃芩的主要有效成分為黃芩苷。本文用高效液相色譜法測定黃芩苷含量，專屬性強、操作簡便快速，適用于對該制劑進行質量控制。
1 實驗部分
1.1 試劑、儀器
色譜甲醇、0.2%自制磷酸溶液、二次蒸餾水；
Agilent1200高效液相色譜儀；離心機；UVmini-1240紫外可見分光光度計；超聲清洗機。
1.2 色譜條件
色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：0.2%磷酸溶液-甲醇（52：48）；柱溫：28℃；流速：1.0mL·min-1；進樣量：20μL；檢測波長：276nm。
1.3 對照品與供試品
黃芩苷對照品（購于中國藥品生物制品檢定所，112426-201510）
消炎利膽沖劑（延安市中醫醫院制劑室，批準文號：陜藥管制字[2001]第3674號）
1.3 實驗方法
取消炎利膽沖劑一小袋置于研缽中研成粉末狀，精密稱定，混勻，取細粉約0.5g，加甲醇置于50mL量瓶中，超聲處理30min，自然放冷至室溫，用0.45μm的微孔膜過濾取得的上清液，即得供試品溶液。另取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每mL黃芩苷對照品溶液中含有0.476mg的黃芩苷對照品溶液。按醫院處方工藝制備不含黃芩的供試品，做成陰性對照品溶液。
2 結果與討論
2.1 色譜條件的選擇
2.1.1 流動相的選擇
測定黃芩苷時分別選擇0.2%磷酸-甲醇，冰醋酸-水-甲醇，0.1%的冰乙酸溶液與甲醇，0.1%的磷酸溶液與甲醇，乙腈0.2%磷酸，最終根據理論塔板數和峰形選擇了0.2%的磷酸溶液與甲醇（52：48）作為其流動相。
2.1.2 檢測波長的選擇
通過參考諸多文獻，經掃描發現黃芩苷對照品的最大吸收波長為276nm，最終將其確定為檢測波長。
2.2 待測樣品提取方法的選擇
本文分別考察了加熱回流和超聲2種方法，結果顯示超聲相對于加熱回流提取效果更好，更簡便可行，因此，選取了30min的超聲作為提取方法。
2.3 HPLC色譜圖
HPLC色譜圖見圖1-3。
2.4 驗證的特性指標測試數據及結果
2.4.1 線性范圍
精密量取黃芩苷對照品溶液適量，分別配制成濃度為0.000476、0.0476、0.0952、0.238、0.476mg·mL-1的溶液作為對照品溶液，用進樣針吸取20μL的上述不同濃度的對照品溶液進樣。以進樣濃度為橫坐標，色譜儀中的色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到的回歸方程為y=50727x+25.326，r=0.9996（n=5）。說明黃芩苷在0.476-476μg·mL-1范圍內線性關系良好。
2.4.2 穩定性實驗
取同一供試品溶液（20150326）粉末6份，按1.4項下制備供試品溶液，在相同色譜條件下于0，2，4，8和24h重復進樣，結果測得黃芩苷平均峰面積為1357.6，RSD為0.89%，表明在上述2.1實驗條件下，24h以內樣品溶液穩定性較好。
2.4.3 重復性實驗
取消炎利膽沖劑同一批次的（20150822）粉末6份，按1.4項下制備供試品溶液，精密量取20μL進行測定，結果黃芩苷的平均含量為2.63mg·g2+，黃芩苷的RSD為0.96%，表明重復性良好。
2.4.4 精密度實驗
取同一批供試品溶液（20151108）粉末6份，按1.4項下制備供試品溶液，精密量取20μL，連續進樣6次，平均峰面積為1378.9，RSD為0.93%，表明本系統精密度良好。
2.4.5 陰性對照品實驗
將原制劑中的中藥黃芩去除，再依據醫院關于此制劑的制備工藝及處方比例制成空白樣品，按1.4實驗方法項下的方法操作該空白樣品，制備成陰性對照液。用進樣針吸取20μL的陰性對照液，進樣后測定，結果表明基本無干擾。
2.4.6 回收率實驗
取同一批次消炎利膽沖劑樣品6份，研缽研細，每份仍稱取約0.5g，置于容量瓶中，分別加入3種稀釋后不同濃度的黃芩苷對照品溶液，然后按照樣品溶液制備方法操作，用進樣針吸取20μL溶液進樣，測定，結果見表1，黃芩苷的平均回收率為101.9%，RSD1.31%。
2.4.7 樣品含量測定
按上述含量測定方法測定該院消炎利膽沖劑中黃芩苷的含量，結果見下表2。
4 結束語
本文采用高效液相色譜法測定黃芩苷含量，其明顯優勢在于操作非常簡便、專屬性較強，適用于該院的消炎利膽沖劑在生產中的質量管理控制。
