超聲輔助提?。咝б合嗌V－串聯質譜法測定豆芽中福美雙的殘留量

袁京群，吳筱丹，李士敏，葛志偉

（浙江大學農生環測試中心，杭州310058）

超聲輔助提?。咝б合嗌V－串聯質譜法測定豆芽中福美雙的殘留量

袁京群，吳筱丹＊，李士敏，葛志偉

（浙江大學農生環測試中心，杭州310058）

豆芽是深受廣大消費者喜愛的蔬菜之一，但在市場監察中發現有豆芽生產商違規大量使用農藥福美雙等低毒殺菌劑來抑制微生物生長。福美雙屬二硫代氨基甲酸酯類保護性廣譜殺菌劑，在我國是在蔬菜和食用菌中登記使用的農藥，主要用于農作物霜霉病、疫病、炭疽病、禾谷類黑穗病及苗期黃枯病的防治。福美雙雖然抗菌譜廣，但有較高的蓄積性。動物試驗表明，福美雙對大鼠、小鼠、肉雞、魚類均有不同程度的毒性［1］。在豆芽生長違規使用農藥福美雙，將會對人體健康構成威脅。

目前對蔬菜水果中福美雙殘留量的測定大多采用高效液相色譜法［27］，也有少量文獻報道用液相色譜－質譜法［89］，前處理大多采用液液萃取或固相萃取法，整個操作過程繁瑣，耗時長。文獻［10］采用液相色譜－質譜法對豆芽中福美雙殘留量進行測定，前處理采用乙二胺四乙酸鈉、磷酸氫二鈉與檸檬酸按一定比例配成的緩沖溶液提取，固相萃取小柱凈化。本工作采用超聲輔助處理有機溶劑直接提取，提取液直接進高效液相色譜－串聯質譜聯用儀分析，建立一種專屬性強、靈敏度高、快速的高效液相色譜－串聯質譜法，用于豆芽中福美雙殘留量的測定，為豆芽食品安全評估檢測工作提供技術支持。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 6460型三重串聯四極桿液相色譜－質譜聯用儀；MiliQ型超純水儀；WH－861型旋渦混合器；HERMLE Z 300型離心機；WARING 800G型勻漿機。

福美雙標準儲備溶液：1.0g·L－1，稱取福美雙標準品適量，加甲醇溶解并定容，于4℃避光保存。

福美雙標準品的純度大于95.5%，甲醇、乙腈均為色譜純，試驗用水為超純水。

1.2 儀器工作條件

1）色譜條件 Zorbax XDB C18色譜柱（2.1mm×150mm，3.5μm），柱溫為40℃；流量為0.3mL·min－1，進樣體積10μL。流動相A為甲醇，B為含0.1%（體積分數，下同）甲酸的2mmol· L－1乙酸銨溶液。梯度洗脫程序：0～2.5min時，甲醇由19%升至90%；2.5～4.5 min時，甲醇保持90%。

2）質譜條件 離子源為電噴霧離子源，掃描模式為正離子掃描；干燥氣溫度325℃，干燥氣流量5L·min－1；霧化器壓力3.1×105Pa；鞘氣溫度350℃，鞘氣流量11 L·min－1；毛細管電壓3 000V；多反應監測模式，母離子（m／z）241，子離子（m／z）88，碰撞解離電壓60V，碰撞能量4eV。

1.3 試驗方法

豆芽樣品儲存于－20℃冰箱中，測定前均質混勻。

稱取豆芽試樣2.0g，加入無水硫酸鈉2g，乙二胺四乙酸（EDTA）0.012g，加入乙腈8mL，超聲提取30 min，離心取上清液，按儀器工作條件進行測定。

2 結果與討論

2.1 色譜和質譜條件的選擇

福美雙為含氮化合物，在電噴霧正離子掃描下得到響應較高的準分子離子峰［M＋H］＋，通過對碰撞解離電壓和碰撞能量等參數進行優化，得到相應的定量離子對，母離子（m／z）241，子離子（m／z）88，碰撞解離電壓60V，碰撞能量4eV。

試驗還考察了甲醇－0.05%甲酸溶液、甲醇－10mmol·L－1乙酸銨溶液、甲醇－含0.1%甲酸的2mmol·L－1乙酸銨溶液、乙腈－水及10 mmol· L－1乙酸銨溶液等流動相體系對分離效果的影響。結果表明：乙腈－水等體系存在嚴重的基質效應，甲醇－含0.1%甲酸的2mmol·L－1乙酸銨溶液作為流動相體系，通過優化梯度條件等，可以保證良好峰形，并減少基質效應。試驗選用流動相為甲醇－含0.1%甲酸的2mmol·L－1乙酸銨溶液。

2.2 樣品前處理方法的選擇

試驗采取空白豆芽樣品中加入福美雙標準品，乙腈勻漿超聲的提取方法，對提取溶劑倍量進行了考察，按試驗方法處理豆芽，溶劑加入量分別為1，2，4，6倍。結果顯示：4倍量溶劑提取效率高于2倍量溶劑，4倍量與6倍量無顯著差異，且回收率及基質效應符合要求。試驗選取樣品2.0g，加入乙腈8mL作為提取溶劑。

同時試驗還對提取過程中是否加入無水硫酸鈉和EDTA進行考察，結果發現加入無水硫酸鈉和EDTA可以明顯降低基質效應［6］。試驗在提取過程中加入無水硫酸鈉和EDTA。

2.3 基質效應

取豆芽空白基質，加入福美雙標準溶液，配制基質標準溶液系列，以福美雙的峰面積為縱坐標，對應的質量濃度為橫坐標繪制基質標準曲線，另以乙腈直接配制相同濃度的標準溶液系列，同法繪制溶劑標準曲線。采用基質標準曲線斜率和溶劑標準曲線斜率之比（k）來評價基質效應，當k大于1.1時，為基質增強效應；當k小于0.9為基質減弱效應；當k在0.9～1.1之間時，為基質效應不明顯［11］。計算得斜率比1.03，無明顯基質效應。

2.4 標準曲線和檢出限

以甲醇為介質配制質量濃度分別為0.50，1.0，5.0，10，50，100，200μg·L－1的福美雙標準溶液系列，以福美雙的峰面積為縱坐標，質量濃度為橫坐標繪制標準曲線。結果表明：福美雙的質量濃度在0.5～200μg·L－1內呈線性，線性回歸方程為y＝742.1 x＋45.33，相關系數為0.999 1。

采用在空白豆芽樣品中添加目標組分的方法，以3倍的信噪比計算方法的檢出限（3S／N）為0.1μg·L－1，以10倍的信噪比計算方法的測定下限（10S／N）為0.5μg·L－1，相當于豆芽中方法的測定下限為2μg·kg－1。食品安全國家標準規定番茄、黃瓜等蔬菜中福美雙最大殘留量不得大于5mg·kg－1，方法的測定下限遠小于國家標準規定。

2.5 方法的精密度和回收試驗

分別在空白豆芽樣品基質中添加4個濃度水平的福美雙標準溶液，每個濃度水平按試驗方法平行測定6次，其結果見表1。

表1 精密度及回收試驗結果（n＝6）Tab.1 Results of tests for precision and recovery（n＝6）

典型的豆芽樣品中福美雙色譜圖見圖1。

圖1 色譜圖Fig.1 Chromatograms

由表1可知：豆芽樣品中福美雙的回收率在99.6%～102%之間，RSD均小于5.0%。結果表明，方法滿足豆芽樣品中福美雙殘留的測定要求。

2.6 樣品分析

按試驗方法測定不同地區的20批次豆芽樣本中福美雙殘留量，結果表明，所有樣品中福美雙的含量均低于方法的測定下限。

本工作采用超聲輔助提?。咝б合嗌V－串聯質譜法測定豆芽中福美雙殘留量。方法操作簡便快速、提取效率高、方法靈敏度高、專屬性強、精密度和準確度高等優點，能滿足豆芽中福美雙殘留的快速測定要求。

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O657.63

B

1001－4020（2017）05－0569－03

10.11973／lhjy－hx201705017

2017－01－07

浙江省科技廳分析測試科技計劃項目（2016C37059）

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