改進HPLC法測定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量

鄭旭霞，周宇雪，劉培建[1.河南省洛陽正骨醫院（河南省骨科醫院）藥劑科，鄭州45005；.鄭州兒童醫院藥學部，鄭州450053]

改進HPLC法測定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量

鄭旭霞1＊，周宇雪2，劉培建1#[1.河南省洛陽正骨醫院（河南省骨科醫院）藥劑科，鄭州450052；2.鄭州兒童醫院藥學部，鄭州450053]

目的：改進高效液相色譜法測定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Chiralpak IC，流動相為正己烷（含0.1%三氟乙酸）-異丙醇（90∶10，V/V），流速為0.8m L/m in，檢測波長為268 nm，柱溫為25℃，進樣量為10μL。結果：酮洛芬檢測質量濃度線性范圍為0.025～0.5mg/m L（r＝0.999 8），定量限為1.0mg/L，檢測限為0.2mg/L；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD＜2%；加樣回收率為96.36%～100.32%（RSD＝1.87%，n＝6）。結論：該方法操作簡便，準確快速，適用于測定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量。

酮洛芬腸溶膠囊；酮洛芬；含量；高效液相色譜法

酮洛芬（Ketoprofen）又名酮基布洛芬，是一種2-芳基丙酸非甾體抗炎藥，可抑制環氧化酶活性，還可在一定程度上抑制脂氧酶活性，減少緩激肽生成，改善炎癥和損傷部位情況[1]。此外，酮洛芬還有一定的中樞性鎮痛作用，對風濕、類風濕性關節炎、脊髓炎、痛風等具有較好療效[2-3]，是目前臨床應用較多的抗炎鎮痛藥之一[4]。酮洛芬腸溶膠囊質量標準收載于2015年版《中國藥典》（二部）[5]，但現有標準和相關文獻中多采用反向高效液相色譜法（HPLC）[5-8]、紫外分光光度法[9-10]等，分離效果均不是很理想。因此，筆者采用HPLC法在正向色譜條件下測定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量，以期為完善該制劑的質量標準提供參考。

1 材料

1.1 儀器

HP 1200型HPLC儀，包括1200可變波長檢測器、1200化學工作站、1200標準自動進樣器（美國Agilent公司）；BP 211D型電子分析天平（德國Sartorius公司）；

1.2 藥品與試劑

酮洛芬腸溶膠囊（山東華魯制藥有限公司，批號：091002、091103、100106，規格：50mg/片）；酮洛芬對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100337-200502，純度：＞98%）；正己烷、異丙醇和無水乙醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Chiralpak IC（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：正己烷（含0.1%三氟乙酸）-異丙醇（90∶10，V/V）；流速：0.8m L/m in；檢測波長：268 nm；柱溫：25℃；進樣量：10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液精密稱取酮洛芬對照品50.0mg，置于100m L量瓶中，加乙醇溶解并定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液精密稱取樣品內容物適量（相當于酮洛芬25mg），置于50m L量瓶中，加乙醇30m L，溶解并定容，搖勻，經0.45μm微孔濾膜，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液按樣品的處方比例和制備工藝制備缺酮洛芬的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，理論板數以S-酮洛芬、R-酮洛芬峰計均≥3 000；各成分均能達到基線分離，分離度＞2。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關系考察

精密量取“2.2.1”項下對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0m L，分別置于10m L量瓶中，加乙醇定容，制成系列對照品溶液。取上述系列對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以酮洛芬質量濃度（x，mg/m L）為橫坐標，峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得酮洛芬回歸方程y＝18 923x－9.764 6（r＝0.999 8）。結果表明，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）檢測質量濃度線性范圍為0.025～0.5mg/m L。

2.5 定量限（LOQ）與檢測限（LOD）考察

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。當信噪比為10∶1時，得LOQ；當信噪比為3∶1時，得LOD。結果，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）的LOQ為1.0 mg/L，LOD為0.2mg/L。

2.6 精密度試驗

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）峰面積的RSD＝0.13%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

取“2.2.1”項下供試品溶液（批號：091103）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12、24 h時，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）峰面積的RSD＝0.97%（n＝8），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內穩定性良好。

2.8 重復性試驗

精密稱取同一批樣品（批號：091103）適量，共6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量。結果，酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）含量的平均值為98.1%，RSD＝1.12%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品（批號：091103）適量，共6份，分別置于50m L量瓶中，各加入一定質量的酮洛芬對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Resu ltsof recovery test（n＝6）

2.10 樣品含量測定

取3批樣品（批號：091002、091103、100106）各適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定3次，記錄峰面積并計算樣品中酮洛芬（R-酮洛芬與S-酮洛芬之和）的含量。結果，3批樣品中，酮洛芬的含量分別為97.12%、97.50%、99.20%（n＝3）。

3 討論

3.1 流動相的選擇

本試驗考察了不同比例正己烷（含0.1%三氟乙酸）-無水乙醇和正己烷（各0.1%三氟乙酸）-異丙醇等作為流動相體系及其不同體系的體積比對酮洛芬色譜峰的影響。結果表明，流動相為正己烷（含0.1%三氟乙酸）-無水乙醇時，S-酮洛芬和R-酮洛芬未達到基線分離。綜合考慮分析時間和分離度，故選用正己烷（含0.1%三氟乙酸）-異丙醇（90∶10，V/V）作為流動相。

3.2 柱溫和流速的選擇

本試驗考察了不同柱溫和流速對酮洛芬對映體的保留時間和分離度的影響。結果，在10～35℃范圍內，綜合考慮S-酮洛芬和R-酮洛芬的分離度和試驗溫度的易操控性，選用25℃為最佳柱溫。在0.2～1.2m L/m in內，綜合分析時間和分離度，選用0.8m L/m in為最佳流速。

3.3 酮洛芬的構型

酮洛芬α位上有1個手性碳原子，存在一對光學異構S-酮洛芬和R-酮洛芬[10-11]。本試驗主要考察酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量，故相關試驗中以S-酮洛芬與R-酮洛芬峰面積之和來計算酮洛芬的含量，這也為后續測定酮洛芬腸溶膠囊中S-酮洛芬與R-酮洛芬的含量作一定鋪墊。

綜上所述，本方法操作簡便、準確快速，適用于測定酮洛芬腸溶膠囊中酮洛芬的含量。

[1]楊青，李明.HPLC法測定酮洛芬緩釋膠囊中主藥的含量[J].中國藥房，2007，18（25）：1980-1981.

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（編輯：劉柳）

Content Determ ination of Ketoprofen in Ketoprofen Enteric-coated Capsulesby Improving HPLC

ZHENG Xuxia1，ZHOU Yuxue2，LIU Peijian1（1.Dept.of Pharmacy，Luoyang Orthopedic Hospital of Henan Province/O rthopedic Hospital of Henan Province，Zhengzhou 450052，China；2.Dept.of Pharmacy，Zhengzhou Children’s Hospital，Zhengzhou 450053，China）

OBJECTIVE：To improve HPLC for content determ ination of ketoprofen in Ketoprofen enteric-coated capsules. METHODS：HPLC method wasadopted.The determination was performed on Chiralpak IC column w ith mobile phase consisted of n-hexane（0.1%TFA）-isopropanol（90∶10，V/V）at a flow rate of 0.8 m L/m in.The detection wavelength was set at 268 nm，and column temperature was 25℃.The sample size was 10μL.RESULTS：The linear range of ketoprofen were 0.025-0.5 mg/m L（r＝0.999 8）.The lim it of quantitation was1.0mg/L，and lim it of detection was0.2mg/L.RSDsof precision，stability and reproducibility testswere lower than 2%；recoverieswere 96.36%-100.32%（RSD＝1.87%，n＝6）.CONCLUSIONS：Themethod is simple，accurate and rapid，and can be used for the content determ ination of ketoprofen in Ketoprofen enteric-coated capsules.

Ketoprofen enteric-coated capsules；Ketoprofen；Content；HPLC

R 917

A

1001-0408（2017）18-2579-03

2016-06-30

2016-12-16）

＊主管藥師，碩士。研究方向：臨床藥學。電話：0371-85965137。E-mail：zhengxuxia1988@163.com

#通信作者：副主任藥師。研究方向：中草藥分析及質量控制。電話：0371-85965023。E-mail：707655091@qq.com Exceed-Cd-20型實驗室超純水機（蘇州艾科水處理設備工程有限公司）。

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.18.37