金銀花與葉醇提物對油脂的抗氧化活性比較

南海娟，王正榮，葛亞明，周亞芳

1(河南科技學院 食品學院，河南 新鄉，453003)2(河南科技學院 動物科學學院，河南 新鄉，453003)

金銀花與葉醇提物對油脂的抗氧化活性比較

南海娟1*，王正榮1，葛亞明2，周亞芳1

1(河南科技學院 食品學院，河南 新鄉，453003)2(河南科技學院 動物科學學院，河南 新鄉，453003)

以金銀花葉和花為原料，將葉與花醇提物添加到食用油脂中，采用Schaal烘箱法，以油脂的過氧化值為評價指標，研究金銀花葉與花醇提物對食用油脂的抗氧化作用。結果表明，金銀花、葉醇提物能顯著抑制玉米油、大豆油、豬油、花生油的氧化，花提取物顯著優于葉提取物。對4種油的抗氧化能力由強到弱依次為:大豆油﹥豬油=玉米油﹥花生油?；ù继嵛锏目寡趸钚苑謩e是葉醇提物、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(butylated hydroxytoluene，BHT)、特丁基對苯二酚(tertiary butylhydroquinone ，TBHQ)、檸檬酸、抗壞血酸的1.12、1.33、1.19、2.31、1.40倍，葉醇提物的抗氧化活性和TBHQ相當?；?、葉醇提物的抗氧化活性隨濃度的增加而增強?；ù继嵛锱cTBHQ、檸檬酸、BHT、抗壞血酸協同后，其抗氧化能力分別提高了19%、13%、9%、1%。葉醇提物與檸檬酸、BHT和TBHQ復配后，其抗氧化能力分別提高了18%、12%和27%。

金銀花與葉；醇提物；抗氧化活性；食用油脂

金銀花是藥食同源的一種植物，其提取物的主要成分為綠原酸、總黃酮、酚類物質，可作為天然抗氧化劑應用到食品中，具有很好的應用前景[1-4]。一般情況下，金銀花每畝產量很難超過 100 kg干花，金銀花葉作為生產金銀花的副產品，產量較高，約為花的 10 倍，其一直被視為非藥用部位而長期未得到有效利用。本課題組研究發現，金銀花葉的主要成分為多糖、綠原酸、總黃酮，有效成分不亞于花，同一時期的金銀花葉中綠原酸類成分約為花的 65%，而黃酮類的含量是花的2.78倍，綠原酸、黃酮具有抗氧化，清除自由基的作用，因此可用金銀花葉開發天然抗氧化劑。油脂在貯藏保存過程中慢慢氧化導致酸敗，影響油脂的品質[5]，以往人們將特丁基對苯二酚(tertiary butylhydroquinone，TBHQ)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(butylated hydroxytoluene，BHT)、檸檬酸、抗壞血酸等合成的抗氧化劑加入油脂中，防止油脂的酸敗、氧化和變色等品質劣變，但是這些合成的抗氧化劑對人體存在潛在危害，因此很多研究都集中在對天然抗氧化劑的開發上[6-7]。孫德梅[8]研究發現，金銀花葉提取物對豆油有一定的抗氧化活性；石奇[9]研究發現，金銀花綠原酸具有較強的抗氧化能力，對·OH的清除率達 61.26%，對O2-·的清除率高達94.81%，對豬油的抗氧化能力優于同濃度下的Vc。朱振寶[10]等研究發現，金銀花水提物和醇提物對豬油具有一定的抗氧化活性，且與BHT，TBHQ基本相當。馬彥芳[11]研究發現，金銀花醇提物對菜籽油、花生油、酥油、色拉油、羊油均有較好的抗氧化作用，對酥油、羊油的抗氧化效果尤為明顯?？梢钥闯?，對金銀花而言，在油脂的抗氧化作用方面，前人的研究主要集中在花，僅對幾種油脂的抗氧化效果進行了研究，與其他油脂抗氧化劑的協同效果方面的研究尚未見報道。而對金銀花葉的研究更少，且僅對其提取物在豆油中的抗氧化效果進行了研究。本實驗在前人研究的基礎上，首次詳細研究了金銀花葉醇提物對豬油、花生油、玉米油等的抗氧化效果，且與金銀花及常用的油脂抗氧劑BHT、TBHQ、檸檬酸、抗壞血酸進行了比較，同時研究了花、葉醇提物與這些抗氧化劑的協同作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮金銀花、葉，采自新鄉市封丘金銀花GAP基地；新鮮豬板油，自制；花生油、玉米油、大豆油，購自世紀華聯超市；BHT、TBHQ、檸檬酸、抗壞血酸，均為食品級。

無水乙醇、KI、冰乙酸、異辛烷，可溶性淀粉、Na2S2O3，均為分析純。

1.2 儀器與設備

FW-400A傾斜式高速萬能粉碎機,北京中興偉業儀器有限公司制造；60目標準篩,浙江上虞市星星儀器設備有限公司；SHA-C數顯水浴恒溫振蕩器,金壇華峰儀器有限公司；HH-ZK6智能水浴鍋,鄭州歐卡儀器設備有限公司；SHP-160FE智能生化培養箱,上海三發科學儀器有限公司；ME104E電子天平,梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 處理樣品

將金銀花與葉在40 ℃烘干，至水分恒定后，將其放入萬能粉碎機中粉碎，過60目篩，將粉末收集起來放入自封袋中備用。

1.3.2 醇提物的制備

安裝好回流提取裝置，將一定量的金銀花和葉樣品分別置于2個回流裝置的圓底燒瓶中，同時加入體積分數為70%的乙醇進行提取，料液比為1∶5(g∶mL)，水浴提取溫度60 ℃，提取時間3h，然后對提取液真空抽濾，濾液收集到圓底燒瓶中備用，濾渣再繼續用同樣的方法浸提3 h，重復2次，將所得的濾液合并，經過60 ℃旋轉蒸發濃縮后，真空干燥，最后將干燥后固體充分研磨，得棕黃色粉末，分別為金銀花葉和花醇提物，放入自封袋中，冰箱中貯藏備用。

1.3.3 豬油的制備

將買回的豬板油沖洗干凈，切成小肉丁，放入炒鍋中，開中大火煮開后立刻轉小火慢熬，整個過程不蓋鍋蓋，并不斷攪拌使受熱均勻。等板油丁慢慢變成微黃色，體積縮成很小塊時即可關火，把油渣撈出，鍋中的油倒入一個容器中，室溫放涼，封上保鮮膜放入冰箱中冷藏，備用。

1.3.4 油脂抗氧化實驗(Schaal烘箱法)[12]

分別取30 g玉米油、花生油、大豆油、豬油，依次置于50 mL小燒杯中。分別將金銀花葉與花的醇提物、抗氧化劑、金銀花葉與花醇提物和抗氧化劑混合物加入30 g油樣中，60 ℃充分溶解混勻，將油樣敞口放于60 ℃恒溫箱中，使油脂強制氧化，每隔1 d攪拌1次，每次1 min，并且要變換位置，每2 d測1次各個油樣的過氧化值，平行測定3次。

1.3.5 油脂過氧化值的測定方法[13]

參照GB/T 5538—2005進行測定。

1.3.6 金銀花葉、花醇提物對不同油脂的抗氧化作用

取12個50 mL的小燒杯，將0.05%的金銀花葉與花醇提物(以油質量計，下同)分別添加到豬油、花生油、玉米油、大豆油中。同時做豬油、花生油、玉米油、大豆油空白，按1.3.4的方法進行抗氧化實驗，按1.3.5的方法測定不同保藏期下油脂的過氧化值，研究金銀花葉與花醇提物對不同油脂的抗氧化作用。

1.3.7 金銀花葉、花醇提物、其它抗氧化劑對豬油的抗氧化作用

取7個50 mL小燒杯，分別將0.05%金銀花醇提物、0.05%金銀花葉醇提物、0.05%BHT、0.05%TBHQ、0.05%檸檬酸、0.05%抗壞血酸添加到30 g豬油中，同時做豬油空白，按1.3.4的方法進行抗氧化實驗，按1.3.5的方法測定不同保藏期下油脂的過氧化值。

1.3.8 不同添加量的金銀花葉與花醇提物對豬油的抗氧化實驗

取9個50 mL小燒杯，分別加入0.05%、0.15%、0.30%、0.45%的金銀花葉與花醇提物加入30 g豬油中，同時做豬油空白，按1.3.4的方法進行抗氧化實驗，按1.3.5的方法測定不同保藏期下油脂的過氧化值，研究金銀花葉與花醇提物不同添加量對油脂的抗氧化作用。

1.3.9 金銀花葉與花醇提物與其他抗氧化劑的協同增效作用

取11個50 mL小燒杯，分別取0.05%金銀花醇提物與0.05%BHT、0.05%TBHQ、0.05%檸檬酸、0.05%抗壞血酸4種復配物，以及0.05%金銀花葉醇提物與0.05%BHT、0.05%TBHQ、0.05%檸檬酸、0.05%抗壞血酸4種復配物，將8種復配物分別加入到30g豬油中，按1.3.4的方法進行抗氧化實驗，按1.3.5的方法測定不同保藏期下油脂的過氧化值，研究金銀花葉與花醇提物與其他抗氧化劑的協同增效作用。

1.3.10 數據處理

采用Excel 2007與SPSS 20軟件進行數據處理，采用ANOVA進行方差分析，采用Duncan法檢驗進行差異顯著性分析，P<0.05視為影響顯著。

2 結果與分析

2.1 金銀花葉、花醇提物對不同油樣的抗氧化作用比較

向30g的豬油、花生油、玉米油、大豆油中分別添加0.05%的金銀花葉和花醇提物，不同貯藏時間油樣的過氧化值見圖1～圖4，各系列間差異顯著性見表1，表2。

圖1 花、葉提取物對玉米油的抗氧化結果Fig.1 Antioxidant activity of flowers and leaves extract on corn oil

圖2 花、葉提取物對大豆油的抗氧化結果Fig.2 Antioxidant activity of flowers and leaves extract on soybean oil

圖3 花、葉提取物對花生油的抗氧化結果Fig.3 Antioxidant activity of flowers and leaves extract on peanut oil

圖4 花、葉提取物對豬油的抗氧化結果Fig.4 Antioxidant activity of flowers and leaves extract on lard oil

表1 各系列間差異顯著性

注：表中字母相同者表示差異不顯著，字母不同者表示差異顯著(P<0.05)。

表2 各系列間差異顯著性

注：表中字母相同者表示差異不顯著，字母不同者表示差異顯著(P<0.05)。

由圖1～圖4及表1，表2可知，隨著時間的延長，各種油樣的過氧化值均不斷升高，前8 d升高緩慢，從第10天開始，添加提取物的油樣增加緩慢，而空白油樣急劇上升，表明金銀花和葉醇提物對4種油的氧化酸敗都有不同程度的抑制作用，分析原因應該是花、葉醇提物中含較多綠原酸、黃酮，易失去 H·, 自身生成相對穩定的自由基，并將H·提供給油脂氧化過程中產生的ROO·或 R·，延長了脂肪氧化的誘導期, 終止了油脂氧化鏈式反應的傳播，從而不同程度上抑制了油脂的氧化。從圖1～圖4中還可看出，第2，4，6，8天時，添加花醇提物和葉醇提物的4種油的過氧化值基本上小于4種油樣空白，但添加物和空白之間差異不顯著，第10天時，添加花醇提物和葉醇提物的4種油的過氧化值明顯小于油樣空白，花、葉醇提物對玉米油、大豆油、豬油、花生油氧化的抑制率分別為52%和47%、46%和43%、55%和51%、47%和39%，花、葉之間除了豬油外，差異均不顯著，但與油樣空白的差異均極顯著。第12天時，花、葉醇提物對玉米油、大豆油、豬油、花生油氧化的抑制率分別為52%和45%、56%和47%、52%和46%、45%和41%，除了添加花、葉醇提物于花生油外，其余兩兩之間差異均極顯著，說明金銀花及葉的醇提物能顯著抑制4種油的氧化，花提取物顯著優于葉醇提物。對4種油的抗氧化能力由強到弱依次為大豆油﹥豬油=玉米油﹥花生油。

2.2 金銀花葉、花醇提物、不同抗氧化劑對豬油的抗氧化作用比較

分別將0.05%金銀花、葉醇提物、BHT、TBHQ、檸檬酸、抗壞血酸添加到30g豬油中，保藏不同時間，油樣的過氧化值見圖5，圖6，各系列間差異顯著性見表3。

圖5 花、葉提取物與其他抗氧化劑比較Fig.5 Flowers and leaves extract compared with other antioxidants

圖6 其他抗氧化劑的抗氧化能力Fig.6 Antioxidant activity of other antioxidants

表3 各系列間差異顯著性

注：表中字母相同者表示差異不顯著，字母不同者表示差異顯著(P<0.05)。

由圖5，圖6及表3可以看出，第2天時，花、葉醇提物并未表現出明顯的抗氧化活性，因為此時油脂氧化尚處于誘導期，第4天～第8天，金銀花、葉醇提物與豬油空白相比，雖然表現出一定的抗氧化性，但差異不顯著，傳統的油脂抗氧化劑TBHQ對豬油的抗氧化效果明顯優于花、葉醇提物，到第10天時，花、葉醇提物和其他抗氧化劑對豬油均表現出明顯的抗氧化活性，且差異極顯著，但他們彼此之間差異不顯著。到了第12天，金銀花、葉醇提物對豬油表現出了極強的抗氧化活性，尤其花醇提物的抗氧化活性最強，對豬油的抗氧化能力分別是葉醇提物、BHT、TBHQ、檸檬酸、抗壞血酸的1.12、1.33、1.19、2.31、1.40倍。葉醇提物對豬油的抗氧化活性已經和TBHQ相當，BHT和抗壞血酸對豬油的抗氧化能力無明顯差異，檸檬酸的最弱，但它們對豬油的抗氧花能力均達到了極顯著水平。

2.3 不同添加量的金銀花葉、花醇提物對豬油的抗氧化作用比較

分別添加0.05%、0.15%、0.3%、0.45%金銀花、葉醇提物于30 g豬油中，保藏不同時間，油樣的過氧化值見圖7，圖8，各系列間差異顯著性見表4。

圖7 葉的抗氧化效果Fig.7 Antioxidant effect of leaves

圖8 花的抗氧化效果Fig.8 Antioxidant effect of flowers

表4 各系列間差異顯著性

注：表中字母相同者表示差異不顯著，字母不同者表示差異顯著(P<0.05)。

由圖7，圖8及表4可以看出，隨著貯藏時間的延長，添加提取物的豬油的過氧化值逐漸增加。當添加不同量的金銀花葉與花醇提物后，與圖3相比，加樣豬油的過氧化值均比空白組的要低，說明各濃度的提取物對豬油均具有一定的抗氧化活性。在相同的貯藏時間內，同一添加物的不同添加水平，在第12天時，0.05%、0.15%的添加量之間差異不顯著，而高濃度的添加量0.3%、0.45%的抗氧化能力明顯優于2個低濃度，且它們之間的差異達到了顯著水平。同時也可看出，相同添加量的葉與花醇提物，從第10天開始，各濃度花醇提物的抗氧化活性均顯著高于葉醇提物。

2.4 金銀花葉、花醇提物與其它抗氧化劑的協同增效作用

取30g豬油，向其中分別加入豬油量0.05%的金銀花、葉醇提物、BHT、TBHQ、檸檬酸、抗壞血酸的兩兩組合物，保藏不同時間，油樣的過氧化值見圖9，圖10，各系列間差異顯著性見表5。

圖9 花、葉提取物與BHT、TBHQ的協同作用Fig.9 Synergistic effect of flower and leaf extract and BHT，TBHQ

圖10 花、葉提取物與檸檬酸、抗壞血酸的協同作用Fig.10 Synergistic effect of flower and leaf extract and citric acid，ascorbic acid

由圖9，圖10及表5可以看出，對于花醇提物來說，與其他抗氧化劑協同后，發生一系列復雜的反應，表現出協同增效的作用。對豬油的抗氧化能力由強到弱依次為TBHQ>檸檬酸>BHT>抗壞血酸，且第12天時，差異均達到了顯著水平，與豬油空白的過氧化值數據相比，此時金銀花醇提物與TBHQ、檸檬酸、BHT、抗壞血酸協同使用后，對豬油的抗氧化能力分別提高了19%、13%、9%、1%，說明花醇提物與TBHQ和檸檬酸的復配效果很好，與抗壞血酸復配后效果不顯著。

表5 各系列間差異顯著性

注：表中字母相同者表示差異不顯著，字母不同者表示差異顯著(P<0.05)。

對于葉醇提物來說，與抗壞血酸復配后，對豬油的抗氧化能力不升反降，與檸檬酸復配后，前8d復配效果不明顯，8d后協同效果才顯現出來，第12天時抗氧化能力提高了18%。與BHT和TBHQ復配后，抗氧化能力明顯提高，第12天時，抗氧化能力分別提高了12%和27%。在實驗時間范圍內，與相同抗氧化劑協同時，金銀花醇提物的抗氧化能力均高于葉醇提物，而且基本上差異都達到了顯著水平。

3 結論

(1)金銀花、葉醇提物能顯著抑制玉米油、大豆油、豬油、花生油的氧化作用，花醇提物顯著優于葉醇提物。貯藏12d時，花、葉醇提物對4種油氧化的抑制率分別為52%和45%、56%和47%、52%和46%、45%和41%，對4種油的抗氧化能力由強到弱依次為大豆油﹥豬油=玉米油﹥花生油。

(2) 金銀花醇提物對豬油表現出了極強的抗氧化活性，貯藏12d時，其抗氧化能力分別是葉醇提物、BHT、TBHQ、檸檬酸、抗壞血酸的1.12、1.33、1.19、2.31、1.40倍。葉醇提物對豬油的抗氧化活性不及花醇提物，但和TBHQ相當，因此可進一步開發金銀花、葉醇提物做為油脂抗氧化劑。

(3)金銀花、葉醇提物的抗氧化活性隨著濃度的增加而增強，低濃度時抗氧化效果不明顯，當添加量高于0.15%時，隨著濃度的增加，抗氧化能力顯著提高。從第10天開始，各濃度花醇提物的抗氧化活性均顯著高于葉醇提物。

(4)花醇提物與其他抗氧化劑表現出協同增效的作用。協同增效作用由強到弱依次為：與TBHQ協同>與檸檬酸協同>與BHT協同>與抗壞血酸協同，且第12天時，差異均達到了顯著水平，且與這4種抗氧化劑協同后，其抗氧化能力分別提高了19%、13%、9%、1%。

(5)葉醇提物與抗壞血酸復配后，對豬油的抗氧化能力不升反降，與檸檬酸、BHT和TBHQ復配后，表現出很好的協同增效作用，其抗氧化能力分別提高了18%、12%和27%。與相同抗氧化劑協同時，金銀花醇提物的抗氧化能力均高于葉醇提物，且差異顯著。

(6)金銀花醇提物對油脂的抗氧化活性優于葉醇提物，雖然目前尚沒有對其機理的研究報道，推斷其可能原因，首先：盡管金銀花醇提物中黃酮類物質含量低于葉醇提物，但其綠原酸含量是葉的1.54倍，綠原酸及其衍生物具有比抗壞血酸、BHA、咖啡酸和VE更強的自由基清除效果，綠原酸結構中的多羥基使它具有特殊的清除自由基能力和抗氧化活性，與黃酮類相比，其結構上特有的鄰二羥基極大地增強了其抗氧化活性，甚至可以認為這是它的高效抗氧化性的結構基礎。由于鄰位羥基可形成分子內氫鍵，因而降低了體系能量，使自由基較穩定，說明綠原酸更易生成自由基，抗氧化活性更高[14]。其次：金銀花和葉醇提物屬于混合物，各抗氧化活性成分之間的協同增效作用也可能是原因之一，其構效關系也將是下一步研究的方向。金銀花和葉醇提物是潛在的優良油脂抗氧化劑，值得進一步開發利用。

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Comparison of antioxidant activity of honeysuckle's flowers and leaves alcohol extract on edible oils and fats

NAN Hai-juan1*,WANG Zheng-rong1,GE Ya-ming2,ZHOU Ya-fang1

1(College of Food，Henan Institute of Science and Technology，Xinxiang 453003，China)2(College of Animal Science, Henan Institute of Science and Technology，Xinxiang 453003，China)

Honeysuckle's leaves and flowers alcohol extracts were added into edible oil and fats. The antioxidant effects were investigated by Schaal oven method and the peroxide value was used as an evaluation index. The results showed that the alcohol extract from honeysuckle’s leaves and flowers had a great antioxidant effects on corn oil, soybean oil, lard oil, peanut oil, flowers extract significantly better than that of leaves extract. Antioxidant effects on four edible oils and fats from strong to weak was: soybean oil﹥lard oil= corn oil﹥peanut oil. Antioxidant ability of honeysuckle’s flowers extract was 1.12, 1.33, 1.19, 2.31, 1.40 times higher than that of leaves; BHT, TBHQ; the antioxidant activity of leaves ethanol extract was the same as TBHQ. Antioxidant activity of flowers and leaves extracts enhanced with the increase of the concentration. When flowers alcohol extract combined with TBHQ, citric acid, BHT, ascorbic acid separately, its antioxidant capacity increased by 19%, 13%, 9% and 1% respectively. When leaves alcohol extract combined with citric acid, BHT, TBHQ separately, its antioxidant capacity increased by 18%, 12% and 27% respectively.

honeysuckle's flowers and leaves; alcohol extract; antioxidant activity;edible oils and fats

碩士，副教授(本文通訊作者,E-mail：nanhaijuan1@163.com)。

河南省高等學校重點科研項目基金(16A550009)；新鄉市科技創新發展專項項目基金(CXGG16028)；河南省基礎與前沿技術研究計劃自然科學基金(132300410353)

2016-06-15，改回日期：2016-11-21

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201706029