復方山莨菪堿新斯的明緩釋片的制備及體外釋藥行為研究Δ

李雨霏，周小莉，金 拓（.上海交通大學藥學院，上海 200240；2.無錫圓道醫藥科技研究院有限公司，江蘇無錫 24092）

復方山莨菪堿新斯的明緩釋片的制備及體外釋藥行為研究Δ

李雨霏1＊，周小莉2#，金 拓1（1.上海交通大學藥學院，上海 200240；2.無錫圓道醫藥科技研究院有限公司，江蘇無錫 214092）

目的：制備復方山莨菪堿新斯的明緩釋片，研究其體外釋藥行為。方法：以消旋山莨菪堿和甲硫酸新斯的明為主藥，羥丙基甲基纖維素K4M為緩釋骨架材料，硬脂酸鎂為潤滑劑，聚乙烯吡咯烷酮為黏合劑，預膠化淀粉為稀釋劑，微晶纖維素為崩解劑和填充劑，采用濕法制粒和直接壓片法制備復方山莨菪堿新斯的明緩釋片，高效液相色譜法檢測2個主藥12 h內的體外累積釋放度。結果：成功制得復方山莨菪堿新斯的明緩釋片，其在12 h內體外釋放基本完成，山莨菪堿累積釋放度為91.3%，新斯的明累積釋放度為96.5%。結論：成功制得可累積釋藥12 h的復方山莨菪堿新斯的明緩釋片。

山莨菪堿；新斯的明；復方緩釋片；體外釋藥

膽堿能抗炎通路是免疫調節的一種神經生理機制，通過迷走神經釋放乙酰膽堿，隨后乙酰膽堿與巨噬細胞和其他細胞因子分泌細胞表面的α7煙堿型乙酰膽堿受體（α7nAchR）相互作用，從而抑制相關炎癥因子的合成與釋放，防止組織損傷[1-2]。消旋山莨菪堿是常用的M膽堿受體拮抗藥[3]，甲硫酸新斯的明是常用的膽堿酯酶抑制劑[4]，近年來研究表明，消旋山莨菪堿聯用甲硫酸新斯的明，可顯著增強膽堿能抗炎通路，激活α7nAchR，發揮抗炎療效[5-6]。但由于消旋山莨菪堿和甲硫酸新斯的明體內半衰期較短，分別僅為40 min和0.89～1.2 h，難以滿足持續抗炎治療的需求；另外，在兩個活性成分劑量相差懸殊（最佳配伍為500∶1）的情況下[7]，同一片劑難以實現平行緩釋，故關于兩者的復方緩釋片相關研究較少。本研究以羥丙基甲基纖維素（HPMC）為緩釋骨架材料，采用濕法制粒和直接壓片法制備消旋山莨菪堿和甲硫酸新斯的明的復方制劑復方山莨菪堿新斯的明緩釋片，以期同時延長兩種藥物作用時間，減少給藥次數。

1 材料

1.1 儀器

ZP-5旋轉式壓片機（上海天和制藥機械有限公司）；RCZ-6C1藥物溶出度儀（上海黃海藥檢儀器廠）；Agilent 1260高效液相色譜儀[安捷倫科技（中國）有限公司]；超純水儀（上海樂楓生物科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

消旋山莨菪堿原料藥及對照品、甲硫酸新斯的明原料藥及對照品（上海江萊生物科技有限公司，批號：JL201502110137、LJ150921010、JL20150303158、LJ150-618712，純度均為99.00%）；HPMC K4M（上?？房蛋录夹g有限公司，批號：PD416379）；硬脂酸鎂（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號：28395）；聚乙烯吡咯烷酮K30（PVP K30，安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號：131013）；預膠化淀粉（曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號：1305012）；微晶纖維素（MCC，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20120323）。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Agilent SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；消旋山莨菪堿流動相：0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.15%三乙胺，用磷酸調pH至6.5）-甲醇（70∶30）；甲硫酸新斯的明流動相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.001 5 mol/L庚烷磺酸鈉，用磷酸調pH至3.0）-乙腈（87∶13）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：220 nm；柱溫：40℃；進樣量：20 μL。

2.1.2 對照品溶液制備 精密稱取消旋山莨菪堿對照品和甲硫酸新斯的明對照品適量，分別置于100 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸適量超聲30 min后再稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得消旋山莨菪堿對照品溶液和甲硫酸新斯的明對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液制備 稱取復方山莨菪堿新斯的明緩釋片適量，加0.1 mol/L鹽酸溶解，用微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.1.4 專屬性試驗 按比例精密稱取輔料適量，置于100 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸適量超聲30 min后再稀釋至刻度，搖勻，過濾，按照“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜；同時進樣測定消旋山莨菪堿對照品溶液、甲硫酸新斯的明對照品溶液和供試品溶液。結果，輔料在主峰處無吸收，說明輔料對消旋山莨菪堿和甲硫酸新斯的明的測定無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.1.5 線性關系考察 精密稱取消旋山莨菪堿對照品溶液和甲硫酸新斯的明對照品溶液適量，分別加0.1 mol/L鹽酸梯度稀釋制成消旋山莨菪堿質量濃度為0.003 5、0.007、0.014、0.028、0.056、0.112、0.224、0.448、 0.896、1.792 mg/mL的系列溶液和甲硫酸新斯的明質量濃度為0.002 5、0.005、0.01、0.02、0.04、0.08 mg/mL的系列溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件進樣測定。以質量濃度為橫坐標（x）、峰面積為縱坐標（y）進行線性回歸分析，得回歸方程為消旋山莨菪堿：y＝39 280x－157.35（R2＝0.999 5），甲硫酸新斯的明：y＝18 913x－0.299 9（R2＝1.000 0），表明質量濃度線性范圍分別為0.003 5～1.792、0.002 5～0.08 mg/mL。

2.1.6 重復性試驗 分別制備消旋山莨菪堿對照品溶液和甲硫酸新斯的明對照品溶液各6份，按照“2.1.1”項下色譜條件進樣測定。結果，峰面積的RSD分別為0.8%、1.2%（n＝6）。

2.1.7 回收率試驗 向空白輔料中分別定量加入消旋山莨菪堿對照品溶液和甲硫酸新斯的明對照品溶液，在線性范圍內稀釋得到高、中、低質量濃度的質控樣品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件進樣測定。計算消旋山莨菪堿的回收率分別為99.3%、97.0%、96.9%，RSD分別為0.8%、1.5%、1.9%（n＝3）；甲硫酸新斯的明的回收率分別為98.8%、96.3%、97.6%，RSD分別為1.0%、1.3%、1.6%（n＝3）。

2.1.8 精密度試驗 取質量濃度為0.896 mg/mL的消旋山莨菪堿對照品溶液和0.08 mg/mL的甲硫酸新斯的明對照品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件進樣測定。同日內測定6次，連續測定3 d，考察日內、日間精密度。結果，消旋山莨菪堿、甲硫酸新斯的明的日內RSD分別為0.8%、1.5%（n＝6），日間RSD分別為1.9%、1.6%（n＝3）。

2.2 體外累積釋放度的測定

采用漿法。以0.1 mol/L鹽酸溶液900 mL為釋放介質，轉速為50 r/min，溫度為37℃，分別于0.5、1、2、4、6、8、10、12 h取溶液10 mL（取液同時補充等溫、等量的釋放介質），過濾。精密量取濾液20 μL，按照“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算累積釋放度。

2.3 消旋山莨菪堿緩釋片的制備

2.3.1 制備工藝 按照處方精密稱量消旋山莨菪堿原料藥、緩釋骨架材料HPMC K4M、稀釋劑預膠化淀粉、崩解劑和填充劑MCC，分別過100目篩，混合30 min，制成藥物細粉，備用；另將4.5 g PVP K30溶于8 mL蒸餾水中，與上述藥物細粉混合，制成軟材，過20目篩制粒，60℃下烘干1 h，再加入潤滑劑硬脂酸鎂混合30 min，壓片制得消旋山莨菪堿緩釋片[8]。

2.3.2 處方篩選 以MCC調節片質量（300 mg/片，100片），篩選HPMC K4M含量（30%、20%、15%）對累積釋放度的影響，處方中其他組分為消旋山莨菪堿原料藥10%、預膠化淀粉8%、PVP K30 15%、硬脂酸鎂0.07%。結果表明，HPMC K4M的含量為30%時，所制片劑12 h的累積釋放度僅為76.8%，表明釋放不夠完全；HPMCK4M的含量為20%或15%時，所制片劑12 h的累積釋放度均為90%以上。綜合考慮前期突釋情況，確定HPMC K4M含量為20%，所制片劑12 h的累積釋放度為90.5%。HPMC K4M不同用量的消旋山莨菪堿緩釋片的體外釋放曲線見圖2。

圖2 HPMC K4M不同用量的消旋山莨菪堿緩釋片的體外釋放曲線（n＝5）Fig 2 Release curves in vitro of Raceanisodamine sustained-release tablet with different amounts of HPMC K4M（n＝5）

2.4 甲硫酸新斯的明緩釋片的制備

2.4.1 制備工藝 以“2.3.2”項下結果為依據，選擇20% HPMC K4M處方比例制備甲硫酸新斯的明緩釋片，片質量為300 mg。精密稱取甲硫酸新斯的明原料藥0.006 g、HPMC K4M 6 g、預膠化淀粉2.4 g和MCC 16.884 g，分別過100目篩，按照“2.3.1”項下方法制粒、烘干后，加入硬脂酸鎂0.21 g混合30 min，壓片制得甲硫酸新斯的明緩釋片。

2.4.2 體外釋放度測定 由于甲硫酸新斯的明的含量很低，為獲得釋放曲線，進行平行的釋放試驗。以5 mL的0.1 mol/L鹽酸為釋放介質，溫度為37℃，分別于0.5、1、2、4、6、8、10、12 h取樣測定累積釋放度。結果，甲硫酸新斯的明緩釋片前期釋放平緩，12 h的累積釋放度為93.5%，體外緩釋效果符合預期。20%HPMC K4M的甲硫酸新斯的明緩釋片的體外釋放曲線見圖3。

圖3 20%%HPMC K4M的甲硫酸新斯的明緩釋片的體外釋放曲線（n＝3）Fig 3 Release curves in vitro of Neostigmine methyl sulfate sustained-release tablet with 20%% HPMC K4M（n＝3）

2.5 復方山莨菪堿新斯的明緩釋片的制備

2.5.1 制備工藝 以“2.3”“2.4”項下結果為依據，選擇20%HPMC K4M處方比例制備復方山莨菪堿新斯的明緩釋片，片質量為300 mg。精密稱量消旋山莨菪堿原料藥5 g、甲硫酸新斯的明原料藥0.01 g、HPMC K4M 6 g、預膠化淀粉2.4 g和MCC 11.88 g，分別過100目篩，按“2.4.1”項下方法制得復方山莨菪堿新斯的明緩釋片。

2.5.2 體外釋放度測定 分別按“2.2”“2.4.2”項下方法測定復方山莨菪堿新斯的明緩釋片中消旋山莨菪堿和甲硫酸新斯的明的累積釋放度。結果表明，復方山莨菪堿新斯的明緩釋片中消旋山莨菪堿和甲硫酸新斯的明均前期釋放平緩，12 h時消旋山莨菪堿的累積釋放度為91.3%，甲硫酸新斯的明的累積釋放度為96.5%，均達到90%以上，實現了平行緩釋，達到預期。20%HPMC K4M的復方山莨菪堿新斯的明緩釋片的體外釋放曲線見圖4。

圖4 20%%HPMC K4M的復方山莨菪堿新斯的明緩釋片的體外釋放曲線（n＝3）Fig 4 Release curves in vitro of Compound anisodamine and neostigmine sustained-release tablet with 20%%HPMC K4M（n＝3）

3 討論

緩控釋制劑技術中，骨架片的工藝操作簡便、易于控制、成本較低，適合規?；I生產[9]。其中HPMC為最常使用的骨架材料，其含量會影響藥物的緩釋釋放行為。如果HPMC含量過度增加，片劑水化速度加快，會形成凝膠層，包裹藥物顆粒，使藥物釋放速率減慢，釋放總量也受到一定影響[10]。因此，本研究中考察了不同用量的HPMC K4M對山莨菪堿緩釋片釋放曲線的影響。結果顯示，HPMC在輔料中的含量達到20%時，藥物前期突釋在可控范圍內，在12 h時的累積釋放度可達90%以上，符合預期。

本研究通過濕法制粒和直接壓片法成功制備得到以HPMC K4M為緩釋骨架材料的復方山莨菪堿新斯的明緩釋片，釋放結果表明，兩者可以實現同步緩釋，釋放曲線基本一致，在12 h時山莨菪堿和新斯的明的累積釋放度分別為91.3%和96.5%，均達到90%以上。

雖然在申報新制劑前，該復方緩釋片劑還需進一步的優化研究，但本研究充分證明這兩個藥物成分在含量相差500倍的情況下，仍能通過簡單的濕法制粒和直接壓片法制備得到平行緩釋的片劑的可行性，從而為類似緩釋制劑提供了一種可進一步探究的制備方案。

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Preparation of Compound Anisodamine and Neostigmine Sustained-release Tablet and Study on the in vitro Drug Release Behavior

LI Yufei1，ZHOU Xiaoli2，JIN Tuo1（1.School of Pharmacy，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 200240，China；2.Wuxi Yuandao Pharmaceutical Technology Co.，Ltd.，Jiangsu Wuxi 214092，China）

OBJECTIVE：To prepare the Compound anisodamine and neostigmine sustained-release tablet and study the in vitro drug release behavior.METHODS：Using raceanisodamine and neostigmine methyl sulfate as main medicines，hydroxypropyl methyl cellulose as sustained release skeleton material，magnesium stearate as the lubricant，polyvinyl pyrrolidone as the adhesive，pregelatinized starch as the thinner，microcrystalline cellulose as the disintegrant and filler，Compound anisodamine and neostigmine sustained-release tablet was prepared by wet granulation method and direct compression method.The in vitro cumulative release rate within 12 h of the 2 main medicines was detected by HPLC method.RESULTS：Compound anisodamine and neostigmine sustained-release tablet was successfully prepared，and the in vitro release was basically completed within 12 h，with accumulative release rate of 91.3%for anisodamine and 96.5%for neostigmine.CONCLUSIONS：Compound anisodamine and neostigmine sustained-release tablet that can cumulatively release for 12 h is successfully prepared.

Anisodamine；Neostigmine；Compound sustained-release tablet；in vitro drug-release

R943

A

1001-0408（2017）22-3129-04

2017-04-30

2017-05-16）

（編輯：鄒麗娟）

上海市科技創新支撐計劃項目（No.15DZ1942402）

＊碩士研究生。研究方向：藥物緩釋制劑。電話：021-34205072。E-mail：lyf_520@outlook.com

#通信作者：研究員，碩士。研究方向：新藥研發。電話：0510-85380656。E-mail：zhouxiaoli1008@sina.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.22.28