黃芪甲苷和三七總皂苷配伍抗大鼠腦缺血再灌注損傷及其藥動學的研究

李靜嫻+楊筱倩+唐標+劉曉丹+唐映紅+鄧常清+黃小平

[摘要] 研究黃芪甲苷（AST Ⅳ）和三七總皂苷（PNS）配伍對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響，并從4種主要有效成分AST Ⅳ、人參皂苷Rg1（Rg1）、人參皂苷Rb1（Rb1）、三七皂苷R1（R1）在腦缺血再灌注大鼠體內的藥動學行為探討二者協同增強抗腦缺血再灌注損傷的機制。采用改良線栓法制備大鼠大腦中動脈栓塞腦缺血/再灌注模型，以神經功能評分、腦梗死面積、病理形態學指標綜合評價AST Ⅳ和PNS配伍抗腦缺血再灌注損傷的藥理效應；采用高效液相色譜-串聯四極桿質譜法（UPLC-MS/MS）測定給藥后不同時間大鼠血漿中AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1的含量，計算藥代動力學參數，分析AST Ⅳ和PNS配伍后主要有效成分藥代動力學行為的變化。結果發現AST Ⅳ，PNS單用及其配伍可以縮小大鼠腦梗死面積，降低神經功能缺失行為學評分，改善腦缺血后病理形態變化，AST Ⅳ和PNS配伍的效應強于二者單用。藥代動力學分析結果，AST Ⅳ和PNS配伍后，AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1的曲線下面積（AUC）顯著增加，平均駐留時間MRT0-t延長，達峰濃度（Cmax）顯著增加，表觀分布容積（Vz/F）減少，且體內清除速率顯著減慢。表明AST Ⅳ和PNS配伍具有協同增強抗腦缺血再灌注損傷的作用，且二者配伍可使主要有效成分的藥動學行為發生改變，提示其機制可能是AST Ⅳ和PNS配伍后，可在腦缺血狀態下延長藥物的體內滯留時間，使生物利用度增加，達到增強藥效、延長藥效、發揮協同增效的目的。

[關鍵詞] 黃芪甲苷； 三七總皂苷； 配伍； 腦缺血再灌注； 藥動學

[Abstract] The aim is to study the effect of astragaloside Ⅳ （AST Ⅳ） combined with Panax notoginseng saponins （PNS） on cerebral ischemia-reperfusion injury， and to probe the synergistic mechanism through the pharmacokinetics of the four major components such as AST Ⅳ， ginsenoside Rg1 （Rg1）， ginsenoside Rb1 （Rb1）， notoginsenoside R1 （R1） in cerebral ischemia-reperfusion rats. Following the establishment of cerebral ischemia/reperfusion model in rats by modified suture method， neurological function score， cerebral infarction area and pathomorphology were used to evaluate the pharmacological effect that the combination of AST Ⅳ and PNS antagonized cerebral ischemia-reperfusion injury； the contents of AST Ⅳ， Rg1， Rb1， R1 in rat plasma of different time points were determined with ultra performance liquid chromatography tandem massspectrometry （UPLC-MS/MS）， pharmacokinetic parameters were calculated and pharmacokinetics changes of the main effective components were analyzed. The results showed that AST Ⅳ， PNS alone and their combination could reduce the cerebral infarction area of rats， relieve the behavioral scores of neurologic deficit， improve the pathological changes after cerebral ischemia， the effects of the combination were better. Among AST Ⅳ， Rg1， Rb1， R1， the area under the curve （AUC） was significantly increased， the mean residence time of （MRT0-t） was delayed， the peak concentration （Cmax） was significantly raised， the apparent volume of distribution （Vz/F） was reduced， and the clearance rate in vivo was significantly slowed. It suggested that AST Ⅳ combined with PNS has synergistic enhancement on anti-cerebral ischemia/reperfusion injury， moreover， make the pharmacokinetic behavior of the main effective components change， the mechanism may be associated with prolonging the retention time of the effective components in cerebral ischemia condition， elevating the bioavailability.

[Key words] astragaloside Ⅳ； Panax notoginseng saponins； combination； cerebral ischemia/reperfusion； pharmacokinetics

腦血管疾病屬于中醫“中風”范疇，具有發病率高、致殘率高、死亡率高和復發率高等特點^[1]，是嚴重威脅人類健康的重大疾患之一。其中缺血性中風是腦血管疾病的主要類型，發病率約占中風的80%?，F代中醫臨床研究表明，腦缺血的基本病機是虛、火、風、痰、氣、血，而氣虛血瘀是缺血性中風的主要病理機制。因此，以益氣活血為基本治法治療?？墒盏搅己玫寞熜?。

黃芪和三七是治療心腦血管疾病的常用有效中藥，黃芪具有補氣升陽等作用，三七具有活血散瘀、消腫止痛等功效，二者配伍，符合益氣活血的治療原則^[2-3]。中藥藥物化學研究表明，黃芪中具有抗腦缺血作用的主要有效組分為黃芪總苷（astragaloside，AST），黃芪甲苷（astragaloside Ⅳ，AST Ⅳ）是其主要有效成分^[4]；三七中具有抗腦缺血作用的主要有效組分是三七總皂苷（Panax notoginseng saponins，PNS），主要含人參皂苷Rb1（ginsenoside Rb1，Rb1）、人參皂苷Rg1（ginsenoside Rg1，Rg1）和三七皂苷R1（notoginsenoside R1，R1）^[5-6]。前期研究表明，黃芪與三七的有效組（成）分配伍具有協同抗腦缺血再灌注損傷的作用，其機制與抑制神經細胞凋亡和炎癥反應、改善腦組織能量代謝、以及抗氧化應激和細胞自噬性損傷等有關^[7-10]。雖然以往已經初步揭示了黃芪和三七有效組（成）分配伍可以通過多環節、多靶點協同增強抗腦缺血的作用，但黃芪和三七配伍協同增效的物質基礎和作用原理還不是很清楚。推測黃芪和三七配伍可能通過影響中藥成分的藥代動力學行為，從而促進藥物的吸收并延長藥物在體內的駐留時間，發揮對腦缺血的協同增效作用。因此本研究采用大鼠腦缺血再灌注模型，研究AST Ⅳ和PNS配伍后抗腦缺血再灌注的藥理作用，并測定配伍前后不同時間點血漿中主要成分AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1的藥代動力學參數變化，探討AST Ⅳ和PNS配伍協同增效抗缺血性腦損傷的作用和藥動學的相關性。

1 材料

1.1 動物

SPF級雄性健康Sprague-Dawley（SD）大鼠，體質量220～250 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。動物合格證號為SCXK（湘）2013-0004。飼養于SPF級動物實驗室。實驗前適應性喂養飼養5～7 d，給藥前禁食12 h，自由飲水。

1.2 試藥

AST Ⅳ（純度≥98.05%，批號MUST-14102910），PNS（純度≥98%，批號MUST-14122912），Rg1（純度≥98.06%，批號MUST-14120407），Rb1（純度≥98.74%，批號MUST-15032211），R1（純度≥98.67%，批號MUST-14123111）均購自成都曼斯特生物科技有限公司，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC）（美國Sigma，批號BCBP3272V），水合氯醛（梯希愛化成工業發展有限公司，批號8MQ20-CC），甲醇、乙腈均為色譜純（德國Merck），水為超純水，其他試劑均為分析純。AST Ⅳ，PNS用時以0.5%羧甲基纖維素鈉配置成相應濃度混懸液。

2 方法

2.1 抗腦缺血再灌注損傷藥效實驗

2.1.1 分組及給藥 清潔級SD大鼠72只，隨機分為6組：假手術組、模型組、AST Ⅳ組、PNS組、AST Ⅳ、PNS配伍組（高、低劑量）。每組8只，采用灌胃給藥的方法（10 mL·kg-1）。劑量按前期實驗換算成大鼠用量：AST Ⅳ（28 mg·kg-1）組、PNS（80 mg·kg-1）組、AST Ⅳ和PNS高劑量配伍組（AST Ⅳ 56 mg·kg-1+PNS 160 mg·kg-1），AST Ⅳ和PNS低劑量配伍組（AST Ⅳ 28 mg·kg-1+PNS 80 mg·kg-1）。每日1次，連續灌胃2 d，于末次給藥1 h后制作腦缺血再灌注模型，再灌注期間同時給藥。假手術組及模型組大鼠給予等量生理鹽水。

2.1.2 腦缺血模型的制作 采用改良Longa法^[11-12]制作局灶性腦缺血模型。用10%水合氯醛（300 mg·kg-1）腹腔注射麻醉后，將大鼠頸前正中皮膚切開，鈍性分離右側頸總動脈（common carotid arteries，CCA）、頸外動脈（external carotid artery，ECA）、頸內動脈（internal carotid artery，ICA），用5-0手術線分別結扎ECA的遠端并于結扎點近側凝斷ECA及其分支，并對ICA遠側部進行活結結扎，動脈夾夾閉ICA遠側部與CCA。以直徑0.28 mm的尼龍線線栓自ECA經CCA分叉部插入ICA，松開ICA上的動脈夾，并將線栓插入ICA顱內段，插入長度約為（18±2） mm，活結扎住ICA內的線栓以防止出血和線栓的移動，縫合頸部皮膚。阻斷血流2 h后，拔出線栓進行再灌注。假手術組僅將CCA，ECA，ICA游離出來，不做插線處理，其他操作同模型組一致。

2.1.3 測定指標與分析 神經功能學評分：大鼠再灌注24 h后，按Longa法對動物的神經功能進行評分，標準如下^[12]：①0分，實驗動物正常，未觀察到神經功能缺失癥狀；②1分，實驗動物不能完全伸展腦缺血對側前爪（輕度）；③2分，實驗動物向腦缺血對側轉圈（中度）；④3分，實驗動物爬行時向腦缺血對側傾倒（重度）；⑤4分，實驗動物不能自發行走，意識喪失。1～3分作為腦缺血成功樣本入選。腦梗死面積：采用TTC染色法。再灌注24 h后，大鼠斷頭處死，迅速取腦，置于-20 ℃冰箱冰凍15 min，去除小腦、腦干等，將大腦均勻地切成5片2 mm連續冠狀切片。然后迅速將腦片置于2% TTC磷酸鹽緩沖液中，37 ℃恒溫水浴箱避光染色30 min，每5 min將腦片輕輕翻動1次。染色后，用4%多聚甲醛將腦片固定24 h。非缺血區組織為玫瑰紅色，梗死區組織為白色。 腦組織病理形態：采用HE染色法。再灌注24 h后，大鼠斷頭處死迅速取腦，放入4%多聚甲醛中固定2～3 d。經視交叉平面冠狀切取2 mm厚腦組織，經梯度酒精上行脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切成3 μm薄的切片，用于HE染色。HE染色切片在顯微鏡（10×40）下隨機取缺血皮質區5個非重疊的視野對損傷細胞進行觀察，損傷細胞表現為空泡樣變性、嗜酸性樣變性、核固縮、核溶解等改變。分別計數每個高倍視野中的細胞總數及損傷細胞數，計算細胞損傷率=（損傷細胞數/細胞總數）×100%。

2.1.4 統計方法 采用SPSS 17.0統計軟件進行統計分析，實驗數據用±s表示。各組間計量資料的比較采用單因素方差分析，配伍低劑量組和兩成分單用組的組間比較（因配伍低劑量組藥物劑量與兩成分單用組的藥物劑量相同）采用LSD法。P<0.05為差異具有統計學意義。

2.2 腦缺血再灌注模型下ASTⅣ和PNS配伍給藥后藥動學實驗

2.2.1 分組、給藥與樣品采集 SD大鼠，實驗前適應性喂養5 d，給藥前12 h禁食，自由飲水。根據前期實驗結果，選用配伍低劑量組進行藥動學的研究，將動物分為AST Ⅳ（28 mg·kg-1）組、PNS（80 mg·kg-1）組、AST Ⅳ+PNS配伍組（AST Ⅳ 28 mg·kg-1+PNS 80 mg·kg-1），每組3只。各組分別進行腦缺血再灌注模型的制作，并于造模后2 h分別灌胃給藥，給藥體積10 mL·kg-1；在給藥后0.083，0.25，0.5，1，2，3，4，6，12，24 h于大鼠心臟采血0.5 mL（為保證有足夠血量的抽取和防止低血容量引起動物死亡，在給藥前20 min于大鼠腹腔注射2 mL生理鹽水）。血樣置EDTA-K2抗凝試管中，4 ℃下3 500 r·min-1離心5 min，取上清液即得含藥血漿樣品，-80 ℃保存備用。

2.2.2 血漿樣品預處理 精密吸取100 μL血漿樣品置于具塞離心管中，加入480 μL無水乙醇沉淀蛋白，渦旋振蕩3 min后，12 000 r·min-1離心10 min，取上清液過0.22 μm濾膜（濾膜首先用甲醇沖過后空氣揮干）后待測。

2.2.3 標準品溶液的配制 精密稱取AST Ⅳ，Rb1，Rg1，R1對照品，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，得質量濃度分別為519，511，520，504 mg·L-1的對照品溶液，-20 ℃避光保存備用。

2.2.4 色譜條件 ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流動相A相為0.1%甲酸的水溶液，B相為0.1%甲酸乙腈溶液；流速0.3 mL·min-1；進樣量3 μL；梯度洗脫程序：0～1 min，25% B；1～4.5 min，25%～35% B；4.5～7 min，35%～55% B；7～8 min，55%～95% B；8～15 min，95% B；15～15.1 min，95%～25% B；15.1～20 min，25% B。

2.2.5 質譜條件 采用電噴霧離子源負離子模式（ESI-），多反應監測模式（MRM）。AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1的監測離子對分別為m/z 829.5→783.4，845.5→637.4，1 107.6→179.1，931.5→799.4，毛細管電壓4.0 kV，干燥氣溫度為335 ℃，流速為11 L·min-1，霧化氣壓力為40 psi。4種被測定成分質譜參數見表1。

3 結果

3.1 AST Ⅳ和PNS配伍對腦缺血再灌注損傷的影響

3.1.1 對神經功能缺失評分的影響 假手術組大鼠神經行為功能正常，行為學評分為0分。模型組大鼠出現了對側前爪不能完全伸展，或向對側轉圈或者傾倒的神經功能障礙，其神經功能缺失評分顯著高于假手術組（P<0.01）。與模型組比較，AST Ⅳ單用組、PNS單用組、AST Ⅳ+PNS配伍低劑量組和高劑量組的神經功能缺失評分顯著降低（P<0.01）。與AST Ⅳ單用組和PNS單用組比較，AST Ⅳ+PNS配伍低劑量組神經功能缺失評分顯著降低（P<0.01），見表2。

3.1.2 對腦梗死面積的影響 假手術組腦組織TTC染色示均勻紅色，未見有蒼白梗死區域。模型組出現較大范圍的蒼白梗死灶。與模型組比較，各用藥組的腦梗死面積縮小，且AST Ⅳ+PNS配伍的不同劑量組腦梗死面積縮小更為顯著，見圖1。

3.1.3 對腦組織形態學的影響 光鏡下可見，假手術組大鼠大腦皮質區細胞結構完整，形態規則，連接緊密，核仁清晰可見，間質無炎性細胞浸潤，神經纖維密集，排列緊密，偶見細胞損傷改變。模型組大鼠腦組織細胞周圍間隙增大，胞核不規整，毛細血管萎縮，間質水腫明顯，排列紊亂，細胞核深染固縮或出現嗜酸性樣變性，損傷細胞增多，損傷細胞顯著多于假手術組（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組大鼠細胞輕度腫脹，細胞間隙增大有所減輕，核固縮與嗜酸性樣變性細胞減少，細胞損傷程度減輕。與模型組比較，AST Ⅳ單用組、PNS單用組、AST Ⅳ+PNS配伍低劑量組和高劑量組損傷細胞數和損傷細胞率顯著低于模型組（P<0.01）。與AST Ⅳ和PNS單用組比較，AST Ⅳ+PNS配伍低劑量組損傷細胞數和細胞損傷率顯著減少（P<0.01），見表3，圖2。

3.2 AST Ⅳ和PNS配伍對腦缺血再灌注狀態下藥動學的影響

3.2.1 專屬性考察 空白血漿、空白血漿加AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1對照品和AST Ⅳ與PNS配伍給藥后血漿的色譜圖同，見圖3。由圖3可見，AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1的保留時間分別為 6.7，3.4，6.0，3.1 min，空白血漿在相同保留時間處無吸收峰，方法專屬性良好。

3.2.2 線性關系考察 精密吸取一定量的5種對照品儲備液于離心管中，用大鼠空白血漿分別稀釋成質量濃度為5，2，1，0.2，0.1，0.04，0.02，0.01 mg·L-1的系列血漿樣品，按2.2.2項處理，并按照2.2.4項檢測條件進行測定。以峰面積（y）對質量濃度（x）進行線性回歸，得標準曲線，并計算AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1線性回歸方程y=20.711 6x+3.182 9（r=0.998 7），y=104.308 4x-41.339 0（r=0.997 1），y=9.807 5x-1.179 4（r=0.999 1），y=26.797 7x-11.034 6（r=0.997 2）。在0.01～5 mg·L-1線性關系良好，按信噪比S/N≥3計，最低檢測限為0.01 mg·L-1。

3.2.3 精密度試驗 取9份100 μL空白血漿分別置具塞試管中，加入3種不同質量濃度的混合對照品溶液適量，用大鼠空白血漿配制成質量濃度分別為0.01，0.1，0.5 mg·L-1的低、中、高3種質量濃度質控血漿樣品，每個質量濃度樣品3份，按2.2.2項方法處理，并按照2.2.4項檢測條件進行測定，同一質量濃度樣品每1 h測定1次，共測定6次，計算日內精密度相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）；每天測定1次，連續測定6 d，計算日間精密度RSD。AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1的日內精密度RSD分別為3.6%，3.9%，2.1%，3.3%，日間精密度RSD分別為3.3%，4.5%，2.2%，4.3%，均<10%（n=3），表明所建立的檢測方法精密度符合藥動學分析要求。

3.2.4 加樣回收率及基質效應試驗 取空白血漿配制上述各成分低、中、高3個質量濃度的對照品血漿，同時以相同濃度的對照品進樣，每個質量濃度平行3份，按相同的預處理方法和色譜條件進行處理和測定。得到血漿中AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1的平均加樣回收率分別為100.4%，95.77%，99.05%，98.13%；RSD分別為0.83%，5.5%，1.2%，2.0%（n=3），表示回收率良好，滿足樣品測定要求，見表4。另取空白血漿，按2.2.2項處理獲得的上清液中加入相應質量濃度的對照品溶液，進樣測得峰面積A；相應質量的對照品溶液直接進樣測得峰面積B，計算基質效應=A/B×100%?；|效應分別為（99.31±2.61）%，（96.91±4.61）%，（95.05±2.32）%，（96.86±2.67）%，RSD均較小，符合藥動學研究要求。

3.2.5 藥動學參數測定和分析 藥物單用和配伍給藥后各有效成分在腦缺血再灌注大鼠體內的血藥濃度-時間曲線，見圖4。所得大鼠血藥濃度數據采用藥動學計算程序DAS 3.1.6 藥動學程序軟件進行擬合，采用非房室模型計算藥動學參數，數據以±s表示，得到的藥動學參數用SPSS 17.0進行分析，兩組間的比較，方差齊者采用成組t檢驗，方差不齊者采用Wilcoxon秩和檢驗。P<0.05為差異具有統計學意義，見表5。

與單用PNS相比，AST Ⅳ和PNS配伍給藥后，R1的曲線下面積（AUC）增大（P<0.01），平均駐留時間MRT0-t延長（P<0.05），半衰期（t1/2z）縮短（P<0.01），表觀分布容積（Vz/F）減少（P<0.01），清除率（CLz）減?。≒<0.01），藥峰濃度（Cmax）顯著增加（P<0.01）。顯示配伍給藥后，R1在體內吸收量顯著增加，分布減少，藥物停留時間延長，清除速度減慢。

與單用PNS相比，AST Ⅳ和PNS配伍給藥后，Rg1的曲線下面積AUC增大（P<0.01），平均駐留時間MRT0-t延長（P<0.01），表觀分布容積Vz/F減少（P<0.01），清除率CLz減?。≒<0.01），藥峰濃度（Cmax）顯著增加（P<0.01）。顯示AST Ⅳ和PNS配伍可使Rg1在體內的吸收量增加，分布減少，清除速率減慢，在體內的駐留時間延長。

與單用PNS相比，AST Ⅳ和PNS配伍給藥后，Rb1的曲線下面積AUC增加（P<0.01），平均駐留時間 MRT0-t顯著延長（P<0.01），半衰期t1/2z縮短（P<0.01），表觀分布容積Vz/F減少（P<0.01），清除率CLz減?。≒<0.01），藥峰濃度（Cmax）顯著增加（P<0.01）。顯示AST Ⅳ和PNS配伍可使Rb1在體內的吸收程度增加，分布減少，清除速度減慢，駐留時間延長。

與單用AST Ⅳ相比，AST Ⅳ和PNS配伍給藥后，AST Ⅳ的曲線下面積AUC明顯增加（P<0.01），清除率CLz減?。≒<0.01），藥峰濃度（Cmax）顯著增加（P<0.01）。提示AST Ⅳ和PNS配伍后可使AST Ⅳ吸收量顯著增加，體內清除減慢。

由此可見，AST Ⅳ和PNS 單用時4個有效成分的達峰濃度較低，曲線下面積較小，清除速率較快。AST Ⅳ和PNS配伍后，可使有效成分達峰濃度和曲線下面積增加。

4 討論

中醫歷來重視藥物的配伍應用，但中藥配伍并不是單個成分的簡單相加，更多地是通過配伍影響了中藥成分在體內的吸收和代謝，使藥物成分的藥代動力學行為等發生變化，從而促進藥物的吸收和進入病變部位，延長藥物在體內的滯留時間，使血藥濃度升高，發揮協同增強藥物效應的作用。黃芪和三七配伍符合益氣活血的治療原則，已有的臨床應用和實驗研究證明二者配伍具有協同增效抗腦缺血損傷的作用^[13-16]，而且以往的研究也證明二者有效組（成）分配伍可作用于腦缺血的病理生理多環節發揮協同作用，但配伍后是否影響各成分的藥動學還不清楚?；谥兴帍头降恼w性^[17-19]，本實驗建立了腦缺血大鼠血漿中AST Ⅳ，Rg1，Rb1，R1同時測定的LC-MS/MS方法，通過專屬性、線性關系、精密度、回收率實驗充分驗證此分析方法的可靠性，并運用此方法對腦缺血大鼠血漿中的黃芪和三七主要有效成分進行定量分析，獲得被測成分在腦缺血大鼠體內的藥動學參數變化，以闡明AST Ⅳ和PNS配伍協同增效抗缺血性腦損傷的作用機制。

局灶性腦缺血再灌注大鼠模型是評價藥物對腦缺血再灌注損傷常用的模型，與人類腦梗死發病情況類似^[20]。腦缺血后由于腦組織缺血缺氧，細胞損傷壞死，出現相應的形態損傷和功能異常，因此，用神經功能評分和病理形態學指標可評價其抗腦缺血的效應。研究結果表明，腦缺血再灌注后，大鼠神經功能障礙明顯，神經功能學評分顯著增高。與模型組比較，AST Ⅳ組、PNS組、AST Ⅳ和PNS配伍低、高劑量組神經功能障礙減輕，神經功能學評分顯著降低，且配伍低劑量組神經功能學評分顯著低于藥物單用組。表明AST Ⅳ和PNS配伍能協同改善腦缺血再灌注損傷大鼠的神經功能缺失，改善腦組織功能。TTC染色和HE染色結果表明，局灶性腦缺血再灌注后，大鼠腦組織出現梗死灶，細胞損傷明顯。與模型組相比，各用藥組腦梗死面積縮小，神經細胞形態改變均得到一定的改善，細胞損傷數量減少。AST Ⅳ和PNS配伍低劑量組較單用組比較，腦梗死面積縮小明顯，細胞損傷顯著減輕。提示AST Ⅳ和PNS配伍能協同延緩并減輕腦細胞的死亡，改善神經細胞的形態結構。從而從藥效學角度證明，AST Ⅳ和PNS配伍可以縮少腦梗死體積，減輕腦缺血后的病理形態學改變，減輕神經功能缺失癥狀。AST Ⅳ和PNS配伍可增強抗大鼠腦缺血再灌注損傷的作用。

藥動學結果表明，AST Ⅳ和PNS配伍給藥后，AST Ⅳ的Cmax顯著增加，CLz減小，AUC顯著增大。由此可見，配伍顯著影響了AST Ⅳ在腦缺血再灌注大鼠體內的藥代動力學行為，使其吸收程度增加，體內的清除減慢，從而使其在血液中的濃度升高，生物利用度增加。AST Ⅳ和PNS配伍給藥后，3個皂苷類成分的AUC均顯著升高，MRT0-t增大，CLz減小，Vz/F減少，且Cmax顯著升高。表明配伍給藥后，3個皂苷類成分在體內的吸收程度增加，停留時間變長，清除速度減慢，生物利用度顯著增加。提示AST Ⅳ和PNS配伍后能夠增加有效成分的吸收程度，增加藥物在腦缺血大鼠體內的含量，延長藥物的作用時間，提高生物利用度，從而達到增效的目的。

綜上所述，AST Ⅳ和PNS配伍具有增強抗腦缺血再灌注損傷的作用，其機制可能與二者配伍后，促進有效成分在體內的吸收，延長藥物的滯留時間，增加生物利用度，增強和延長藥效有關。從藥效學和藥動學角度揭示了黃芪和三七有效組（成）分配伍治療腦缺血的合理性。

[參考文獻]

[1] Savitz S I， Caplan L R. Vertebrobasilar disease[J]. New Engl J Med， 2005， 352（26）： 2618.

[2] Kang X Q， Fan Z C， Zhang Z Q， et al. Simultaneous determination of three Aconitum alkaloids in six herbal medicines by high-performance liquid chromatography[J]. J Chromatogr Sci， 2010， 48：860.

[3] Wang X， Zhang A， Sun H， et al. Future perspectives of Chinese medical formulae： chinmedomics as an effector[J]. OMICS J Radiol， 2012（16）： 414.

[4] Huang X P， Tan H， Chen B Y， et al. Astragalus extract alleviates nerve injury after cerebral ischemia by improving energy metabolism and inhibiting apoptosis[J]. Biol Pharm Bull， 2012， 35（4）： 449.

[5] Ng T B. Pharmacological activity of sanchi ginseng （Panax notoginseng）[J]. Pharm Pharmacol， 2006， 58（8）： 1007.

[6] Li H， Deng C Q， Zhang S P， et al. Total saponins of Panax notoginseng modulate the expression of caspases and attenuate apoptosis in rats following focal cerebral ischemia reperfusion[J]. J Ethnopharmacol， 2009， 121（3）： 412.

[7] Huang X P， Ding H， Yang X Q， et al. Synergism and mechanism of astragaloside Ⅳ combined with ginsenoside Rg1 aganist autophagic injury of PC12 cells induced by oxygen glucose deprivation/reoxygenation[J]. Biomed Pharmacother， 2017， 89： 124.

[8] Huang X P， Ding H， Lu X D， et al. Effects of the combination of the main active components of astragalus and Panax notoginseng on inflammation and apoptosis of nerve cell after cerebral ischemia-reperfusion[J]. Am J Chinese Med， 2015， 43（7）： 1419.

[9] Hang X P， Ding H， Wang B， et al. Effects of the main active components combinations of Astragalus and Panax notoginseng on energy metabolism in brain tissues after cerebral ischemia-reperfusion in mice[J]. Pharmacogn Mag， 2015， 11（44）： 732.

[10] Huang X P， Qiu Y Y， Wang B， et al. Effects of astragaloside Ⅳ combined with the active components of Panax notoginseng on oxidative stress injury and Nrf2/HO-1 signaling pathway after cerebral ischemia-reperfusion in mice[J]. Pharmacogn Mag， 2014， 10（40）： 402.

[11] 顧振， 韓群穎. 大鼠短暫性局灶性腦缺血模型改進的制作方法[J]. 南京醫科大學學報： 自然科學版， 2001， 21（6）： 513.

[12] Longa E Z， Weinstein P R， Carlson S， et al. Reversible middle cerebral artery ocelusion without craniectomy in rats[J]. Stroke， 1989， 20（1）： 84.

[13] 楊銘， 林海燕， 傅志泉. 黃芪注射液聯合血塞通治療氣虛血瘀型急性腦梗死臨床療效觀察[J]. 中華中醫藥學刊， 2017， 23（5）： 1077.

[14] 李行良. 黃芪注射液與血塞通注射液聯合治療急性腦梗死的療效觀察[J]. 中醫臨床研究， 2011， 3（9）： 32.

[15] 馮崇廉， 林素貞， 傅智麗， 等. 黃芪注射液聯合血塞通粉針治療缺血性腦卒中臨床研究[J]. 長春中醫藥大學學報， 2011， 27（6）： 924.

[16] 任周新， 李麗， 李君， 等. 黃芪總皂苷合三七總皂苷對實驗性腦缺血再灌注腦水腫和脂質過氧化的抑制作用[J]. 中華中醫藥學刊， 2008， 26（11）： 2486.

[17] Zhang A， Sun H， Wang P， et al. Future perspectives of personalized medicine in traditional Chinese medicine： a systems biology approach[J]. Complement Ther Med， 2012， 20： 93.

[18] Sun H， Wu F， Zhang A， et al. Pharmacokinetic study of schisandrin，schisandrol B， schisantherin A， deoxyschisan-drin， and schisandrin B in rat plasma after oral administration of Shengmaisan formula by UPLC-MS[J]. J Sep Sci， 2013， 36： 485.

[19] Yin Q， Sun H， Zhang A， et al. Pharmacokinetics and tissue distribution study of scoparone in rats by ultraperformance liquid-chromatography with tandem high-definition mass spectrom-etry[J]. Fitoterapia， 2012， 83： 795.

[20] Xu L， Fagan S C， Waller J L， et al. Low dose intravenous minocycline is neuroprotective after middle cerebral artery occlusion-reperfusion in rats[J]. BMC Neurol， 2004， 4： 7.

[責任編輯 張燕]